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文檔簡介
1.2基因工程的基本操作程序?qū)W習(xí)導(dǎo)航1.掌握目的基因獲取的常見方法。
[難點]2.學(xué)會基因表達(dá)載體構(gòu)建的方法和要求。
[重點]3.理解目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的具體過程。4.掌握目的基因檢測與鑒定的具體操作。
[要點]新知初探思維啟動一、目的基因的獲取1..從基因文庫中獲取目的基因?qū)⒑心撤N生物的不同______的DNA片段導(dǎo)入受體菌的群體中儲存,各個受體菌分別含有這種生物不同的基因,稱為基因文庫?;蚧鶅|因府文屋庫失包減括膏兩粘種伙:_齒_雹_紗_響_皇_喇_灘_文惕庫眾,獄即抹包億含米一床種她生第物奮所祥有賀基飯因基的己文悄庫送;_即_把_監(jiān)_興_敞_潮_伏_項_膛_文刑庫,即凡只恨包遞含村一嘴種表生緣瑞物烘的幫一晃部我分元基兼因牌的灘文皺庫吩,角如c需D麻N跡A文伶庫巖。2呆.利繡用P蘭C兩R技墊術(shù)械擴逮增抽目傾的塑基宏因(處1眨)迅P磚C陜R的袋含落義腹:狀是累一薯項乳在卸生替物_酬_者_(dá)翅_拳_逮_復(fù)書制賓特梨定D堡N釋A片暴段托的招核拿酸警合塔成蓮技市術(shù)柴。(獵2形)目構(gòu)的仗:糠短賓時功間賊內(nèi)豆大別量淋擴孟增茂目捧的廉基尸因脫。(怒3秀)原宋理屋:_弱_可_孝_崇_漲_心_革_弓_蠢_橡_聲_蔬_(dá)齡_輕_僵_?;庖蛑M部級分丸基稈因體秧外D塌N引A雙曾鏈杜復(fù)恰制(陳4爺)過且程慢:第勺一之步醫(yī):池加房誠熱桶至9待0~9悔5℃裙,_厭_羅_均_兆_帥_失_輪_派_怨_國_酒_掀_恥_丸_;第框二稿步斥:悶冷累卻花至_廟_管_表_饑_骨_邁_逢_豪_℃,美引孤物蹄與嬌兩偵條洽單疑鏈D陜N妖A相渾應(yīng)瞧互彩補漲序鍛列浩結(jié)透合運;第滲三煉步政:零加子熱擋至7狗0~7返5℃,謎熱怪穩(wěn)匹定D漸N憂A聚讀合吵酶(貝T摧a某q酶)從娛引蝦物恥起天始額進(jìn)狹行牛互蓄補丑鏈需的析合修成飛。如珍此霧重僚復(fù)偶循托環(huán)榨多萄次照。(筐5則)特妹點局:碎指蜂數(shù)作形胞式虛擴萌增執(zhí)。D仗N蘋A解欺鏈頃為傾單榆鏈5親5~6籌0想請一阿想1.P墻C奧R過男程絮中迎,蛛需驅(qū)要傅解無旋賴酶秘嗎患?蠶所乞需防要昨的D抽N潛A聚搏合斬酶柔應(yīng)信具甜有妻什帽么允特凍點索?【提槽示】P濁C凳R過渴程愉中軌,D懼N蛇A雙親鏈乏解衡開蜜是爛在諒高況溫慮下獨完她成悉的貓,蔥不其需需要猶解偏旋輛酶座;司由串于P爸C延R過軋程熔溫楚度王較強高治,煮所鴿以疾需定要戒能恨耐嗓高存溫泳的D蠟N直A聚啄合織酶侵。3河.用亡化乘學(xué)衫方貼法陽人盯工弱合奔成如漿果吳基竹因顛比騙較_的_堂_句,核箱苷片酸炕序槍列鬼又枕已殘知,也唱可房誠以不通胃過D射N榨A合支成赤儀餐用裁化族學(xué)堆方宜法槽直柱接位人蛙工噴合途成叨。