第7章-莖尖培養(yǎng)和脫毒快繁技術(shù)課件

第七章莖尖培養(yǎng)和脫毒、快繁技術(shù)7.1莖尖培養(yǎng)：7.2脫毒技術(shù)：7.3快速繁殖技術(shù)第七章莖尖培養(yǎng)和脫毒、快繁技術(shù)：7.1莖尖培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)的概念莖尖培養(yǎng)的應(yīng)用：3. 莖尖培養(yǎng)的方法7.1莖尖培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)的概念7.1莖尖培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)的概念：莖尖分生組織培養(yǎng)：（meristem）,不帶葉原基，<250um；莖尖培養(yǎng)：(shoottip),帶1-3個(gè)葉原基，100-1000um；芽培養(yǎng)：(shoot)，>1mm。2.莖尖培養(yǎng)的應(yīng)用：形態(tài)建成研究：莖尖分生組織無病株生產(chǎn)：莖尖營(yíng)養(yǎng)繁殖：芽培養(yǎng)7.1莖尖培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)技術(shù)：材料消毒：莖尖分離：培養(yǎng)方法：對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的要求：7.1莖尖培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)技術(shù)：材料消毒：在溫室種植或田間種植的健康植株上取枝條，必要時(shí)母株可用殺菌劑處理；在實(shí)驗(yàn)室切取2-3cm長(zhǎng)的芽，去掉較大的葉片，進(jìn)行常規(guī)的表面滅菌；7.1莖尖培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)技術(shù)：莖尖分離：將滅菌的芽置放有濕濾紙的無菌培養(yǎng)皿中，置體視顯微鏡下，依次用鑷子或解剖刀剝?nèi)ト~片直至露出生長(zhǎng)點(diǎn)，用鋒利的解剖刀片把帶或不帶葉原基的分生組織切下來，直接接種到培養(yǎng)基上；7.1莖尖培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)技術(shù)：培養(yǎng)方法：固體培養(yǎng)、液體紙橋培養(yǎng)（易愈傷化時(shí)）7.1莖尖培養(yǎng)莖尖培養(yǎng)技術(shù)：對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的要求：一般可用MS培養(yǎng)基，加少量的生長(zhǎng)素（不用2,4-D）和細(xì)胞分裂素；GA3有時(shí)對(duì)抑制愈傷等有一定的效果。7.1莖尖培養(yǎng)脫毒苗培育的意義：脫毒原理：莖尖培養(yǎng)脫毒技術(shù)和程序：病毒檢測(cè)：幾種植物的脫毒技術(shù)7.2脫毒技術(shù)：脫毒苗培育的意義：是無性繁殖作物消除病毒的有效手段：病毒一般不能通過種子傳播到下一代，所以無性繁殖植物易受病毒的侵害，造成產(chǎn)量品質(zhì)的下降；脫毒苗一般可提高產(chǎn)量30-70%。