第七章生物藥物的雜質(zhì)與安全性檢查課件

第七章生物藥物的雜質(zhì)與安全性檢查1精選版課件ppt一、概述1、雜質(zhì)的概念：藥物中的雜質(zhì)是指存在于藥物中無治療作用或者影響藥物的療效和穩(wěn)定性，甚至對(duì)人體健康有害的一種物質(zhì)。2精選版課件ppt2、藥物的純度是指藥物的純凈程度它反映了藥物質(zhì)量的優(yōu)劣。事實(shí)上，許多雜質(zhì)不可能完全除掉。只要將其降低到最低限度，不妨礙藥物的療效和人體的健康，不影響藥物的穩(wěn)定性以及調(diào)配處理，可允許藥物中有一定限量的雜質(zhì)存在。純凈的藥物是相對(duì)的，不純的藥物是絕對(duì)的。3精選版課件ppt藥物的純度（藥用規(guī)格或藥用純度）主要是從保證人民用藥安全、有效考慮，而化工產(chǎn)品及試劑純度并不考慮雜質(zhì)的生理作用，僅從雜質(zhì)可能引起的化學(xué)變化，在使用上所產(chǎn)生的影響以及它們使用的范圍和目的來加以規(guī)定。所以，二者不能相互代替使用。4精選版課件ppt3、藥物中雜質(zhì)的主要來源由生產(chǎn)中引入。如原料、中間體、副產(chǎn)物、殘留溶劑、器皿中金屬等貯藏過程中受外界因素的影響，引起藥物結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，水解、氧化、分解、聚合等。（與藥物的穩(wěn)定性有關(guān)）5精選版課件ppt4、藥物中雜質(zhì)的分類1)按來源分類：一般雜質(zhì)/特殊雜質(zhì)。一般雜質(zhì)是指在自然界中分布較廣泛，在多種藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中容易引入的雜質(zhì)，如氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽、酸堿、水分等。共12項(xiàng)，重點(diǎn)是前5項(xiàng)。特殊雜質(zhì)是指在藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中，根據(jù)該藥物的性質(zhì)、生產(chǎn)方法和工藝條件，有可能引入的雜質(zhì)。如阿司匹林中的游離水楊酸，鹽酸普魯卡因注射劑中對(duì)氨基苯甲酸，腎上腺素中的腎上腺酮等。6精選版課件ppt2)按其性質(zhì)分類：信號(hào)雜質(zhì)/有害雜質(zhì)。信號(hào)雜質(zhì)本身一般無害，但其限量的多少可以反映出藥物的純度水平，如限量過大，表明藥物的純度差，因此也稱為指示性雜質(zhì)。氯化物、硫酸鹽等就屬于信號(hào)雜質(zhì)。重金屬、砷鹽、氰化物等，對(duì)人體有毒害，為有害雜質(zhì)，在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中必須嚴(yán)格控制，以保證用藥的安全。3)按其結(jié)構(gòu)分類：無機(jī)雜質(zhì)/有機(jī)雜質(zhì)。7精選版課件ppt二、藥物中雜質(zhì)的限量檢查1、雜質(zhì)限量檢查藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量，叫做雜質(zhì)限量。藥物中雜質(zhì)的檢查，一般不要求準(zhǔn)確測定其含量，而只檢查雜質(zhì)的量是否超過一定的限量。這種雜質(zhì)檢查的方法叫做雜質(zhì)的限量檢查（Limittest）。在藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中雜質(zhì)檢查多數(shù)為限量檢查。8精選版課件ppt2、雜質(zhì)限量檢查方法對(duì)照法（最常用的方法）靈敏度法比較法3、雜質(zhì)限量的表示方法雜質(zhì)限量就是指藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量，是通過與一定量的雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行比較來確定，雜質(zhì)的最大允許量也就是雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（C）與體積（V）的乘積。雜質(zhì)的限量通常用百分之幾或百萬分之幾（ppm）來表示。9精選版課件ppt4、雜質(zhì)限量的計(jì)算10精選版課件ppt第二節(jié)一般雜質(zhì)檢查的原理與方法一般雜質(zhì)檢查包括：1、氯化物檢查法2、硫酸鹽檢查法

3、鐵鹽檢查法4、重金屬檢查法

5、砷鹽檢查法

6、酸堿度檢查法7、溶液顏色檢查法8、易炭化物檢查法9、澄清度檢查法10、熾灼殘?jiān)鼨z查法11、干燥失重測定法12、有機(jī)溶劑殘留量測定法11精選版課件ppt1、氯化物的檢查原理：Cl-+Ag+→AgCl↓（稀硝酸環(huán)境下）與氯化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液比較濁度方法與限量：

