瓊脂糖凝膠電泳原理步驟詳細(xì)課件

/李莉瓊脂糖凝膠電泳

AgaroseGel

Electrophoresis

.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院講課內(nèi)容

概述

1

瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)

2

瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用

3

影響遷移率的因素

4

瓊脂糖凝膠電泳分離血漿脂蛋白

5.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院概述

IntroductionGelElectrophoresis：由瓊脂、瓊脂糖、淀粉膠及聚丙烯酰胺等物質(zhì)作支持體的電泳。特點(diǎn)（characteristic）：1.可以制成非常均勻的凝膠，帶電質(zhì)點(diǎn)在凝膠的孔中泳動2.電泳操作方法簡便，電泳速度快3.分辨率高，重復(fù)性好，電泳圖譜清晰4.適用于生化，免疫等定性定量測定

.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院瓊脂糖凝膠（AgaroseGel）天然瓊脂（agar）:又名瓊膠、菜燕、凍粉從石花菜及其它紅藻類植物提取出來的一種線狀高聚物。瓊脂糖（agarose）瓊脂果膠（agaropectin）

AcidsulfateCarboxylicacidgroups.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院

D-半乳糖3，6-脫水-L-半乳糖瓊脂糖（Agarose）半乳糖及其衍生物構(gòu)成的中性物質(zhì).上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院講課內(nèi)容

概述

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瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)

2

瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用

3

影響遷移率的因素

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瓊脂糖凝膠電泳分離血漿脂蛋白

5.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)

（一）優(yōu)點(diǎn)（advantage)1.因不含硫酸根和羧基，幾乎消除了瓊脂的電滲2.對蛋白質(zhì)吸附極微，故無拖尾現(xiàn)象3.凝膠結(jié)構(gòu)均勻，孔徑較大，可用來分離酶的復(fù)合物、核酸、病毒等大分子物質(zhì)4.透明度較好，可直接或干燥成薄膜后進(jìn)行染色5.不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量測定6.有熱可逆性.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院（二）缺點(diǎn)(disadvantage)1.機(jī)械強(qiáng)度差，易破碎，濃度不能太低2.易被細(xì)菌污染，不易保存，臨用前配制3.瓊脂糖支持層上的區(qū)帶易于擴(kuò)散，電泳后必須立即固定染色4.與PAGE相比，分子篩(molecularsieve)作用小，區(qū)帶少.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院講課內(nèi)容

概述

1

瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)

2

瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用

3

影響遷移率的因素

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瓊脂糖凝膠電泳分離血漿脂蛋白

5.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用

ApplicationsofAgaroseGel

Electrophoresis

1.適用于大分子的核酸、核蛋白等的分離、鑒定及純化2.臨床生化檢驗(yàn)中常用于LDH、CK等同工酶的分離與檢測3.為不同類型的高脂蛋白血癥、冠心病等提供生化指標(biāo)

.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院ThegelwithUVillumination,theethidiumbromidestainedDNAglowsorange

.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院Digitalimageof3plasmidrestrictiondigestsrunona1%w/vagarosegel,3Volts/cm,stainedwithethidiumbromide.TheDNAsizemarkerisacommercial1

kbpladder.ThepositionofthewellsanddirectionofDNAmigrationisnoted..上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院講課內(nèi)容

概述

1

瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)

2

瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用

3

影響遷移率的因素

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瓊脂糖凝膠電泳分離血漿脂蛋白

5.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院影響遷移率的因素

FactorsaffectingmigrationthesizeofthemoleculeconformationofthemoleculetheagaroseconcentrationofagelVoltage.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院Percentagaroseandresolutionlimits.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院講課內(nèi)容

概述

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瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)

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瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用

3

影響遷移率的因素

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瓊脂糖凝膠電泳分離血漿脂蛋白

5.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院瓊脂糖凝膠電泳分離血漿脂蛋白原理（Principle）

血清脂蛋白經(jīng)飽和蘇丹黑B預(yù)染后，以瓊脂糖凝膠為支持介質(zhì)，在pH8.6巴比妥緩沖液中電泳，根據(jù)各脂蛋白的組成、大小、形狀分離成不同區(qū)帶。

.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院(一)血清脂蛋白(lipoprotein)的組成

ApoAApoBprotein：ApoproteinApoCApoDApoE

甘油三酯（TG）脂類磷脂（PL）

游離膽固醇（FC）

膽固醇酯（CE）少量糖.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院

.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院（二）分類1.按電泳法分

乳糜微粒（chylomicron,CM）

-脂蛋白（-lipoprotein）

前-脂蛋白（pre

-lipoprotein）-脂蛋白（-lipoprotein）.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2.按超速離心法分

乳糜微粒(chylomicron,CM)(<0.94)

極低密度脂蛋白(0.941.006)(verylowdensitylipoprotein,VLDL)

中間密度脂蛋白(1.0061.019)(intermediatedensitylipoprotein,IDL)

低密度脂蛋白LDL(1.0191.063)(lowdensitylipoprotein,LDL)高密度脂蛋白HDL(1.0631.21)(highdensitylipoprotein,HDL)

.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院（三）結(jié)構(gòu)特征

CMVLDLLDLHDL甘油三脂膽固醇蛋白質(zhì)帶電量（Q）pH8.6為例顆粒大小（mm）密度電泳速度形態(tài)多多少少大低慢規(guī)則不規(guī)則少少多多小高快.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院

pH8.6>pI，各種脂蛋白均帶負(fù)電，電泳時由負(fù)極到正極；VLDL為圓形，受阻力小，LDL形態(tài)不規(guī)則，受阻力大，所以VLDL跑在前.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院

加樣槽β前βα

CMLDLVLDLHDL—+.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床應(yīng)用：高脂蛋白血癥的分型

CMβ前βα正常Ⅰ型Ⅱa型Ⅱb型Ⅲ型Ⅳ型Ⅴ型.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院操作.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院玻璃片.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院預(yù)染色的標(biāo)本.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院＋上樣處玻片瓊脂糖凝膠.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院

CM.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院正常參考值（百分比）α-脂蛋白30-40%前β-脂蛋白15%β-脂蛋白55%注意事項(xiàng)：①血清樣品要新鮮②為了免去離心步驟，吸取預(yù)染血清時，應(yīng)吸取上層，下層或管底可能有染料顆粒沉渣，否則應(yīng)再離心后吸預(yù)染血清.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院名詞解釋1.遷移率2.電滲3.電泳問答題1.影