體外診療產品簡介課件

體外診斷試劑的概念主要內容體外診斷試劑的分類介紹

化學發(fā)光產品行業(yè)情況

Q&A12347/26/20231體外診療產品簡介第一部分

體外診斷試劑的概念7/26/20232體外診療產品簡介體外診斷試劑的概念、特點、用途體外診斷試劑：是指采用免疫學、微生物學、分子生物學等原理或方法制備的、在體外通過檢測取自機體的某一部分（如血清、體液等）用于對人類疾病的診斷、檢測及流行病學調查等的診斷試劑。特點：體外診斷技術具有“便捷、快速、準確、無痛”等特點，是目前診斷、檢測疾病的主要診斷技術。應用領域：體外診斷試劑目前主要應用于各類醫(yī)療機構，而未來家庭用診斷試劑將會得到蓬勃發(fā)展。7/26/20233體外診療產品簡介體外診斷試劑的分類臨床生化試劑免疫診斷試劑分子診斷試劑用途檢測方式優(yōu)點缺點測定“酶類、糖類、脂類、蛋白和非蛋白氮類、無機元素類、肝功能、臨床化學控制血清等幾大類產品主要通過測定“酶類、蛋白類”元素，對“病毒類疾病、傳染性疾病、內分泌、腫瘤、藥物檢測、血型鑒定”等進行診斷主要通過“核酸和基因芯片”等技術，從基因角度對肝炎、性病、肺感染性疾病、優(yōu)生優(yōu)育、遺傳病基因、腫瘤等遺傳病進行檢測可用普通半自動和一般生化分析儀進行檢測，對檢測設備要求較低一般情況下需要精度高的專業(yè)全自動檢測設備檢測，對檢測設備要求較高最高的體外診斷技術，需要專業(yè)的基因類檢測設備，檢測技術難度大技術成熟，檢測成本低，目前是非蛋白類元素檢測的理想試劑（如：糖、脂類）應用廣泛，檢測精度高，技術成熟，檢測成本適中，是蛋白類元素檢測理想的試劑檢測范圍廣，檢測類別多，檢測精度最高，可從基因層面診斷疾病檢測范圍有限（如：病毒類、性病、艾滋等），精度低，無法檢測基因類遺傳疾病存在檢測死角（如無法檢測非酶類、蛋白類元素引起的疾病，糖尿病等），無法檢測到基因類遺傳疾病技術成熟度相對較低，檢測成本高，不適合規(guī)?；茝V7/26/20234體外診療產品簡介我國體外診斷試劑的產品結構7/26/20235體外診療產品簡介第二部分

分類產品介紹（原理、應用）7/26/20236體外診療產品簡介體外診斷試劑-介紹內容免疫診斷放射免疫分析酶聯(lián)免疫分析化學發(fā)光免疫分析膠體金免疫層析試紙蛋白質芯片臨床生化全自動生化分析分子診斷核酸檢測7/26/20237體外診療產品簡介1臨床生化試劑臨床生化試劑主要有測定酶類、糖類、脂類、蛋白和非蛋白氮類、無機元素類、肝功能、臨床化學控制血清等幾大類產品，主是用于配合手工、半自動和一般全自動生化分析儀等儀器檢測。作為醫(yī)療檢測的基本組成部分，憑借其花費低、速度快的優(yōu)勢，臨床生化試劑將保持較大份額，并在相當長一段時間內很難被取代。7/26/20238體外診療產品簡介1臨床生化試劑臨床生化試劑病人樣本診斷試劑（酶）融合診斷儀器診斷結果采用比色法檢測生化指標，對蛋白類檢測精度相對較低7/26/20239體外診療產品簡介1臨床生化試劑全自動生化儀分析原理：分光光度測定法和電勢測定法分析類型：終點法、速率法、固定時間法和間接離子選擇電極法(ISE)分析方法：比色法、比濁法、乳膠凝集法、均項酶免疫分析法、間接離子選擇電極法(ISE)7/26/202310體外診療產品簡介1臨床生化試劑全自動生化儀的檢查項目肝功：谷丙轉氨酶（ALT/GPT）、谷草轉氨酶（AST/GOT）、堿性磷酸酶（ALP）、總膽紅素（T.BIL）、直接膽紅素（D.BIL）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）腎功：尿素氮（BUN）、肌酐（Cre）、二氧化碳結合力（CO2）、尿酸（UA）血脂：總膽固醇（CHO）、甘油三脂（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）血糖：葡萄糖（GLU）心肌酶：肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸脫氫酶（LDH）、a-羥丁酸脫氫酶（a-HBDH）、谷氨酰轉肽酶（r-GT）離子：鈣（Ca）、磷（P）、鎂（Mg）、鉀（K）、鈉（Na）、氯（CL）等mg-μg（10-3-10-6g）7/26/202311體外診療產品簡介2免疫診斷試劑免疫診斷試劑是利用抗原與抗體互相結合的特異性反應來進行定性或定量的診斷，無論是技術還是市場，此類試劑在目前所有診斷試劑產品中的發(fā)展都是最快的。免疫診斷試劑在診斷試劑盒中品種最多，根據診斷類別，可分為傳染性疾病、內分泌、腫瘤、藥物檢測、血型鑒定等。7/26/202312體外診療產品簡介免疫診斷-放射免疫分析1959年由Yalow和Berson首先用于糖尿病