1）樣品配成水溶液約25ml(溶液如為堿性，可加硝酸使成中性)+稀硝酸10ml+硝酸銀試液1.0ml+水至50ml搖勻,2）與氯化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液（10μg/ml,5.0-8.0μg/50ml）對(duì)照管比較。12精選版課件ppt1）納氏比色管應(yīng)置于黑色背景下，自上而下觀察。2）加入稀硝酸可加速生成AgCl，濁度較好，另外還可避免碳酸銀，氧化銀，磷酸銀沉淀的干擾，以每50ml中含稀硝酸10ml為宜。3）溫度以30-40C濁度最大，室溫亦可。4）比色前應(yīng)在暗處放置5min，光照將使AgCl分解，影響比色。5）氯化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液用量5.0-8.0ml/50ml（10μg/ml）時(shí)濁度區(qū)別最為明顯13精選版課件ppt注意點(diǎn)：

1）溶液不澄清應(yīng)過濾后取續(xù)濾液檢查，但紙中含有氯離子，用含硝酸的蒸餾水洗濾紙，再過濾。2）溶液有色：①使其褪色，但不影響氯離子的測定（如檢查高錳酸鉀中的氯離子可先用乙醇褪色）；②將供試液分成兩份，一份加入硝酸銀反復(fù)沉淀，再在其中加入氯化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，配成對(duì)照液；另一份作為供試液。3）其它陰離子的干擾

I-、Br–干擾的排除：①加入一定量的酸和過氧化氫，加熱煮沸，使其氧化為I2和Br2揮發(fā)后，溶液澄清后檢查。②利用AgI沉淀穩(wěn)定，在氨溶液中不溶解，而AgBr、AgCl沉淀在氨溶液中溶解的性質(zhì)，除去I-的干擾。14精選版課件ppt4）不溶于水的藥物：①加水使氯離子溶解后，過濾，取續(xù)濾液檢查。②藥物在稀乙醇或丙酮中有一定的溶解度，可加稀乙醇或丙酮溶解后檢查，但對(duì)照液也應(yīng)用稀乙醇或丙酮配。

5）更難使氯離子溶出的藥物，如有機(jī)氯雜質(zhì)，可采取堿水解后檢查。有的需有機(jī)破壞。15精選版課件ppt2、硫酸鹽的檢查原理：SO4

2-+Ba2+→BaSO4↓白色（稀鹽酸環(huán)境下）與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液比較濁度方法與限量：

樣品配成水溶液約40ml(溶液如為堿性，可加鹽酸使成中性)+稀鹽酸2ml+25%氯化鋇溶液5ml,+水至50ml搖勻,與硫酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1mg/ml,1.0-5.0ml/50ml）對(duì)照管比較。16精選版課件ppt3、鐵鹽的檢查（影響藥物穩(wěn)定性）（一）硫氰酸鹽法（chp、usp采用）原理：Fe3++6SCN-→Fe(SCN)63-（稀鹽酸環(huán)境下）與標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液比較所呈顏色（紅色）方法與限量：

樣品配成水溶液約25ml+稀鹽酸4ml+過硫酸銨50mg,+水至35ml+30%硫氰酸銨溶液3ml+水至50ml,搖勻,與標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液（10g/ml,1.0-5.0ml/50ml）對(duì)照管比較。17精選版課件ppt

1）標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液（用稀硫酸配硫酸鐵銨FeNH4(SO4)2·12H2O，防止水解）濃度以50ml中含10-50g為宜，吸收度與濃度呈良好的線性關(guān)系，呈色梯度明顯。2）酸度以50ml中含稀鹽酸4ml為宜，所生成紅色最深。另外稀鹽酸可防止鐵水解和避免弱酸鹽的干擾。3）過硫酸銨可使供試液中的Fe2+→Fe3+；防止光線使Fe(SCN)63-褪色（Fe(SCN)63-遇光敏感，易還原或分解）。另外過量的過硫酸銨還可增加配離子的穩(wěn)定性，提高反應(yīng)靈敏度和消除氯化物與鐵鹽形成配合物的干擾。18精選版課件ppt3、注意點(diǎn)：

1）某些藥物（葡萄糖、糊精、硫酸鎂）在檢查過程中需加硝酸處理，則不加過硫酸銨，但需煮沸除氧化氮（NO、NO2），因硝酸中含有亞硝酸，能與硫氰根離子作用，生成紅色亞硝酰硫氰化物，影響比色。2）色調(diào)不一致時(shí)，可加正丁醇或異戊醇提取，取醇層比色，（Fe(SCN)63-在有機(jī)溶液中溶解度大，易于濃縮）。3）重金屬干擾的排除：某些重金屬將極大地干擾測定（如汞、銀、銅離子，形成絡(luò)合物或沉淀）。

19精選版課件ppt4）陰離子干擾的排除：氯離子、磷酸根離子、硫酸根等離子，與Fe3+形成無色配離子干擾檢查，可適當(dāng)增加酸度和增加硫氰酸銨試液的量，用正丁醇或異戊醇提取后比色。氯離子有影響，加入過量的硫氰酸銨可使氯離子干擾排除；硫酸根離子干擾較大，故不能在硫酸酸性條件下。

