實驗一植物組織總DNA的提取及DNA的濃度測定學時

實驗十一植物組織總DNA的提取及DNA的濃度測定

掌握用CTAB法提取植物總DNA的方法和基本原理。學習利用紫外分光光度法測定DNA溶液的濃度。一、實驗目的二、實驗原理

通常采用機械研磨的方法破碎植物的組織和細胞，由于植物細胞勻漿含有多種酶類(尤其是氧化酶類)對DNA的抽提產(chǎn)生不利的影響，在抽提緩沖液中需加入抗氧化劑或強還原劑(如巰基乙醇)以降低這些酶類的活性。在液氮中研磨，材料易于破碎，并減少研磨過程中各種酶類的作用。

CTAB,SDS等離子型表面活性劑，能溶解細胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，從而使DNA得以游離出來。再加入苯酚和氯仿等有機溶劑，能使蛋白質(zhì)變性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很強，經(jīng)離心后即可從抽提液中除去細胞碎片和大部分蛋白質(zhì)。上清液中加入異丙醇或乙醇使DNA沉淀，沉淀DNA溶于雙蒸水或TE溶液中，即得植物總DNA溶液。之后可加入RNA酶降解其中的RNA，再用氯仿除去RNA酶，得到較純的DNA制劑。D礦N輩A的破吸什收桂光杜譜明峰熄在2計6揪0鏈n超m處候，耗據(jù)賣計卵算材，朗測切定賞此咱波易長翼下便D怖N刻A厲溶葬液遣的醉O翁D盒值跌，仍當羞O蒸D2快6毛0=繳1阿時糕，天雙崇鏈面D更N役A眠含掘量轉(zhuǎn)約待為5聾0且μ孕g(shù)視/歌m站l，伶據(jù)楚此遼可職用駝紫蒼外奸分幫光董光筋度刷計壩測壟定孝溶除液料中質(zhì)D滿N造A楊含生量遼。由帽于蛋英白境質(zhì)的先吸躍收要峰激在2輪8恐0鑄n糖m處耕，純在仙測增定貝D季N物A奪含梯量貿(mào)時贏，羅還蜘常戀計垮算O零D2濤6撲0/琴O荷D2攪8繳0之載值潮，細如線該礙值逝為1爽.贏8萌-犧2跳.裝0時受，俘認眠為板已銀達茅到斤較由高獸的延純欲度己，耗如除低并于黎此稅值么，貴表巷明襯其萄內(nèi)劣含烘雜字質(zhì)群較瞞多粱，甲可牽能荒影歲響纖酶填切烏反剪應利。水箱稻狹品簡種歉的級幼香苗易葉是片三寶、控實頑驗迷材傘料四適、歡實跑驗棚器虎具訓、鞠藥喇品光試尺劑水沒浴積鍋財，幕研勞缽儉，嫩微遺量罪移廚液納器領(lǐng)，厲槍秤頭偵，練離微心陜管省，款臺柴式塊離抽心弟機萌，織液依氮串，癥恒胃溫危箱裂，替標核簽擊紙復，毫紫精外境分柔光咸光意度熟計寇，懶磁席力臟攪煤拌著機扛，裹剪韻刀賽等肝。2對%爆C料T宅A旅B蒙抽賣提談緩牽沖律溶屋液繼，膊異江丙店醇思,突氯摩仿梢-組異游戊命醇浸等C痕T事A姿B宮法誘流靈程荒圖植物材料裂解液上層溶液液氮研磨抽提細胞裂解干燥溶解離心洗滌異丙醇沉淀DNA溶液五衰、斤實朵驗子方幸法(歌1辜)鄰2水%客C炊T奮A嫩B序抽赤提拾緩贈沖宵液位在做6蒙5標℃雙水扛浴案中惑預艷熱攔。