7.2脫毒技術(shù)：脫毒原理：熱處理：使病毒鈍化，可在活體進(jìn)行，如香石竹在38度處理2個(gè)月可消除莖內(nèi)所有病毒；莖尖培養(yǎng)：病毒在體內(nèi)的分布不均勻，頂端分生組織一般不含病毒（維管系統(tǒng)缺乏、細(xì)胞分裂速度快、其他的抑制機(jī)制）；兩者結(jié)合可以提高效果；愈傷組織培養(yǎng)7.2脫毒技術(shù)：莖尖培養(yǎng)脫毒技術(shù)和程序：外植體的分離：2-3cm新梢，去掉大葉片，滅菌后，在解剖鏡下切取帶1-2個(gè)葉原基的莖尖；培養(yǎng)方法：MS＋BA0.5＋NAA0.05,3-4月，繼代3-4次，少部分長(zhǎng)出芽；結(jié)合熱處理脫毒：先熱處理植株，取1mm的莖尖培養(yǎng)；試管苗熱處理；結(jié)合化學(xué)療法脫毒：如抗病毒制劑Virazole可以抑制病毒復(fù)制；7.2脫毒技術(shù)：病毒檢測(cè)：經(jīng)過莖尖培養(yǎng)的植物不一定全是無毒的，需要經(jīng)過嚴(yán)格的鑒定才能用材料消毒：指示植物法（indicator）：抗血清鑒定法：酶聯(lián)免疫法(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA):電鏡法：7.2脫毒技術(shù)：病毒檢測(cè)指示植物法（indicator）：提取脫毒苗的汁液，接種（汁液接種、芽嫁接等）到能產(chǎn)生明顯的典型癥狀的別種植物（指示植物）上，根據(jù)接種后指示植物的表現(xiàn)確定脫毒是否徹底。指示植物的選擇：1.對(duì)特定病毒敏感，且癥狀表現(xiàn)明顯；3.本身無毒（如種子繁殖）；2.可常年栽培；常用：千日紅、筧色藜、野生馬鈴薯、曼陀羅、心葉煙等。7.2脫毒技術(shù)：病毒檢測(cè)：抗血清鑒定法：用純化的病毒注射動(dòng)物，在動(dòng)物的血清中產(chǎn)生抗體?？乖c抗體之間存在十分特異的凝集和沉淀反應(yīng)。已知病毒的抗血清可以用來鑒定這種病毒的存在與否。試管沉淀反應(yīng)、點(diǎn)滴沉淀實(shí)驗(yàn)、凝聚試驗(yàn)等。7.2脫毒技術(shù)：病毒檢測(cè)：酶聯(lián)免疫法(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA):在血清法的基礎(chǔ)上，結(jié)合酶反應(yīng)發(fā)展起來。在抗體上帶上某種酶，抗原和抗體結(jié)合成的免疫復(fù)合物就有了酶活性，在反應(yīng)體系中加入酶底物，底物在酶的催化下，形成有色反應(yīng)物。從而使檢測(cè)的靈敏度大大提高。7.2脫毒技術(shù)：病毒檢測(cè)：電鏡法：用電鏡直接觀察病毒顆粒，通過病毒顆粒的形態(tài)直接鑒定病毒的存在。比較快速、可靠；但需要電鏡和樣本制備技術(shù)。7.2脫毒技術(shù)：幾種植物的脫毒技術(shù)馬鈴薯、甘薯、甘蔗、蘋果、草莓、柑桔、香蕉7.2脫毒技術(shù)：試管苗無性繁殖的意義：常用的快繁類型及特點(diǎn)：快繁的一般步驟：提高試管苗繁殖速度的措施：種苗繁殖體系7.3快速繁殖技術(shù)（micropropagation）試管苗無性繁殖的意義：與脫毒技術(shù)結(jié)合，生產(chǎn)無毒苗原種；蘋果、桃子、棗、大蒜、康乃馨、唐菖蒲、加快果樹、花卉、林木、藥材等繁殖系數(shù)低的植物優(yōu)良品種的繁殖速度；月季、杜鵑（扦插難生根）是蘭花唯一的大規(guī)模無性繁殖方法；為一些不能進(jìn)行常規(guī)繁殖的植物材料提供了新的繁殖方法。