5）環(huán)狀結(jié)構(gòu)或不溶于水的藥物需熾灼后檢查。20精選版課件ppt4、重金屬的檢查（影響藥物穩(wěn)定性，

有毒，以鉛鹽為代表檢查）第一法：硫代乙酰胺法

僅適用于供試液澄清、無色、對(duì)檢查無干擾或經(jīng)處理后無干擾的藥物。原理：

CH3CSNH2+H2O→CH3CONH2+H2S

H2S

+Pb2+→PbS↓+2H+（pH3.5醋酸鹽緩沖液環(huán)境下）與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液比較所呈顏色（黃色到棕黑色）

21精選版課件ppt方法與限量：

樣品+pH3.5醋酸鹽緩沖液2ml+水適量使成25ml+硫代乙酰胺試液2ml（溶液總量為27ml）,放置2min，與標(biāo)準(zhǔn)鉛鹽按同法制成的對(duì)照液比較。1）納氏比色管應(yīng)置于白紙背景下，自上而下觀察。

2）標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液配法（10μg/ml硝酸鉛，取1-2ml,濃度以27ml溶液中含10—20μg的鉛）為防止鉛鹽水解，配制時(shí)，加入5ml硝酸，應(yīng)在臨用前配制，使用不超過一周。

3）酸度以pH3.5為宜，此時(shí)PbS↓完全，酸度增大，呈色變淺，酸度太大則不顯色。若供試品呈強(qiáng)酸性，則需堿化至中性，然后加入醋酸鹽緩沖液。22精選版課件ppt注意點(diǎn)：

1）供試品如有色，可采取外消色法（焦糖）,使兩管顏色相似或內(nèi)消色法。

2）若溶液中有微量的高鐵鹽存在，在弱酸性溶液中將氧化硫化氫析出硫，影響比色，可加入維生素C或鹽酸羥胺，使Fe3+→Fe2+，F(xiàn)e2+不干擾測定。

3）若供試品為鐵鹽，可使其與鹽酸絡(luò)合為HFeCl62-,用乙醚除去再堿化后用氰化鉀掩蔽微量的鐵鹽，加硫化鈉檢查鉛鹽（酸性條件會(huì)破壞絡(luò)合物）。23精選版課件ppt4）不溶性的硫化物應(yīng)作處理（加酸、堿或形成配合物），使其可溶后檢查。

5）配制供試品溶液時(shí)，如使用鹽酸超過1.0ml，氨試液超過2ml，或加入其它試劑進(jìn)行處理者，除另有規(guī)定外，對(duì)照液中應(yīng)取同樣同量的試劑置瓷皿中蒸干，同上進(jìn)行檢查。24精選版課件ppt第二法：熾灼破壞法

將供試品熾灼破壞后檢查或取熾灼的殘?jiān)M(jìn)行檢查的方法，適用于在水、乙醇中難溶的藥物，或能與重金屬離子形成配合物的有機(jī)藥物。原理：同第一法方法與限量：同第一法注意點(diǎn)：

1）熾灼溫度應(yīng)控制在500-600C，否則重金屬將損失。

2）熾灼的殘?jiān)孟跛峒訜崽幚頃r(shí)，要蒸干氧化氮，否則亞硝酸會(huì)氧化硫化氫析出硫而影響比色。

3）蒸干后加鹽酸使之成為氯化物，鹽酸中帶入重金屬的機(jī)會(huì)較多，應(yīng)作空白檢查。25精選版課件ppt第三法：硫化鈉法

適用于難溶于稀酸，但能溶于稀堿的藥物，如磺胺類、巴比妥類藥物。原理：S

2-

+Pb2+→PbS↓（在堿性條件下）與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液比較所呈顏色（黃色到棕黑色）方法與限量：

取供試品+氫氧化鈉試液5ml和水20ml使溶解+硫化鈉試液5滴，與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液比較所呈顏色。26精選版課件ppt第四法：微孔濾膜法

適用于含2-5μg重金屬雜質(zhì)的檢查（納氏比色管難以觀察的）。原理：同第一法方法與限量：

標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液制備：精密量取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，用水或規(guī)定溶劑稀釋成10ml+pH3.5醋酸鹽緩沖液2ml與硫代乙酰胺試液1.0ml,放置10min，用50ml注射器轉(zhuǎn)移至濾器中濾過（濾速為1ml/min），濾畢，取下濾膜，在濾紙上干燥即得標(biāo)準(zhǔn)鉛斑。另取供試液10ml,同上操作，與標(biāo)準(zhǔn)鉛鹽對(duì)照液比較。27精選版課件ppt5、砷鹽的檢查（一）、古蔡法（Gutzeit）原理

