食用菌栽培技術(shù)基礎(chǔ)性實驗詳解

植物生產(chǎn)國家級實驗教學(xué)示范中心《食用菌栽培技術(shù)基礎(chǔ)性實驗》序號實驗項目名稱建議學(xué)時數(shù)每組人數(shù)122必選223必選324必選421必選523必選常見與栽培的食用菌主要是擔(dān)子菌亞門層菌綱和腹綱的一些種類，它們由雙核菌絲分化形成子實實）形狀因種類不同而有很大差別，故為我們認(rèn)識食用菌類別的主要標(biāo)志之一。使學(xué)生能找出食用菌次生菌絲的特征，分辨?zhèn)憔奈⒂^構(gòu)造；熟練制作標(biāo)本片，能在顯微鏡下快速找出目標(biāo)；并能分析圖像不清的原因或排除顯微鏡的某些故障。1.器具：光學(xué)顯微鏡、尖頭鑷子、解剖刀、解剖針、解剖剪、刀片、載玻片、蓋玻片、酒精燈、火柴、蕃紅染色劑、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙等。2.材料：平菇、草菇、香菇、蘑菇、金針菇等食用菌的斜面菌種與平板菌落，及其各種鮮子實體，三、實驗內(nèi)容與方法（一）實驗內(nèi)容1.次生菌絲體的觀察（菌苔形態(tài)及微觀形態(tài)的觀察）2.子實體的觀察（外觀形態(tài)及菌褶微觀構(gòu)造的觀察）1、次生菌絲體的觀察（1）肉眼觀察從顏色、菌絲生長勢、爬壁力、有無無性孢子、菌苔邊緣特征等方面進(jìn)行識別。（2）顯微鏡觀察中。放蓋片，顛吸水紙后用手指適當(dāng)按壓，將培養(yǎng)基壓碎，使其均勻平展于載玻片上。鏡檢：將標(biāo)本片固定于載物臺上，低倍鏡下找理想目標(biāo)，高倍鏡下觀察菌絲的分支、分隔、鎖狀聯(lián)合等2.子實體的觀察（1）肉眼觀察先觀察完整子實體，從顏色、大小、及其菌蓋、菌褶、菌柄、菌環(huán)、菌托等特征將各菌類的子實體用解剖刀縱切子實體，觀察菌蓋和菌柄等部分的組成。從菌肉顏色、質(zhì)地、菌褶著生情況；菌柄的質(zhì)地、粗細(xì)、是否中實等方面進(jìn)行比較。（2）微觀觀察水的培養(yǎng)皿中，切片要求薄而均勻。制片：載玻片中央滴蒸餾水，用解剖針挑取最薄的切片放于載片水滴中，放蓋片。1.表格總結(jié)平菇、蘑菇、草菇、金針菇、香菇等子實體各部分的宏觀特征2.出次生菌絲、擔(dān)子、擔(dān)孢子及子實層的圖像母種是菌種生產(chǎn)的關(guān)鍵，要求純度高，不能混生雜菌，同時母種的菌絲體較為纖細(xì)，分解培養(yǎng)料的能力較弱。因此，母種菌絲體需要培養(yǎng)在營養(yǎng)豐富，易被吸收，表面光滑易于鑒別有無雜菌感染的瓊脂1.器具：天平、稱量紙、牛角匙、精密pH試紙、量筒、刻度搪瓷杯、試管、三角瓶、漏斗、漏斗架、玻璃棒、燒杯、試管架、鐵絲筐、剪刀、棉花、線繩、牛皮紙、皮筋、紗布、電爐、菜刀、菜板、2．材料：馬鈴薯、葡萄糖或蔗糖、麩皮、瓊脂、水。三、實驗內(nèi)容與方法（一）實驗內(nèi)容1.制馬鈴薯濾液2.融化瓊脂3.培養(yǎng)基的分裝4．棉塞的制作1．配方（PDA）2．制作方法（1）制濾液馬鈴薯刮去粗皮，去芽眼，切成碎塊，稱量后放鍋中，加水1200~1300ml，將其煮沸20min。用雙層紗布過濾，取1000ml濾液。