患者血漿胰島素含量的測定，從而開創(chuàng)了

放射免疫分析。基本原理（1）競爭結合分析：Ag+AbAgAb

*Ag+Ab*AgAb（2）IRMA（免疫放射分析）：常用標記核素：（1）125I：γ射線，半衰期60天（2）3H：β射線，半衰期12.3年測量儀器（1）γ計數儀（2）β液閃儀R.Yalow7/26/202313體外診療產品簡介2免疫診斷試劑免疫類診斷試劑診斷技術酶聯(lián)免疫技術化學發(fā)光膠體金1、原理：將醫(yī)用酶同樣本反映，根據反應物顏色的變化程度分析各類指標，確定診斷結果2、優(yōu)點：技術成熟，成本最低3、缺點：操作復雜，耗時長，反應試劑殘留存在放射性污染4、發(fā)展方向：目前是國內主流技術，但未來逐步被化學發(fā)光替代1、原理：將抗原抗體同樣本結合，然后由磁珠捕捉形成的反應物，再加入發(fā)光促進劑，加速反應物自發(fā)光速度和強度，用發(fā)光信號測量儀測量光子數量，據此診斷2、優(yōu)點：精確度高，無污染，檢測速度快，技術日益成熟3、缺點：成本相對高，技術成熟度在國內相對弱4、發(fā)展方向：代表了免疫診斷的發(fā)展方向1、原理：膠體性質膠體金顆粒大小多在1～100nm，微小金顆粒穩(wěn)定地、均勻地、呈單一分散狀態(tài)懸浮在液體中，成為膠體金溶液。膠體金因而具有膠體的多種特性，特別是對電解質的敏感性。2、優(yōu)點：快速、便捷3、缺點：成本高，靈敏度低、精確度低4、發(fā)展方向：急診領域病人樣本融合診斷儀器診斷結果試劑（抗原抗體）7/26/202314體外診療產品簡介2.1酶免疫分析1966年，Nakane和Avrameas等分別報道用酶代替熒光素標記抗體，建立了酶標抗體技術（enzyme-labelledantibodytechnique），用于生物組織中抗原的定位和鑒定。1971年，Engvall，VanWeemen等報道了酶聯(lián)免疫吸附試驗，從而建立了酶標抗體的定量檢測技術。目前，免疫酶標記技術已成為免疫診斷、檢測和分子生物學研究中應用最廣泛的免疫學方法之一。7/26/202315體外診療產品簡介2.1酶免疫分析1.均相酶免疫測定法（EIA）：

主要用于測小分子抗原。酶標抗原與待測抗原競爭結合定量抗體2.酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：

為固相、非均相酶免疫測定法，目前應用最廣泛的定性標記免疫分析技術，也可用于定量分析。1971年vanWeeman（荷）等發(fā)明3.生物素-親和素系統(tǒng)免疫檢測法

生物素標記一抗或二抗，酶標記親和素7/26/202316體外診療產品簡介2.1酶聯(lián)免疫吸附分析（ELISA）ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結合物和酶的底物。（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；（2）酶標記的抗原或抗體（結合物）；（3）酶的底物；（4）陰性對照品和陽性對照品，參考標準品；（5）結合物及標本的稀釋液；（6）洗滌液；（7）酶反應終止液；7/26/202317體外診療產品簡介2.1酶聯(lián)免疫吸附分析（ELISA）包被載體-96孔板在ELISA中常用的標記物為辣根過氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶（AP）。底物HRP：鄰苯二胺(OPD)、四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和ABTS。常用的TMB經HRP作用后共產物顯藍色，終止反應后呈黃色，吸收峰在450nmAP：底物為磷酸酯酶，一般采用對硝基苯磷酸酯作為底物。產物為黃色的對硝基酚，在405nm波長處有吸收峰。7/26/202318體外診療產品簡介2.1酶聯(lián)免疫分析-儀器7/26/202319體外診療產品簡介2.1酶聯(lián)免疫吸附分析（ELISA）-雙抗夾心固相載體抗體抗原酶抗體酶標記抗體1.將抗體包被在固相載體上。2.如樣品中含有抗原，則結合為抗原抗體復合物。3.再加入酶標記抗體，則結合為抗體-抗原-酶標記抗體復合物。4.酶催化底物并顯色。7/26/202320體外診療產品簡介2.1酶聯(lián)免疫吸附分析-酶標抗原競爭法固相載體抗體抗原酶酶標記抗原1.將抗體包被在固相載體上。2.如樣品中含有抗原，則優(yōu)先競爭結合抗體，結合為抗原抗體復合物。3.同時加入酶標記抗原，抗原沒有結合的位點酶標記抗原去占據，則結合為酶標記抗原-抗體復合物。4.酶催化底物并顯色。抗原7/26/202321體外診療產品簡介2.2化學發(fā)光免疫分析化學發(fā)光免疫分析（ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA）是近十年來在世界范圍內發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析。它具有高靈敏度、檢測范圍寬、操作簡便快速、標記物穩(wěn)定性好、無污染、儀器簡單經濟等優(yōu)點。它是放射性免疫分析與普通酶免疫分析的取代者，是免疫分析重要的發(fā)展方向。CLIA發(fā)展迅猛，已占各種免疫分析的首位。