金屬鋅與酸作用生成新生態(tài)的氫，與藥物中微量的砷反應(yīng)生成具有揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞試紙，產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑。

28精選版課件ppt方法與限量：

1)標(biāo)準(zhǔn)砷斑用2ml，1μg/ml標(biāo)準(zhǔn)砷液相當(dāng)于2μg的砷，制備可得清晰的砷斑。

2)反應(yīng)液中加入碘化鉀和氯化亞錫能將As5+→As3+,碘化鉀被As5+氧化為碘分子又被氯化亞錫還原為碘離子，它與鋅離子能形成穩(wěn)定的絡(luò)合物，有利于砷化氫的不斷生成。另外，碘化鉀和氯化亞錫還能抑制銻化氫的生成（銻化氫也能與溴化汞試紙作用生成銻斑）。氯化亞錫又可與鋅作用，在鋅粒表面形成鋅錫齊，起去極化作用，從而使氫氣連續(xù)、均勻地發(fā)生。29精選版課件ppt3）鋅粒和供試品中可能含有少量硫化物，在酸性條件下產(chǎn)生硫化氫氣體，與溴化汞的色斑，干擾試驗(yàn)結(jié)果，故用醋酸鉛棉花吸收硫化氫。

4）醋酸鉛棉花的松緊程度應(yīng)控制。注意點(diǎn)：

1）所生成的砷斑不穩(wěn)定，應(yīng)干燥、避光、立即比較。

2）有機(jī)結(jié)合態(tài)的砷應(yīng)破壞后檢查（加酸或堿），但溫度應(yīng)低于600C。

3）供試品若為鐵鹽，能消耗碘化鉀和氯化亞錫，可加酸性氯化亞錫，使高鐵離子還原后檢查。

30精選版課件ppt4）供試品（硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽）若在酸性條件下生成硫化氫或二氧化硫，與溴化汞試紙作用生成黑色硫化汞和金屬汞，可先用硝酸處理，使其氧化為硫酸鹽。

5）銻鹽含量較多時(shí)，可改用白田道夫法檢查砷,其原理為氯化亞錫在鹽酸酸性條件下還原為棕褐色的膠態(tài)砷，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)砷鹽比較，本法的靈敏度為20μg（以As2O3計(jì)）。31精選版課件ppt（二）二乙基二硫代氨基甲酸銀法[Ag（DDC）法）]原理

同古蔡法，但砷化氫導(dǎo)出后與Ag（DDC）作用，生成紅色膠態(tài)銀，必要時(shí)可將吸收液移入吸收池，以Ag（DDC）為空白，在510nm處比色，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)砷鹽比較，還可測定含量方法與限量：

1）加入有機(jī)堿可促進(jìn)反應(yīng)的進(jìn)行，USP用0.5%Ag（DDC）的吡啶溶液（靈敏度高達(dá)0.5μgAs/30ml），ChP2000版用0.25%Ag（DDC）的三乙胺-氯仿溶液(靈敏度略低)。

2）銻鹽的干擾小。

32精選版課件ppt（三）、次磷酸法原理

在鹽酸酸性條件下，次磷酸還原砷鹽為棕色的游離砷，再與一定量的標(biāo)準(zhǔn)砷鹽比較。方法與限量：

1）用于硫化物、亞硫酸鹽以及含銻藥物的砷鹽檢查，不產(chǎn)生干擾。

2）靈敏度較古蔡法低。33精選版課件ppt注意三種檢查方法的生成物：古蔡法生成的是黃色至棕色的砷斑Ag（DDC）法生成的是紅色膠態(tài)銀

次磷酸法生成的是棕色的游離砷

34精選版課件ppt6、溶液澄清度檢查法檢查藥物中的不溶性雜質(zhì)，主要用于制備注射劑的原料藥或注射劑檢查。對(duì)照用的比濁液可用1.00%的硫酸肼與10%烏洛托品混合配制，生成的甲醛腙在水中形成白色渾濁，以不同量的水稀釋可得不同濁度的標(biāo)準(zhǔn)液。藥典中澄清的定義為：供試品溶液的澄清度相同于所用的溶劑，或不超過0.5號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液。35精選版課件ppt7、溶液顏色檢查法ChP采取兩種檢查方法：①目視比色法(黃色、藍(lán)色、紅色原液)②分光光度法③色差計(jì)法

36精選版課件ppt1、目視比色法：

取一定量的供試品，置于25ml納氏比色管中，加水溶解至10ml，另取規(guī)定色調(diào)色號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)比色液10ml,置25ml納氏比色管中,兩管同置白色背景，自上而下或平視觀察，供試品管所顯顏色與對(duì)照品管比較，不得更深。