(申2墨)獨取峽少昆量柏葉平片囑（暈約愚0輩.鳴2厚g貌）偽置賽于閃研烤缽芬中城，差用腳液送氮版磨掘至陶粉美狀環(huán)；(嬸3憑)喚在摸液居氮問揮陳發(fā)盤將富盡詢而木植脅物諷組白織眉尚蹲未銷解睛凍撤時呀迅海即烈加毛入喬7華0定0批μ藝l填的毀2肢%冶C恭T半A配B曬抽協(xié)提酬緩目沖綁液亞，嶼輕遣輕壓攪傍動哄；(蠅4外)舊將容磨陪碎的液留分秋倒控入顯1柏.押5攪m榮l線的圣滅大菌國離槳心慨管僑中梢，聚磨紛碎祥液鄰的甲高著度污約越占偏管蜓的條三蘆分雄之鵝二作；(裕5抖)尼置搬于俱6監(jiān)5萬℃屢的坐水拉浴駱槽脆或種恒瓦溫捎箱容中槐，梢每浩隔韻1擁0董m鬼i純n輕偵輕廣搖正動，暫4枯0犁m以i嗓n肢后畏取散出山；1宮.屆D丘N皆A腫的擠提落?。〒?趙）頓冷視卻絡(luò)2乒m存i靈n怎后瘦，集加爭入脊氯紫仿榨-儀異茄戊芬醇怕（甘2岔4餃：強1絡(luò)）撤至反滿米管遼，猛劇潑烈忙振促蕩坦2弊~元3不m裂i尤n坑，繩使鞋兩撒者混削合終均逮勻；（逮7封）業(yè)放什入碧離岡心呀機改中臭1劣0示0寶0判0象r小p屋m梢離太心張1磚0客m混i妨n蓬，安與察此暈同暈時嚴，暈將陜6注0瓣0達μ顧l努的檢異圾丙葡醇型加興入棟另精一驕新臉的餅滅外菌守離淋心踏管陡中鍬；（瘋8級）服用央移冰液掃器鄉(xiāng)豐輕棚輕喉地額吸投取按上都清倘夜險，前轉(zhuǎn)偵入際含毒有蓬異貓丙睜醇腹的溜離辦心荷管糧內(nèi)岸，等將殺離軋心街管輸慢懂慢丸上舍下棚搖放動冊3掘0擦s隨e莫c撒，艦使頌異帝丙苗醇鬼與跡水貓層通充里分界混同合筑至紡能骨見木到斃D芬N悔A顛絮座狀糧物盲；（灑9疤）理1鼻0兄0敞0酒0胞r常p叢m葵離躺心喝1前m尼i斷n孩后沿，霧立軌即玩倒劫掉槍液傳體綠，撫注勾意鞠勿胞將覽白伏色走D夜N傲A肝沉伍淀施倒趕出盜，周將過離濱心券管軟倒傍立斷于峽鋪藝開目的政紙壟巾旁上獅；（孫1字0光）剛6移0婚s敲e遼c居后樓，妄直聾立識離辨心報管挽，短加渡入說7膽2悄0挽μ嘆l緩的芬7伴5葵%疏乙頸醇穿及能8飼0似μ嘩l葬5銹M近的圈醋膀酸輛鈉懂，輕屋輕燙轉(zhuǎn)件動，防用紀手近指潤彈翠管晉尖胃，撲使沃沉唉淀旦與護管內(nèi)底法的經(jīng)D修N宴A礦塊束狀往物俘浮睜游謝于霞液伐體反中崖；（濾1霧1列）逮放攤置咳3降0抱m駱i濱n董，杯使姜D燒N僵A罩塊污狀逃物逃的將不偏純遭物潑溶蜓解女；（澡1樹2柜）著1困0添0弦0慣0雪r痰p峽m革離愁心塘1耕m疤i爹n行后燒，覽倒鉛掉明液弓體幣，辦再拐加巾入抹8耳0經(jīng)0天μ擋l擴7想5智%寨的歷乙集醇樂，發(fā)將息D巖N獻A俊再畝洗獅3泊0照m場i算n蛛；（冤1薦3釀）存1豪0炮0存0子0鐵r暮p織m衰離娛心鏈3促0披s楚e芒c隨后展，粱立價即茂倒將掉滿液錦體澆，制將總離張心基管騎倒唐立挖于撈鋪所開欺的方紙耕巾弄上??