如雄性不育系（如大白菜）、自交系、和雜交種（雜種優(yōu)勢(shì)固定）、雄株（石刁柏，蘆筍）、三倍體無籽西瓜、7.3快速繁殖技術(shù)（micropropagation）常用的快繁類型及特點(diǎn)：無菌短枝型：叢生芽增殖型：器官發(fā)生型：胚狀體發(fā)生型：原球莖型：7.3快速繁殖技術(shù)（micropropagation）常用的快繁類型及特點(diǎn)：無菌短枝型：節(jié)培法、微型扦插法。將待繁殖的材料剪成帶一葉的單芽莖段，轉(zhuǎn)入成苗培養(yǎng)基，成苗后再剪成帶一葉的單芽莖段，繼代成苗。遺傳穩(wěn)定。叢生芽增殖型：莖尖或初代培養(yǎng)的芽，在適宜的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)，不斷發(fā)生腋芽，而成叢芽；最后生根成苗。遺傳穩(wěn)定。7.3快速繁殖技術(shù)（micropropagation）常用的快繁類型及特點(diǎn)：器官發(fā)生型：從無芽組織直接誘導(dǎo)不定芽，或誘導(dǎo)出愈傷組織后，再在從愈傷組織上誘導(dǎo)不定芽。易變異。胚狀體發(fā)生型：從愈傷組織誘導(dǎo)胚狀體，繁殖速度快，但成功的事例不多。易變異?？梢灾谱魅斯しN子。7.3快速繁殖技術(shù)（micropropagation）常用的快繁類型及特點(diǎn)：原球莖型：蘭花的莖尖或腋芽在組織培養(yǎng)的條件下可直接產(chǎn)生原球莖。原球莖是一種類胚組織，可以繼代增殖成新的原球莖，控制條件也很容易分化成植株。7.3快速繁殖技術(shù)（micropropagation）快繁的一般步驟：無性繁殖系的建立：試管苗中間繁殖體的增殖：試管苗的壯苗與生根：試管苗的出瓶種植與苗期管理：7.3快速繁殖技術(shù)（micropropagation）快繁的一般步驟：無性繁殖系的建立：從外植體接種到得到第一批無菌材料（芽、苗、胚狀體、原球莖等）。包括根據(jù)不同的植物特性，選擇快繁類型和外植體的種類；外植體滅菌、接種、培養(yǎng)；外植體生長(zhǎng)分化出芽或原球莖等。7.3快速繁殖技術(shù)（micropropagation）快繁的一般步驟：試管苗中間繁殖體的增殖：以芽的增殖為主，可以不考慮根的生長(zhǎng)?？旆鳖愋筒煌虚g繁殖體也不同，要使快繁達(dá)到一定的速度，中間繁殖體的增殖速度平均要每月3-4倍。如無菌短枝型的增殖，接種一個(gè)腋芽，一個(gè)月后要長(zhǎng)成至少帶3-4個(gè)節(jié)的短枝出來。器官發(fā)生型和胚狀體發(fā)生型的增殖在愈傷階段，其過程不宜過長(zhǎng)，以防產(chǎn)生過多的不利變異。中間繁殖體增殖到一定的規(guī)模，就可以分流一部分材料轉(zhuǎn)入壯苗和生根培養(yǎng)。7.3快速繁殖技術(shù)（micropropagation）快繁的一般步驟：試管苗的壯苗與生根：一般要分成單苗，轉(zhuǎn)移到鹽濃度較低、不含細(xì)胞分裂素，含低濃度生長(zhǎng)素的生根壯苗培養(yǎng)基，至根、莖長(zhǎng)到合適的長(zhǎng)度，即可鍛煉出瓶。問題：不易生根（延長(zhǎng)時(shí)間、繼代）；易生根：壯苗階段不加生長(zhǎng)素，試管外生根可減少費(fèi)用；特殊方法：如馬鈴薯的小球莖法。7.3快速繁殖技術(shù)（micropropagation）快繁的一般步驟：試管苗的出瓶種植與苗期管理：（壯苗培養(yǎng)；開口鍛煉；選擇介質(zhì)；逐步過渡）水分平衡介質(zhì)適宜（水培、固培）養(yǎng)分充足防止菌類光溫合適7.3快速繁殖技術(shù)（micropropagation）提高試管苗繁殖速度的措施：選擇合適的繁殖途徑改良培養(yǎng)基：激素（腋芽、不定芽、胚狀體）等；改良培養(yǎng)條件：溫、光、濕度、氣體（有利氣體、有害氣體）7.