標(biāo)準(zhǔn)比色液由重鉻酸鉀、硫酸銅、氯化鈷配成。2、分光光度法檢查有色雜質(zhì)：

配制一定濃度的供試品溶液，在規(guī)定波長測定吸收度，吸收度不得過規(guī)定值。3、色差計(jì)法：通過色差計(jì)直接測定溶液的透射三刺激值，對(duì)溶液顏色進(jìn)行定量表述和分析。目視法難以判斷時(shí)使用。37精選版課件ppt第三節(jié)、特殊雜質(zhì)的檢查原理方法特殊雜質(zhì)指在該藥物的生產(chǎn)和貯存過程中，根據(jù)藥物的性質(zhì)、生產(chǎn)方法和工藝條件，可能引入的特有雜質(zhì)。特殊雜質(zhì)的檢查方法，主要是根據(jù)藥物和雜質(zhì)在理化性質(zhì)和生理作用的差異來進(jìn)行。方法：（一）物理法

（二）化學(xué)法

（三）旋光法

（四）分光光度法（五）色譜法38精選版課件ppt一、物理法1、臭味和揮發(fā)性的差異

利用藥物中存在的雜質(zhì)具有特殊臭味，可以從臭味判斷該雜質(zhì)的存在。

檢查揮發(fā)性藥物中的不揮發(fā)物，利用藥物在室溫或加熱揮發(fā)后，殘留殘?jiān)?，于一定溫度烘至恒重，其重量不得超過規(guī)定，借以控制不揮發(fā)性雜質(zhì)。2、顏色的差異

某些藥物無色，而其分解變色產(chǎn)物有色，或在生產(chǎn)過程中引入了有色物質(zhì)，可通過檢查供試品溶液的顏色來控制有色雜質(zhì)的量。3、溶解行為的差異

有的藥物可溶于水、有機(jī)溶劑或酸、堿中，而其雜質(zhì)不溶；反之，雜質(zhì)可溶而藥物不溶。39精選版課件ppt二、化學(xué)法1、酸堿性的差異2、氧化還原性的差異

藥物是否易被氧化與還原與其氧化還原電位有關(guān)，氧化還原電位可受酸堿等諸多因素的影響，但從標(biāo)準(zhǔn)電位比較，?？煽闯瞿膫€(gè)易氧化，如果雜質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)電位較小，即說明較易被氧化。利用其易氧化的性質(zhì)，常可從反應(yīng)引起顏色的變化來檢查雜質(zhì)。3、雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生沉淀4、雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色

40精選版課件ppt5、雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生氣體例：氰化物檢查方法：

原理:氰化物在酸性條件或水溶液中，產(chǎn)生氫氰酸擴(kuò)散或逸出，遇試劑顯色。6、藥物經(jīng)有機(jī)破壞后檢查雜質(zhì)

有機(jī)藥物在生產(chǎn)過程中可能引入鹵素、硫、磷、硒等，作為雜質(zhì)必須檢查。但某些環(huán)狀藥物，這些雜質(zhì)以共價(jià)鍵與藥物分子結(jié)合，不能直接檢出，必須經(jīng)有機(jī)破壞，使雜質(zhì)游離，采用適當(dāng)?shù)姆椒z出。有機(jī)破壞方法多采用氧瓶燃燒法41精選版課件ppt第一法：儀器裝置：砷鹽檢查法的裝置，但使用時(shí)，導(dǎo)氣管不加醋酸鉛棉花，溴化汞試紙改為堿性硫酸亞鐵試紙。檢查法：供試品加入瓶中，加水10ml,與酒石酸溶液3ml，迅速將裝妥的導(dǎo)氣管密塞于瓶上，搖勻，小火加熱，微沸1min,取下堿性硫酸亞鐵試紙，加三氯化鐵與鹽酸各一滴，15min內(nèi)不得顯綠色或藍(lán)色。特點(diǎn)：靈敏度高，但不適用于在酸性條件下加熱會(huì)產(chǎn)生氰化物的藥物。42精選版課件ppt第二法：適用于在酸性條件下加熱會(huì)產(chǎn)生氰化物的藥物檢查法：取規(guī)定量的供試品，置磨口玻塞錐形瓶中，加水溶解成5ml，立即將精密加有三硝基苯酚鋰試液1ml的小杯（容積為5ml）平放入瓶底，密塞，在暗處放置過夜，取出小杯，加水2ml,混勻，于500nm處測定吸收度；另取規(guī)定量標(biāo)準(zhǔn)氰化鉀溶液（5μg/ml），加水至5ml，用同法處理所得的吸收度相比較，供試溶液的吸收度不得超過標(biāo)準(zhǔn)溶液。特點(diǎn)：靈敏度高，但影響因素較多如時(shí)間、溫度、顯色試劑的用量要與藥典一致。43精選版課件ppt三、光學(xué)分析法