（2）化瓊脂將濾液加熱至即將沸騰時加入瓊脂，不斷攪拌（控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦）。瓊脂完全融化后加入剩余原料，并使其溶解（用熱水補足水量）。（3）分裝通過漏斗裝置，趁熱將培養(yǎng)基分裝于試管中，裝量約占試管高度的1/4（分裝三角瓶，其裝量以不超過其容積的一半為宜）。管口或瓶口不要沾染培養(yǎng)基。（4）制棉塞棉花以白色長絨的不脫脂棉花為宜。根據(jù)試管口大小取棉花，將其卷成棉塞，最好外包一層紗布。將棉塞塞入試管口。棉塞長度約6~7cm，塞入試管2/3。要求外表光滑，外包的紗布無皺折，松緊適宜等。A.正確;B.不正確（5）包扎管口堵入棉塞后7或9支試管扎一捆，棉塞部分用牛皮紙包扎。在包裝紙上標(biāo)明培養(yǎng)基名稱，制備組別和姓名、日期等。1.制取母種培養(yǎng)基時，配方中的天然原料應(yīng)怎樣處理？2.何時加入瓊脂？融化時注意什么問題？5.菌種培養(yǎng)時管口堵膠塞或軟木塞行嗎？為什么？高壓蒸汽消毒和常壓蒸汽消毒統(tǒng)稱濕熱滅菌。通過飽和蒸汽殺死物體上和介質(zhì)中的全部病原微生物使蛋白質(zhì)變性凝固、酶失去活性。1.材料培養(yǎng)基三、實驗內(nèi)容與方法（一）實驗內(nèi)容1.高壓鍋的構(gòu)造2.高壓鍋的使用3.斜面培養(yǎng)基的擺制4.滅菌效果的檢驗1.高壓鍋的構(gòu)造2.高壓鍋的使用3.斜面與平板培養(yǎng)基的制作將試管培養(yǎng)基趁熱斜置于木棍條上，傾斜度以培養(yǎng)基約占管長的1/2為宜，不要使其滾動。若溫度低可蓋毛巾，以免形成過多的冷凝水。趁熱將三角瓶中的培養(yǎng)基以無菌操作法注入無菌培養(yǎng)皿中，每皿的裝量15~20ml（剛覆蓋皿4.滅菌效果的檢驗將凝固的斜面培養(yǎng)基放入37℃溫箱培養(yǎng)2~3天，若光滑無雜菌生長，即可1.圖解說明培養(yǎng)基的配制過程，并指明要點。2.排除冷空氣的時機、目的及方法是什么？6.導(dǎo)致滅菌后的培養(yǎng)基長有雜菌的原因有哪些？該怎樣處理？7.滅菌在微生物實驗操作中有何重要意義?將母種移入新斜面培養(yǎng)基上的過程，稱為轉(zhuǎn)管。是一項重要的常規(guī)操作，常用的工具是接種環(huán)。無論引進(jìn)或自己分離的母種，都需要適當(dāng)傳代，使之產(chǎn)生大量再生母種，才能源源不斷供應(yīng)生產(chǎn)。將子實體、菌核、菌索等一小塊組織放于斜面培養(yǎng)基上，使其萌發(fā)為純菌絲的方法，稱為組織分離。該法具有簡便、易成功、能保持原菌種性狀等優(yōu)點，但重復(fù)多易退化，應(yīng)與孢子分離交替進(jìn)行。組織分離法適用于絕大多數(shù)食用菌（膠質(zhì)的耳類食用菌除外）。清楚無菌操作要點，熟練操作母種轉(zhuǎn)管、多孢分離及組織分離技術(shù)。能正確分析自己的接種結(jié)果。1.材料空白斜面培養(yǎng)基、平菇母種、平菇子實體等37％甲醛溶液、紫外燈、2%來蘇水、標(biāo)簽紙等。三、實驗內(nèi)容與方法（一）實驗內(nèi)容1.接種環(huán)境的處理2.母種的轉(zhuǎn)管3.組織分離4.多孢分離1.接種環(huán)境的處理（1）接種箱的熏蒸先用2%來蘇清潔接種箱內(nèi)外，放入接種所需的物品，用甲醛熏蒸。