二慣、悔基忙因卵表躁達(dá)淋載種體凳的斑構(gòu)壤建基公因吹表菠達(dá)鬼載鑰體撒的食組嫩成絨:陜必共須棚有稅啟脊動錯子歉、_蓋_被_抓_臘_傻_皆_鐘_瓦_(dá)肉_爐_痕_、荒終勝止到子狗以遭及奪標(biāo)遇記獎基必因醉等火。小目劉的回基早因三臉、屢將們目倉的閥基創(chuàng)因幼導(dǎo)炒入涼受阻體竭細(xì)述胞1混.紗.轉(zhuǎn)追化_聽_贈_吸_安_瞎_報_許_乞_蘿_諷_進(jìn)譜入效受余體妙細(xì)絮胞蘇內(nèi)票,畜并押且暈在揭受華體矩細(xì)敢胞剪內(nèi)漢維課持委穩(wěn)架定億和臣表峽達(dá)檢的筋過護程恐,裁稱襖為陡轉(zhuǎn)敵化忙。2德.常析用渠的扒導(dǎo)擁入乳方母法(騰1貪)將鵲目脆的敗基灰因?qū)?dǎo)或入戒植灰物插細(xì)邀胞臉:愿采瓶用外最搞多許的跡方常法歐是_搖_醉_眉_串_泛_底_跡_轉(zhuǎn)音化變法絲式,視其套次斬還囑有兄基露因廣槍碼法未和轎花甜粉襲管狡通威道惠法孫。目謠的逗基惕因農(nóng)捏桿蛋菌(討2恭)將寇目救的找基爐因翻導(dǎo)始入贊動膊物訓(xùn)細(xì)鉤胞證:投最粒常婚用旨的勇方俊法糟是_割_傅_事_才_剃_敗_焦_呀_宮_技養(yǎng)術(shù)蓮。使此鮮方宿法蠶的圣受嶼體咐細(xì)墾胞考多此是_狹_填_味_臭_寶_箏_弦_件_。(瘦3昨)將歷目隨的牽基業(yè)因稼導(dǎo)伙入淋微爐生憂物城細(xì)壯胞昏的舍方隸法素:①用_珠_震_府_砍_熊_窗_處返理飲細(xì)散胞趴,攏使典細(xì)啦胞怕處肚于薪能飄吸駁收重周叉圍撿環(huán)則境礎(chǔ)中D慮N基A分估子銹的姑生濫物艙狀修態(tài),這睬種鮮細(xì)坊胞蛋稱格為_吩_米_可_耍_伙_肚_搞_細(xì)瘦胞段。②固將托重?fù)p組箱表弱達(dá)撞載鈴體D唯N突A分煩子歪與遍感菜受杰態(tài)阻細(xì)拒胞損混趴合芬,服在齡一歲定熄溫榨度腳下善完賣成右轉(zhuǎn)諷化插過療程絡(luò)。顯侍微滿注疲射受喝精談卵C臺a2+感溉受古態(tài)想晨一羽想2.羊從崗細(xì)糟胞床器戲的絮功路能搜上蜜分倉析患,鞏若吊通獄過云基灑因梨工陰程寺生定產(chǎn)始人恨的卸糖級蛋拘白價,啦可朱以嗓用份大趣腸扎桿說菌葉嗎壟?【提隱示】不丟可劉以泡,納糖儲蛋梅白挎上貢的腹糖發(fā)鏈倡是深在虎內(nèi)脫質(zhì)擊網(wǎng)森和恥高區(qū)爾旅基化體橡上忘加藝工懂完臨成蘇的饑,耐而甘內(nèi)勺質(zhì)答網(wǎng)否和畢高義爾桿基炊體埋存源在永于輛真宰核繞細(xì)償胞拳中狠,是大蹲腸盯桿疾菌環(huán)是殖原擠核攏生遣物籌,齡細(xì)遷胞垮中愉不夏含桌有器這吸兩鍵種靈細(xì)乳胞缺器喪。四哄、舌目拋的伙基物因惱的開檢旬測隸與袍鑒餃定1辱.壺.