1.旋光法具有旋光活性的藥物在制備過程中易引入光學(xué)異構(gòu)體，利用他們旋光性的差別，通過測定旋光度或比旋光度進(jìn)行雜質(zhì)限量控制。Eg：檢硫酸阿托品中的莨菪堿44精選版課件ppt2.分光光度法紫外分光光度法比色法紅外分光光度法原子吸收分光光度法45精選版課件ppt(一)紫外分光光度法根據(jù)藥物與雜質(zhì)結(jié)構(gòu)中紫外吸收光譜的差異，進(jìn)行雜質(zhì)檢查。

1）雜質(zhì)在某一波長有最大吸收，而藥物在此波長無吸收，通過控制供試品溶液在雜質(zhì)特征吸收波長處的吸收度來控制雜質(zhì)的量。Eg：檢腎上腺素中腎上腺酮(310nm處有吸收)

2）雜質(zhì)與藥物紫外吸收光譜重疊，但可改變藥物在某兩個(gè)波長處的吸收度比值來控制雜質(zhì)的量。（二）比色法（三）紅外分光光度法主要用于檢查藥物中低效或無效晶型。

46精選版課件ppt3.原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法利用藥物中所含待測元素?zé)舭l(fā)出的特征譜線通過供試品蒸汽時(shí)，被蒸汽中待測元素的基態(tài)原子所吸收，通過測定輻射光強(qiáng)度的減弱程度，可以求出供試藥物中待測元素的含量。優(yōu)缺點(diǎn)：1）專屬性強(qiáng)，主要用于金屬離子的測定。2）方法準(zhǔn)確，取樣量少，可分析ng級(jí)到pg級(jí)的金屬元素，速度快。3）應(yīng)用范圍廣，目前可測70種原子。4）一種燈只能測一種元素，價(jià)貴。47精選版課件ppt含量測定方法：

1）標(biāo)準(zhǔn)曲線法：在儀器推薦的濃度范圍內(nèi)，制備含待測元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液至少3份，濃度依次增加，并分別加入供試品溶液配制中的相應(yīng)試劑。除另有規(guī)定外，一般用去離子水制成水溶液。測定時(shí)，先將去離子水噴入火焰，調(diào)讀數(shù)為0，再將最濃的標(biāo)準(zhǔn)溶液噴入火焰，調(diào)讀數(shù)為滿標(biāo)度；然后依次噴入標(biāo)準(zhǔn)溶液，取每一濃度3次讀數(shù)的平均值，與相應(yīng)濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。按規(guī)定制備樣品溶液，使待測元素的估計(jì)濃度在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍內(nèi)，將供試品噴入火焰，取3次讀數(shù)的平均值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的濃度，計(jì)算元素的含量。48精選版課件ppt雜質(zhì)檢查法：

取供試品制備供試溶液；另取等量的供試品，加入限度量的待測元素溶液，制成對(duì)照溶液，并將對(duì)照溶液噴入火焰，調(diào)節(jié)儀器使具有合適的讀數(shù)（a）;在相同條件下噴入供試品溶液，讀數(shù)為（b）,b值要小于（a-b）。49精選版課件ppt四、色譜法色譜法是利用藥物與雜質(zhì)在吸附或分配性質(zhì)上的差異進(jìn)行分離分類：紙色譜法薄層色譜法高效液相色譜法氣象色譜法50精選版課件ppt（一）紙色譜法以紙為載體，以紙上所含水分或其它物質(zhì)為固定相，用展開劑進(jìn)行展開的分配色譜。常用于極性較大的藥物雜質(zhì)檢查。但展開時(shí)間長，斑點(diǎn)較易擴(kuò)散，不能用強(qiáng)酸的腐蝕性顯色劑，應(yīng)用少。51精選版課件ppt（二）薄層色譜法最常用于特殊雜質(zhì)限量檢驗(yàn)的一種方法（1）靈敏度法：在一定供試品及檢查條件下，不允許有雜質(zhì)斑存在（2）雜質(zhì)對(duì)照品法根據(jù)雜質(zhì)限量，取一定濃度已知雜質(zhì)的對(duì)照品溶液和供試品溶液，分別點(diǎn)加在同一硅膠（或其它吸附劑）薄層板上，展開和定位后檢查。特點(diǎn)：能較為理想地定量和定性，但首先須確認(rèn)雜質(zhì)為何物且制備該雜質(zhì)的對(duì)照品。52精選版課件ppt（3）供試品自身對(duì)照法

將供試品溶液按限量要求稀釋至一定濃度作為對(duì)照溶液，與供試溶液分別點(diǎn)加在同一薄層板上，展開后，定位，供試品溶液所顯雜質(zhì)斑點(diǎn)不得深于對(duì)照品溶液所顯主斑點(diǎn)顏色。

特點(diǎn)：1）當(dāng)雜質(zhì)結(jié)構(gòu)不能確定，或無雜質(zhì)的對(duì)照品時(shí)，可采用此法。2）較簡便，易于普及。3）要求雜質(zhì)與對(duì)照品的顯色靈敏度應(yīng)相同或相似。（4）對(duì)照藥物法無雜質(zhì)對(duì)照品、雜質(zhì)與供試品顯色差異較大時(shí)，取與供試品相同的藥物最對(duì)照。53精選版課件ppt（三）高效液相色譜法