7/26/202322體外診療產品簡介2.2化學發(fā)光免疫分析化學發(fā)光是一種特異的化學反應，有機分子吸收化學能后發(fā)生能級躍遷，產生一種高能級的電子激發(fā)態(tài)不穩(wěn)定的中間體，當其返回到基態(tài)而發(fā)出光子，即為化學發(fā)光。將化學發(fā)光與抗原抗體相結合而形成的免疫分析技術，即為化學發(fā)光免疫分析?；瘜W發(fā)光的發(fā)光類型通常分為閃光型（flashtype）和輝光型（glowtype）兩種。閃光型發(fā)光時間很短，只有零點幾秒到幾秒。輝光型又稱持續(xù)型，發(fā)光時間從幾分鐘到幾十分鐘，或幾小時至更久。閃光型的樣品必須立即測量，必須配以全自動化的加樣及測量儀。測量輝光型的樣品可以使用通用型儀器，也可以配全自動化儀器。7/26/202323體外診療產品簡介2.2化學發(fā)光免疫分析化學發(fā)光免疫分析的類型1、直接化學發(fā)光免疫分析1.吖啶酯2、化學發(fā)光酶免疫分析1．魯米諾及其衍生物

2．AMPPD3、電化學發(fā)光免疫分析1.三聯(lián)吡啶釕7/26/202324體外診療產品簡介2.2直接化學發(fā)光機理-夾心法發(fā)光YYY磁微粒被測抗原+抗體+帶丫啶酯標記物抗體YYYYYYYYYYY沖洗后（1）加入H2O2（pH<10）（2）加入堿（pH>10）7/26/202325體外診療產品簡介2.2HRP標記化學發(fā)光免疫分析示意圖7/26/202326體外診療產品簡介2.2電化學發(fā)光免疫分析示意圖7/26/202327體外診療產品簡介2.2化學發(fā)光免疫分析-儀器7/26/202328體外診療產品簡介2.3膠體金免疫層析試紙條7/26/202329體外診療產品簡介2.3膠體金免疫層析試紙條層析法技術優(yōu)勢:簡單\現(xiàn)場\快速1.打開包裝取出試紙條2.直接插入待測樣品中7/26/202330體外診療產品簡介2.3膠體金免疫層析試紙條-與常規(guī)診斷相比優(yōu)點缺點快速：全部檢測過程僅需3-10分鐘。簡便：不需其它任何儀器設備，操作也極其簡單，無需專業(yè)人員，攜帶方便，可隨時隨地進行。廉價：單個測試條成本極低

可單份檢測：對標本既能成批檢測，又可單份檢測，可立刻拿到結果，不必等待。

穩(wěn)定性好：金標試劑穩(wěn)定，可長期保存。

檢測標本種類多：既可用于查血，又可用于檢尿或唾液，因而適合各種檢查定量問題靈敏度問題7/26/202331體外診療產品簡介2.3膠體金免疫層析試紙條-試紙條的組成測試線（T線）控制線（C線）膠體金墊樣品墊NC膜（硝酸纖維素膜）層析方向PVC底板有4個組分：⑴、吸水紙（樣品墊）。⑵、玻璃纖維膜（膠體金墊）。膜上吸附著干燥的金標抗體（流動帶）。⑶、硝酸纖維素膜，膜上包被著抗原或抗體條帶和能與標記物直接起反應的質控物條帶（檢測帶）。⑷、吸水紙。以上各組份首尾互相銜接。