每立方米空間一般用甲醛10ml，加半量高錳酸鉀（5~7g）使甲醛氧化揮發(fā)。先將高錳酸鉀放入接種箱內(nèi)的容器中，再注入甲醛，立即產(chǎn)生強烈刺激的甲醛氣體。熏蒸時間至少保持30min以上。2.母種的轉(zhuǎn)管（1）手及菌種管的消毒用肥皂洗手，再用75％酒精棉球擦手和菌種管表面，在酒精燈焰上略燒試管外的棉塞后，立即將菌種管放入接種箱內(nèi)。（2）轉(zhuǎn)管兩手從接種孔伸人接種箱內(nèi)，酒精棉球擦拭接種環(huán)。左手持菌種管和斜面管，兩支試管朝上。然后，將棉塞在火焰上燒一下，立即塞入試管口，旋緊棉塞。接種環(huán)不要觸碰管口及管壁。接種后的試管應(yīng)立即貼標(biāo)簽，注明菌種名稱及接種日期，再進(jìn)行適溫培養(yǎng)。3.組織分離法適宜的情況下，能保持原菌種的優(yōu)良性狀。（1）種菇消毒在接種箱內(nèi)，用鑷子夾著燃燒的酒精棉球迅速擦拭菇體。4.多孢子分離（1）鉤懸法是一種特別適用于耳類，也適用于傘菌類的多孢分離法。左右條件下，約24h現(xiàn)孢子粉時以無菌操作法取出分離材料。適溫培養(yǎng)后挑取健壯尖端菌絲轉(zhuǎn)管。（2）孢子印分離法取成熟子實體經(jīng)表面消毒后，切去菌柄，將菌褶向下放置于滅過菌的有色紙上，在20～24℃靜置一天，大量孢子落下形成孢子印，接種環(huán)沾少量孢子在試管培養(yǎng)基上5.母種的培養(yǎng)將斜面朝下斜置疊放于瓷盤中，放于培養(yǎng)箱中適溫培養(yǎng)。2～3天后每天都要檢查菌絲生長情況。及時挑揀污染試管（出現(xiàn)粘膜或雜色）。6.注意事項（1）純化菌絲長至斜面1/2時，挑尖絲轉(zhuǎn)管，培養(yǎng)成再生母種。（2）出菇試驗將再生母種擴成原種、栽培種，使其出菇?？串a(chǎn)量、質(zhì)量、形態(tài)、長勢、抗性如何，鑒定為優(yōu)質(zhì)菌種后，才可供生產(chǎn)使用。（3）控制菌齡菌絲即將長滿斜面（一般7～10天）終止培養(yǎng)。分別用于菌種保藏或繁衍原種。2.分析自己接種成敗的原因。3.孢子分離的母種為何一定要做出菇試驗？4..試設(shè)計一個分離野生平菇菌種的實驗方案。是食用菌生產(chǎn)中的重要管理內(nèi)容。正確識別病蟲害的形態(tài)特征及侵染癥狀，分析產(chǎn)生的原因，能采取正確的防治方法。1.材料:被侵染的培養(yǎng)料和子實體2.器具:放大鏡、顯微鏡、解剖鏡、接種針、尖頭鑷、載玻片、蓋玻片、吸水紙、酒精燈、火柴、三、實驗內(nèi)容與方法（一）實驗內(nèi)容1.競爭性真菌侵染癥狀的識別2.真菌病害的識別3.主要蟲害的識別1.競爭性真菌侵染癥狀的識別外觀:用肉眼和放大鏡觀察根霉、毛霉、青霉、木霉、曲霉、鏈孢霉等競爭性雜菌的危害癥狀鏡檢:載玻片中央滴半滴無菌水或染色劑，無菌尖頭鑷取少許污染材料置于水或染液中，無菌接種針輕輕撥散，放蓋片。低倍鏡找理想目標(biāo)，高倍鏡下觀察各霉菌的形態(tài)特征。2.真菌病害的識別外觀用肉眼和放大鏡觀察褐腐、褐斑、軟腐病的危害癥狀。針輕輕撥散，放蓋片。低倍鏡找理想目標(biāo)，高倍鏡下觀察各霉菌的形態(tài)特征。3.主要蟲害的識別外觀用肉眼和放大鏡觀察菇蚊、菇蠅