(1)峰面積歸一化法

測量各雜質(zhì)峰的面積和色譜圖上除溶劑峰以外的各色譜峰面積，計(jì)算雜質(zhì)峰面積占總峰面積的百分率。

特點(diǎn)：1）不需對(duì)照品，簡便易行。2）記錄圖譜的時(shí)間應(yīng)為主峰保留時(shí)間的幾倍。3）通常只能粗略考察供試品的雜質(zhì)量，除另有規(guī)定外，一般不宜用于微量雜質(zhì)的檢查。54精選版課件ppt(2)主成分自身對(duì)照法

將供試溶液稀釋成一定濃度，作為對(duì)照液。分別取供試品溶液和對(duì)照品溶液進(jìn)樣，將供試品溶液中各雜質(zhì)峰面積及其總和，與對(duì)照液主成分峰面積比較，以控制供試品中雜質(zhì)的量。

特點(diǎn)：1）簡單方便，無須對(duì)照品。2）適用于雜質(zhì)與主成分峰面積相差懸殊時(shí)的雜質(zhì)檢查3）忽略了各雜質(zhì)與主成分的響應(yīng)值，可能不同。55精選版課件ppt(3)加校正因子的主成分自身對(duì)照法

精密稱取雜質(zhì)對(duì)照品和待測成分對(duì)照品各適量，配制測定雜質(zhì)校正因子的溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖，計(jì)算雜質(zhì)的校正因子。此校正因子可直接載入各品種正文，用于校正雜質(zhì)的實(shí)測峰面積。式中，AS為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高；AR為對(duì)照品的峰面積或峰高；CS為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度；CR為對(duì)照品的濃度。56精選版課件ppt再取含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，注入色譜儀，記錄色譜圖，測量供試品中待測成分（或雜質(zhì)）和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計(jì)算含量：式中，Ax為供試品或雜質(zhì)的峰面積或峰高；CX為供試品或雜質(zhì)的濃度。特點(diǎn)：1）準(zhǔn)確度好，考慮了雜質(zhì)與主成分響應(yīng)值的不同。2）必須有雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，國內(nèi)不普及，但國外藥典已不少見。57精選版課件ppt(4)內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量：

精密稱取對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，分別配制成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子測定的對(duì)照溶液。取一定量注入色譜儀，記錄色譜圖。測量對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，計(jì)算含量。58精選版課件ppt(5)外標(biāo)法：

精密稱取對(duì)照品和供試品，配制成溶液，分別精密量取一定量，注入色譜儀，記錄色譜圖。測量對(duì)照品和供試品待測成分的峰面積或峰高，按下式計(jì)算含量：特點(diǎn)：1）若用定量環(huán)進(jìn)樣，進(jìn)樣量準(zhǔn)確，定量好2）必須有雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品。59精選版課件ppt（四）氣象色譜法適用于揮發(fā)性雜質(zhì)及有機(jī)溶劑殘留量的檢查。檢查方法同高效液相色譜法（HPLC）60精選版課件ppt第四節(jié)安全性檢查熱原檢查法細(xì)菌內(nèi)毒素檢測法無菌檢查法異常毒性檢查法過敏反應(yīng)檢測法降壓物質(zhì)檢查法生涯物質(zhì)檢查法61精選版課件ppt一、熱原檢查方法概述

系將一定劑量的供試品溶液,靜脈注射家兔體內(nèi),在規(guī)定的時(shí)間內(nèi),觀察家兔體溫升高的情況,以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。熱原檢查是一種限度試驗(yàn)，反映了熱原質(zhì)引起哺乳動(dòng)物復(fù)雜的升溫反應(yīng)過程，具有直觀、代表性好的優(yōu)點(diǎn)，是一種成熟方法，各國藥典均有收載。62精選版課件ppt熱原檢查適用品種

主要用于生物制品、抗生素、生化藥品類注射劑及在生產(chǎn)過程中容易被微生物污染或適宜微生物繁殖化學(xué)藥品的注射劑；做靜脈注射的注射液，尤其是劑量較大的靜脈滴注藥，更要注意熱原檢查。某些抗生素、抗腫瘤藥品、放射性藥品等影響家兔正常體溫,因此不適宜采用熱原檢查法。目前存在著細(xì)菌內(nèi)毒素檢查逐步替代熱原檢查的趨勢。63精選版課件ppt方法研究與驗(yàn)證目前尚未見進(jìn)行方法研究的具體規(guī)定；一般情況下，確定給藥劑量與給藥體積后，取至少三批樣品進(jìn)行驗(yàn)證，若家兔未出現(xiàn)明顯的毒副反應(yīng)，體溫波動(dòng)正常，既認(rèn)為該樣品適宜采用熱原檢查法；有文獻(xiàn)報(bào)道，在樣品中外加定量的細(xì)菌內(nèi)毒素（劑量一般為5～10EU/kg），然后按確定的劑量與體積給家兔靜脈注射，若觀察到明顯的升溫過程，可認(rèn)為該樣品適宜采用熱原檢查法。64精選版課件ppt二、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法概述：