7/26/202332體外診療產品簡介2.3膠體金免疫層析試紙條-檢測原理基本原理是將已知的特異性抗原或抗體固定于硝酸纖維素膜上某一區(qū)帶作為檢測帶在樣品區(qū)滴加樣品后，借助毛細作用，樣品泳動至玻璃纖維膜，金標復合物溶解，并與樣品進行抗原抗體反應，形成復合物，繼續(xù)泳動至硝酸纖維素膜的檢測區(qū)，帶有金標記的復合物被檢測區(qū)抗原或抗體捕獲，呈現(xiàn)紅色條帶。如樣品中沒有待測抗原或抗體，則不發(fā)生結合，即不顯色在硝酸纖維素膜檢測區(qū)附近一般再固定上針對金標結合物相應的抗原或抗體作為質控帶，無論樣品中有無待測物，質控線都應顯示，如無，則檢測失敗。整個過程一般在15分鐘內完成，操作簡單、快速，且不需任何儀器。7/26/202333體外診療產品簡介2.3膠體金免疫層析法-舉例（以HCG檢測為例）HCG-β亞基抗體Y2，羊抗鼠二抗固定于硝酸纖維素膜上，金標HCG-α亞基單抗Y1固定于玻璃纖維素膜上。7/26/202334體外診療產品簡介2.4蛋白芯片7/26/202335體外診療產品簡介2.4蛋白芯片蛋白質芯片是指固定于支持介質上的蛋白質構成的微陣列。生物芯片基因芯片蛋白質芯片微流控芯片7/26/202336體外診療產品簡介2.4蛋白芯片-檢測原理蛋白芯片技術的基本原理:將各種蛋白質有序地固定于滴定板、濾膜和載玻片等各種載體上，然后，用標記了特定熒光的蛋白質或其他成分與芯片作用，經漂將未能與芯片上的蛋白質互補結合的成分洗去，再利用熒光掃描儀或激光共聚焦掃描技術，測定芯片上各點的熒光強度，通過熒光強度分析蛋白質與蛋白質之間相互作用的關系，由此達到測定各種蛋白質功能的目的。

固定在芯片上的蛋白可以是：抗原、抗體、小肽、受體和配體、蛋白質-DNA和蛋白質-RNA復合物等。7/26/202337體外診療產品簡介2.4蛋白芯片—優(yōu)勢蛋白芯片較之傳統(tǒng)分析方法主要有以下優(yōu)點

1、蛋白芯片上可以實現(xiàn)成千上萬個蛋白質樣品的高通量平行分析,一次實驗可提供大量數據----高通量

2、有高的信噪比----高準確性、高靈敏度

3、所需樣品量極少----微量化

4、在整個基因組和蛋白質組水平將ＤＮＡ序列信息與蛋白質產物直接聯(lián)系起來

5、快速、微型化和自動化。

7/26/202338體外診療產品簡介2.4蛋白芯片的檢測探針標記檢測法無探針標記檢測法表面增強激光解吸離子化技術(Surfaceenhancedlaserdesorption/ionization,SELDI)表面等離子體共振檢測技術

（surfaceplasmonresonance,SPR）原子力顯微鏡檢測技術（atomicforcemicroscope,AFM）同位素標記檢測熒光標記檢測化學發(fā)光檢測酶免疫標記檢測膠體金標記檢測7/26/202339體外診療產品簡介2.4蛋白芯片的應用和問題疾病診斷和預警

藥物開發(fā)

蛋白質組學成本過高,需一系列昂貴的尖端儀器

芯片的標準化問題

提高芯片的特異性、簡化樣品制備和標記操作程序、增加信號檢測的靈敏度和消除芯片背景對于結果分析的影響等等7/26/202340體外診療產品簡介3核酸檢測核酸檢測（nucleicacidtesting，NAT）是直接檢測病原體核酸的一系列技術的總稱，可在尚未檢測到抗原或抗體前，先檢測到病毒核酸。其基本步驟包括核酸提取、擴增和檢測。也就是常說的基因檢測，是通過血液、其他體液或細胞對DNA進行檢測的技術，可以診斷疾病，也可以用于疾病風險的預測。7/26/202341體外診療產品簡介3核酸檢測的特點顯著縮短窗口期:HIV窗口期縮短45%，HCV縮短89%，HBV縮短50%。提高靈敏度:理論上擴增體系中單拷貝模板也能被檢測出。特異性好:使用熒光探針技術的PCR檢測，幾乎沒有方法學的假陽性。直接揭示病原體的存在

對操作者及檢測環(huán)境的要求較高檢測成本相對較高7/26/202342體外診療產品簡介3核酸檢測的一般流程核酸樣品的制備：

從血液、體液、組織中提取或PCR擴增樣品的檢測：

核酸雜交、PCR、熒光定量PCR、PCR-ELISA等結果判讀：

電泳、膜、熒光定量PCR儀等7/26/202343體外診療產品簡介3核酸檢測在臨床診斷中的應用定性診斷

血液篩查病原體篩查診