首靠先姻要缺檢請測健轉(zhuǎn)存基度因汪生腦物租的D蠟N碌A(chǔ)上院是比否劃插霞入四了_折_刷_傻_鼓_斜_截_繼_漏_刪,方妹法商是旁采志用_進(jìn)_岡_礦_梁_愚_儀_酬_卡_脅_貪_樂_國_都_技厭術(shù)利。2既.其前次捷還敬要博檢淋測暮目你的丑基委因傅是艷否久轉(zhuǎn)薪錄測出躺了_薦_昨_仙_撈_遣_廁_咱_招,方童法鄙是雞采拐用_獎_途_拿_費_酬_己_枕_感_撥_技棋術(shù)吹。目作的捉基御因D獅N州A分券子們雜巾交m帝R刑N胃A分臺子定雜猶交3洗.最述后門檢脆測栽目子的逐基甜因若是亡否間翻膏譯常成_購_凡_梅_劑_素_旦_作_火,從氣分襖子效水蓮平聚檢絹測嘉的土方疲法如是賴采質(zhì)用_象_凱_腫_睡_奔_擇_殘_尺_(dá)傲_浙_鄭_轉(zhuǎn)_勾_技肆術(shù)第。4礙.有而時疾還駱需稼進(jìn)灣行_胳_鴿_嚷_膠_姜_攔_程_感_猾_洞_水肌平泛的展鑒艷定筍。換如伸需脖要拐做港抗填蟲駱或沖抗宵病窗的頂接煮種庸實組驗奏等獎。蛋肅白腐質(zhì)抗鳴原—抗抄體扇雜屢交個償體骨生押物假學(xué)要點突破講練互動要虎點絕一“目鴉的鄉(xiāng)豐基友因研的戴獲違取”應(yīng)貫注妄意嚇的熟幾搞個卻問促題1離.止.儀P允C減R技虜術(shù)總與D件N臉A復(fù)吹制很的腐比越較比較項目DNA復(fù)制PCR技術(shù)區(qū)別解旋方式解旋酶催化DNA在高溫下變性解旋場所細(xì)胞內(nèi)(主要在細(xì)胞核內(nèi))細(xì)胞外(主要在PCR擴增儀中)比較項目DNA復(fù)制PCR技術(shù)區(qū)別酶DNA解旋酶、DNA聚合酶耐熱的DNA聚合酶溫度細(xì)胞內(nèi)溫和條件控制溫度,需90℃~95℃高溫結(jié)果合成DNA分子合成DNA片段或基因聯(lián)系(1)模板:均需要脫氧核苷酸雙鏈作為模板(2)原料:均為四種脫氧核苷酸(3)酶:均需DNA聚合酶(4)引物:都需要引物,使DNA聚合酶從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸2并.人紡工濫合上成稻目園的陵基屢因告常斧用梳方曬法人懷工瞞合腐成相目近的嬸基椅因飽的暗方糧法葬主槽要嚷有訴兩頑種籌。(顯1神)反朋轉(zhuǎn)我錄價法功,朗主滲要窯用辣于礎(chǔ)相裝對配分某子出質(zhì)棗量掃較犬大酒而吊又鞠不距知章其徒序偷列斯的子基躍因攀,情它斯是使以潮目餓的應(yīng)基進(jìn)因回的m閣R失N甚A為號模管板碎,朋借霞助遠(yuǎn)反米轉(zhuǎn)楊錄銹酶市合計成揀堿怪基云互念補欄的尸單彩鏈D鴿N透A,揉然械后傅在D斃N息A聚刷合扶酶尼的派作講用疼下哀合噸成到雙殿鏈D離N汁A,殃其盞過格程燦如聚下拳:(掛2發(fā))化繩學(xué)坊合污成捎法估,徒即勁依咽照弱某冶一矩蛋共白判質(zhì)良的碎氨跌基娃酸羽序吉列販,弟通禮過怒密爐碼攜子匹推南算諷出典其制基司因萌序球列非,仇然脂后徒直哀接閱合巨成押目材的知基爆因癢,踢其遷過懲程迷如樸下躁:(禮2召0傅1果2恒·青勵島貞市杜高窗二騾期掩末)伴1戰(zhàn)9攤7獵0年泰,雪科亡學(xué)倚家船證唐實努了R馳N停A病代毒象能絕依紋賴R遮N論A合唉成D較N弓A的窗過醬程鉛,遼并晨發(fā)蕉現(xiàn)謙了火催辯化惑此纖過兆程膜的別酶襲。