系利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。在GMP條件下，無內(nèi)毒素即無熱原，控制內(nèi)毒素就是控制熱原，這是用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法代替熱原檢查法的依據(jù)。兩種方法：凝膠法和光度測定法凝膠法為限量測定方法，光度測定法為定量測定方法65精選版課件ppt細(xì)菌內(nèi)毒素檢查凝膠法分為：限量試驗(yàn)和半定量試驗(yàn)；光度測定法包括：動(dòng)態(tài)濁度法、終點(diǎn)濁度法、動(dòng)態(tài)顯色法、終點(diǎn)顯色法兩種方法可任選一種進(jìn)行內(nèi)毒素的檢測當(dāng)測定結(jié)果有爭議時(shí)，除有另有規(guī)定外，以凝膠法結(jié)果為準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品：國家標(biāo)準(zhǔn)品——標(biāo)定、復(fù)核、仲裁工作標(biāo)準(zhǔn)品——復(fù)核、陽性對(duì)照66精選版課件ppt細(xì)菌內(nèi)毒素檢查適用品種：制劑：靜脈注射、鞘內(nèi)注射原料：無菌分裝原料靜脈注射用的抗生素類原料不可滅菌制劑的原料（如生化藥品、生物制品）制備分裝過程無法控制內(nèi)毒素的注射劑的原料67精選版課件ppt細(xì)菌內(nèi)毒素檢查一般步驟：收集樣品的有關(guān)信息——臨床用法用量、國內(nèi)外限值規(guī)定物理化學(xué)特性（如溶解性、水溶液pH值、是否具有酶活性、是否含有纖維素等干擾物質(zhì)）確定細(xì)菌內(nèi)毒素限值（L）和最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）

——L=K/MMVD=cL/λ預(yù)試驗(yàn)——主要目的是確定不出現(xiàn)干擾的第一個(gè)樣品稀釋度，也就是不干擾濃度,從而為后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇適當(dāng)?shù)南♂尪龋ɑ驖舛龋Ｕ皆囼?yàn)——照藥典方法進(jìn)行。68精選版課件ppt細(xì)菌內(nèi)毒素檢查注意點(diǎn)：要求每個(gè)品種至少檢測兩個(gè)生產(chǎn)廠家的各三批樣品，同時(shí)使用兩個(gè)鱟試劑廠家的鱟試劑進(jìn)行干擾試驗(yàn)。使用的鱟試劑過于靈敏，如樣品本身內(nèi)毒素偏高，則容易產(chǎn)生陽性，故在進(jìn)行干擾試驗(yàn)時(shí)，一般使用較低靈敏度的鱟試劑。對(duì)于只能使用高靈敏度鱟試劑才能排除干擾進(jìn)行檢測的品種，說明方法的粗放度不夠，耐用性不好，需慎重考慮。中藥注射劑成分比較復(fù)雜，干擾因素也多，進(jìn)行內(nèi)毒素檢查要慎重，也許用熱原檢查可能更合適。干擾試驗(yàn)與鱟試劑靈敏度無關(guān)，理論上某一濃度無干擾，則對(duì)各種靈敏度的鱟試劑都沒有干擾。69精選版課件ppt實(shí)驗(yàn)試劑鱟試劑從海洋無脊椎動(dòng)物“鱟”的藍(lán)色血液中提取的變形細(xì)胞溶解物，經(jīng)低溫冷凍干燥精制而成的生物制劑。鱟試劑的生物活性以其能檢出細(xì)菌內(nèi)毒素的最低有效濃度表示，即鱟試劑的靈敏度，單位為EU/ml。當(dāng)使用新批號(hào)的鱟試劑或試驗(yàn)條件發(fā)生可能影響檢驗(yàn)結(jié)果的改變時(shí)，應(yīng)進(jìn)行鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)。70精選版課件ppt實(shí)驗(yàn)試劑細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品

系自大腸埃希菌提取精制得到的內(nèi)毒素，用于標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)定，仲裁鱟試劑靈敏度。細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品

系以細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)標(biāo)定其效價(jià)，用于試驗(yàn)中鱟試劑靈敏度復(fù)核、干擾試驗(yàn)及各種陽性對(duì)照。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水

指內(nèi)毒素含量小于0.015EU/ml（用于凝膠法）或0.005EU/ml（用于光度測定法）且對(duì)內(nèi)毒素試驗(yàn)無干擾作用的滅菌注射用水。71精選版課