；年數(shù)趨分鴨鐘際后墨，震直始立掠離隊心膛管征，桑干擁燥嫂D狹N扣A法（楊自鳳然嚼風搭干卸或雞用芳風冤筒顫吹蘇干步）寺；（霧1閉4前）狗加責入朱5羞0矩μ柿l風0憂.用5億×略T蘋E向(替含敬R蘆N久a宇s岡e犧)坦緩歌沖磨液蹄，孔使輩D誕N息A亡溶而解盯，贏置嚼于殘3悔7互℃凍恒指溫赴箱慈約洞1控5民h殿，淺使腦R女N餡A問消毒解牲；（請1皂5鉆）傷置顆于具-避2雪0拐℃閑保頑存福、括備酸用火。稱紹取選樣救品街，敘液掃氮唱研善磨塘，扛加飼入暗預睜熱命的臟(6敗5℃)屯C學T拆A瘋B漢及β召-巰展基強乙色醇保蛾溫亭1轎h歐,就期結(jié)間雪不沸停暈的夫搖維均吸喘取震上過清餡液愿,榆移諒至參新噸的弱離蓬心臂管斥中劈燕,掛加捐入楊等諷體辨積怪氯鍵仿思：槽異黑戊襪醇晨（策2潛4洽：袖1敬）融，易輕冷緩慈顛棟倒冒混快勻窩,茶1蛙0臭0息0差0珍r課p憂m搜,氣1揪0倚m徒i飼n取哲上醉清世液蜓，千移堤至百新潔的章離紗心槍管膀中俘,總加鞋等偷體盒積機氯餃仿派：毯異景戊舒醇德,滴顛奮倒暖混斥勻貨,鑼1符0填0淘0穴0蜂r收p乓m禽,夜1苗0柴m彎i觸n取為上稼清館液珍，賀加鳴入長0煩.赤6呢-賭0置.糊7狐V燒的丈異梁丙諸醇敗（霧預誦冷渴）背，瘋后屋4懇℃廊/閣-造2繪0仇℃蔬保祖溫掘沉獄淀1秧0棋0駝0衣0叫r腸p晨m愧,皺1脹0駱m霧i驢n朵離啟心指取廈沉獻淀修，紐奉7腎0糧%放乙移醇鋼清壓洗鞏兩朱次融，贈吹爭干用號T返E蒜溶爸解窯D勸N錫A備,娘然適后協(xié)低踏溫待保訓存取趨提譜取謠的臉D稠N咸A目溶灘液船2μ帥l鍋(手約治1扯0寶0扎-概2淹0龍0艷n康g血)會至憤一御干際凈踏的膽離答心啊管僵，晴加格入遷1士9苗8爸μ遞l編蒸置餾城水瓜稀括釋超。酸先絮2欠0感0矩μ盛l奴蒸咱餾關(guān)水收至南比掀色劈燕杯回，畫進頓行抗紫揮外蓄光塑空發(fā)白義測茫定何，批然另后剖倒赤掉解蒸尋餾耳水旁，停加盲入榜2顛0告0斥μ刃l(wèi)臺已種稀咬釋租的昏D襲N拔A詠溶李液紡，私測宵定鐮2村6襖0潤n障m凈及雄2浴8河0隊n意m哥的糠光布吸鵝收篇值損（杏O垂D2濤6義0及默O壁D2線8欺0）晨，萬計馬算牌D窩N示A啊濃貧度童及蓬O哀D2塑6霞0/任O伐D2真8膊0比湯值炒。計療算后公淺式選如細下媽:d范s余D姥N良A錘=獅5碧0咳×念(壁O擠D倆2嫁6勻0喇)壞×他稀皇釋牽倍惡數(shù)以灑上擁濃蜘度雄單瘡位侍為染g/慈m鳴l2舊.細D嫩N網(wǎng)A貝濃岸度匹的寄測揮定（思1張）毛葉曠片易磨逮得越農(nóng)細齒越荒好。（角2殘）緞移嚼液幼器屑的耀使負用蘿。（額3雹）須由佛于聰植竹物約細掀胞敢中漠含椒有港大宵量挨的D漲N置A機酶，嶼因迎