銀下予面泄為耳形顛成c頁D讀N綿A的缸過基程勿和P追C蓋R擴差增示過槽程貌示必意辭圖墊。漏請矩根勝據(jù)脂圖墓解寬回形答危下扔列勒問倉題虜:例1(洽1霧)催鉤化①過降程渠的若酶捏是_看_墓_霸_念_啄_脆_固_;呢核艙酸司酶H的鼓作勻用他是_臥_欣_棟_永_久_顯_仇_。(苗2杠)③過穩(wěn)程覆也老稱秧為D叮N訪A的挽變寶性賠,吉此湊過留程項在茶溫弄度未高染達(dá)9腿0~9亦5℃時貪才窄能傾完勻成視,達(dá)說休明D喝N描A分誘子臂具傾有_埋_消_艘_封_仿_跨_延_性爆。(谷3伶)由負(fù)圖意中漫信切息拐分肅析糾可廟知躁,俘催示化②性⑤過廢程主的績酶喝都疼是_品_咽_藥_催_(dá)寬_捷_牢_懂_蒸_倆_眼_院_常_,致兩室者釣在膛作鼓用零特訴性務(wù)上舞的訓(xùn)區(qū)壓別煌是_磁_沿_斯_屈_哲_尼_亡_或_繳_鋤_雞_桐_役_銀_練_污_疼_膠_地_縮慧_幟_略_誦_癥_理_誼_拋_惜_留_五_紐奉_顯_庭_擦_巾__亭_離_王_脅_待_堆_姨_服_嘆_假_閘_婦_掏_求_賞_愧_搶_癢_痛_裹_微_師_尼_日_房誠_奶_啄_影_貍_第_師_弓_蹄_片_醫(yī)_。(寧4崇)如疏果R澤N康A(chǔ)單傻鏈搖中悔有烏堿諷基1閉0同0個花,季其爆中A占2龜5晴%,U占1灰5景%,艱則題通逝過博該爽過富程閃合促成矩的貪一暮個亂雙怪鏈D針N歡A片世段智中哨有熱胞賴嘧川啶_駱_鑄_裳_再_梅_師_窄_個令?!窘庾形觥扛鴵?jù)規(guī)圖臂示孔可燥以脫看涼出靜,學(xué)該隙過酬程畝是R縮慧N寸A在昆逆繳轉(zhuǎn)離錄表酶條的里催均化暴作悠用陡下全形轎成c酬D榴N歡A跑(負(fù)期鏈D拿N話A抄),郊構(gòu)裂成R焦N沒A蛙—組D矩N歉A中波間農(nóng)體痕。便中橫間肆體沉中謀的R陸N劇A再換經(jīng)樓過R幫N急A酶H水易解侄,買而逮以檔剩夏下院的器負(fù)瘡鏈D負(fù)N免A復(fù)另制能成僅雙段鏈D質(zhì)N鋤A。騰①已過浴程屯是鈔由R切N屑A合自成D婦N兇A的缸過欄程截,杯需救要藏逆挽轉(zhuǎn)遵錄頃酶近進(jìn)筋行征催晴化檢。文②央過櫻程唯是碎以套單黃鏈D肯N欣A復(fù)托制享獲勵得奧雙千鏈D把N牽A的冒過脂程壤需昆要D妹N雜A聚零合顯酶哀催緣瑞化襪。⑤數(shù)屬網(wǎng)于神雙路鏈D標(biāo)N遠(yuǎn)A復(fù)敲制煎的風(fēng)過厘程錦,申需紫要D亞N足A聚堆合偷酶后催倚化得。漠⑤投過烘程痛在7斬0~7錦5℃環(huán)爆境惜下撕進(jìn)勻行烈,鏡所氏需米要密的移酶牌能登夠呼耐嶼高籌溫姥。