微生物技術(shù)部分

微生物技術(shù)部分第1頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）無(wú)菌技術(shù)無(wú)菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。1、目的：防止外來(lái)雜菌入侵，獲得純凈培養(yǎng)物p152、方面：p15*實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒*微生物培養(yǎng)的器皿、接種工具和培養(yǎng)基滅菌*實(shí)驗(yàn)操作在酒精燈火焰附近進(jìn)行*避免已經(jīng)經(jīng)過(guò)滅菌處理的材料與周圍物品接觸第2頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月比較含義常用方法消毒使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物，不包括芽孢和孢子。p15滅菌使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有微生物，包括芽孢和孢子。p15高壓蒸汽滅菌灼燒滅菌干熱滅菌煮沸消毒法；巴氏消毒法；化學(xué)藥劑消毒；第3頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

定義常用方法處理對(duì)象消毒使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物煮沸玻璃儀器巴氏消毒法不耐高溫的液體紫外線實(shí)驗(yàn)室、操作臺(tái)化學(xué)藥劑消毒：如酒精溶液手，操作臺(tái)等滅菌使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子培養(yǎng)基、棉塞、玻璃儀器等接種環(huán)、涂布器玻璃儀器3、滅菌與消毒：高壓蒸汽灼燒干熱第4頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

定義常用方法微生物培養(yǎng)和組培中的應(yīng)用消毒使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物煮沸玻璃儀器紫外線實(shí)驗(yàn)室、操作臺(tái)、衣物等酒精溶液手、外植體等次氯酸鈉溶液等外植體滅菌使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子高壓蒸汽培養(yǎng)基、玻璃儀器、棉塞、牛皮紙等灼燒接種環(huán)、涂布器干熱玻璃儀器第5頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月121℃，100kPa，15~30min第6頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月接種用具、試管口、瓶口放在酒精燈火焰的充分燃燒層中進(jìn)行灼燒滅菌第7頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月將玻璃器皿、金屬用具等能耐高溫并需要保持干燥的物品放到干熱滅菌箱內(nèi)，160-170℃下加熱1-2h。第8頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、基本操作程序（以大腸桿菌的純化為例）配制培養(yǎng)基包裝器材滅菌菌種擴(kuò)增倒平板接種倒置培養(yǎng)觀察、記錄、分析保存菌種第9頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月配制培養(yǎng)基稱量計(jì)算溶化物質(zhì)牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水重量5g10g5g20g定溶至1000mL電子天平和稱量紙調(diào)節(jié)PH第10頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月溶化營(yíng)養(yǎng)→瓊脂（攪拌）→加水定容→調(diào)節(jié)PH第11頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月高壓蒸汽滅菌第12頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、基本操作程序（以大腸桿菌的純化為例）配制培養(yǎng)基包裝器材滅菌菌種擴(kuò)增倒平板接種倒置培養(yǎng)觀察、記錄、分析保存菌種高壓蒸汽第13頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月倒平板60℃左右，酒精棉球擦手，點(diǎn)酒精燈；操作過(guò)程第14頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月倒平板第15頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月微生物的接種（純化）單菌落第16頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、基本操作程序（以大腸桿菌的純化為例）配制培養(yǎng)基包裝器材滅菌菌種擴(kuò)增倒平板接種倒置培養(yǎng)觀察、記錄、分析保存菌種高壓蒸汽平板劃線法稀釋涂布平板法第17頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月平板劃線法隨著劃線的進(jìn)行，接種環(huán)上的微生物細(xì)胞的數(shù)量將逐漸減少，并分散開。經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。第18頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月接種：劃線灼燒接種環(huán)→取菌液→劃線分離→燒至暗紅第19頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月接種：劃線第20頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月①④③②劃線分離第21頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月平板劃線的操作方法交叉劃線法連續(xù)劃線法第22頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月劃線方法第23頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第24頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第25頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第26頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第27頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第28頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月稀釋涂布平板法第29頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月A.系列稀釋操作P19101102103104105106(1)將分別盛有9mL水的試管滅菌并編號(hào)。(2)用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入第二支試管中，輕壓橡皮頭，吹吸三次使之充分混勻。(3)從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入第三支試管中，重復(fù)步驟2，直至到第六支試管。第30頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月B.涂布平板操作P19第31頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第32頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、基本操作程序（以大腸桿菌的純化為例）配制培養(yǎng)基包裝器材滅菌菌種擴(kuò)增倒平板接種倒置培養(yǎng)觀察、記錄、分析保存菌種高壓蒸汽平板劃線法稀釋涂布平板法恒溫培養(yǎng)箱第33頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月平板和一個(gè)未接種的平板，恒溫37℃倒置培養(yǎng)

恒溫箱中培養(yǎng)第34頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月原液稀釋101倍稀釋103倍稀釋102倍第35頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月菌種的保存（1）臨時(shí)保藏固體斜面培養(yǎng)基：4℃，3~6月轉(zhuǎn)接新培養(yǎng)基（2）長(zhǎng)期保藏甘油管藏：菌液：滅菌甘油=1：1混合，-20℃第36頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月芽孢

A、某些細(xì)菌在其生長(zhǎng)發(fā)育后期，在細(xì)胞內(nèi)形成一個(gè)圓形或橢圓形、厚壁、含水量極低、抗逆性極強(qiáng)的休眠體，稱為芽孢第37頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月被埋在琥珀中達(dá)2500萬(wàn)年的芽孢，當(dāng)放到營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上時(shí)仍可萌發(fā)生長(zhǎng)。

第38頁(yè)，課件共41頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2