【答炮案】(承1套)反桶轉(zhuǎn)摔錄刮酶(或茫逆吉轉(zhuǎn)棉錄喂酶)分直解R訂N禁A(怠2宏)穩(wěn)路定(御3輝)語D竟N糖A聚幣合駁酶嚼催奏化⑤過步程理的綠酶液耐采高銹溫(艙4晶)構(gòu)6絨0互算動安探悠究(齡1廉)上改述拜過嘗程脊中為需代要亮限著制岸酶戰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棉硬的叨培柴育分過截程該為勺背估景,考予查桃了需運錄用測基半因號工棋程首技芹術(shù)餃生會產(chǎn)唇轉(zhuǎn)罰基撈因買作針物片的牙步休驟萌、卵方活法括。(默1傳)惑T文i質(zhì)違粒匹的閘最慶大維優(yōu)食點丈是盤能深將段目詳?shù)脑苹匾蛴蛯?dǎo)顆入財?shù)搅质芷俭w融細(xì)竟胞凳的壁染油色即體D衰N避A中渡,尸從舍而閣使辭目淹的山基行因殼在封棉挪花錫體艙內(nèi)犬穩(wěn)謀定液維膊持驢和遼表賣達(dá)紋。(送2菊)目窩的普基車因災(zāi)進(jìn)往入萬受瞎體附細(xì)凳胞宣內(nèi)輕,嘆并企且上在非受哲體援細(xì)鋼胞廚內(nèi)毯維種持騾穩(wěn)野定低和蛋表染達(dá)懼的半過慨程僻稱逐為脆轉(zhuǎn)麗化騎。(緣瑞3請)將航目敲的候基柏因綠導(dǎo)珍入睬植垂物升細(xì)漂胞鞏的掀方排法良很里多瓦,澡以埋農(nóng)醫(yī)桿槽菌撒中快的T濫i質(zhì)騰粒京為棄目惕的尿基揭因炒載勒體無的你稱習(xí)為香農(nóng)擊桿崇菌懇轉(zhuǎn)選化侮法街。(要4福)目朝的借基鏈因祖能收否葡在向真舍核障生洽物擾中或穩(wěn)成定貪遺滋傳壺的誕關(guān)危鍵平是常轉(zhuǎn)辛基莊因晨生漲物緊染描色遠(yuǎn)體重的D誼N盜A上察是躲否趴插壩入漠了帶目頸的圾基寫因箭?!敬鹦浮?彎1好)可堪轉(zhuǎn)國移生至值受毛體曾細(xì)弊胞掠并彩且劫整惱合涌到孟受繼體浙細(xì)注胞寧染趙色柴體D既N補A上(圍2雹)轉(zhuǎn)宋化(指3廈)農(nóng)綿桿獻(xiàn)菌襲轉(zhuǎn)返化非法(明4賊)目桂的肝基哪因范是露否位插梳入劫到王受選體肺細(xì)鳥胞評染繼色再體D電N稱A上【探往規(guī)烘尋句律】目坦的誦基淺因駝導(dǎo)嚼入鋒受完體盯細(xì)父胞孝的缺結(jié)調(diào)果要尸點續(xù)四鼻目肝的旁基棉因振的咐檢擺測需與各鑒極定類型步驟目的原理過程結(jié)果分子水平檢測第一步轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入了目的基因DNA分子雜交含目的基因的DNA探針與轉(zhuǎn)基因生物的基因組DNA分子雜交若有雜交帶,說明插入成功第二步目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA分子雜交含目的基因的DNA探針與轉(zhuǎn)基因生物的mRNA雜交若有雜交帶,說明轉(zhuǎn)錄成功類型步驟目的原理過程結(jié)果分子水平檢測第三步目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗原—抗體雜交提取蛋白質(zhì),與已知的相應(yīng)抗體雜交若有雜交帶,表明翻譯成功個體水平鑒定做抗蟲、抗病的接種實驗,以確定是否有抗性以及抗性的程度;基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的功能進(jìn)行活性比較,以確定功能是否相同(貞2渴0鎖1訪1?!じ呖鹂夹酆r吥陷^卷)回否答蹄有跡關(guān)北基念因噸工掉程雀的績問蒜題跡:(駕1宗)構(gòu)嘉建速基這因襪工上程綢表脫達(dá)護載柴體熊時傳,阿用并不啦同寫類忘型忠的馳限珠制住酶瓦切獅割D摔N洪A后姿,蔽可瓶能疊產(chǎn)尼生騰黏材性殊末恐端疫,銹也賭可圓能沿產(chǎn)意生_京_半_貼_錦_教_惡_缺_末陪端椒。厲若麗要膽在摧限悠制縮慧酶巡壽切躁割美目玩的蟲基賠因邀和待質(zhì)第粒受后伍使員其姥直逐接濱進(jìn)扛行獅連確接舅,勾則宿應(yīng)中選忌擇垂能太使遷二朽者料產(chǎn)勢生_需_拍_乳_謹(jǐn)_鴿_底_法_醬(相陸同品、饞不篩同)黏欺性究末徹端咬的確限皺制班酶剩。例4(舟2先)利棟用嫂大落腸奧桿萌菌盡生吧產(chǎn)毛人帥胰虎島公素踏時絞,端構(gòu)毀建舟的池表壘達(dá)生載展體夏含企有所人漲胰倘島徐素咱基稱因蟻及佩其這啟端動揮子修等泉,旦其他中跌啟剛動羅子富的慨作濁用絡(luò)是_兄_燒_弄_冶_闊_怎_繭_。匹在拜用分表甚達(dá)失載嗚體螞轉(zhuǎn)處化變大鼻腸霉桿聲菌觀時訊,硬常拌用_觀_寺_瓦_(dá)虎_京_孔_皆_處旬理統(tǒng)大篇腸雅桿中菌馬,開以眾利斧于咽表窄達(dá)呀載創(chuàng)體捧進(jìn)沒入暖;盆為項了相檢辣測速胰編島漠素算基吳因杜是罰否須轉(zhuǎn)鏈錄邁出納了m稱R獸N程A,切可駐用憐標(biāo)字記投的身胰醫(yī)島荷素?fù)窕鶉嵰蚧槠瓒蜗∽髻I探聯(lián)針異與m轟R靈N主A雜炕交噸,撥該懸雜朵交需技樓術(shù)由稱豆為_茫_絨_駕_灣_事_英_道_。矮為充了唯檢姥測漸胰倆島張素怠基趟因訪轉(zhuǎn)扒錄訂的m尿R康N限A是什否摟翻辭譯伍成_虹_負(fù)_哈_抽_盾_悶_想_,以常漁用鈔抗籃原—抗勁體連雜盤交奧技內(nèi)術(shù)霜。(稱3燙)如綿果旅要墓將驗?zāi)唱毮苛脑兓鶊砸蜓峦ㄐ胚^脊農(nóng)閑桿小菌揚轉(zhuǎn)宮化使法山導(dǎo)搞入再植重物孟細(xì)滅胞胃,障先其要萄將真目究的哨基碼因恐插膛入誓農(nóng)紫桿囑菌T津i質(zhì)券粒禍的_砌_耽_咸_得_泛_吧_盤_中蛇,米然哭后瞇用痕該余農(nóng)領(lǐng)桿錯菌銅感煌染蔬植弟物濱細(xì)韻胞質(zhì),復(fù)通信過D柏N驕A重效組底將記目搏的朝基瞞因悔插荒入塔植此物憑細(xì)月胞樣的_張_導(dǎo)_形_混_削_演_陰_上懲?!窘鈹z析】(蠶1濾)
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