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文檔簡介

第八章電泳分離技術(shù)、電泳概念電泳:是指在電場作用下,帶電顆粒向帶相反電荷的電極作定向移動的現(xiàn)象稱為電泳。=、聚丙烯酰胺凝胺電泳(一)、電泳介質(zhì)丙烯酰胺(單體)十甲叉雙丙烯酰胺(交聯(lián)劑)催化劑三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠T=(a+b)/m×100%C=b/(a+b)×100%a:丙烯酰胺的質(zhì)量(g)b:甲叉雙丙烯酰胺的質(zhì)量(gm:緩沖液的終體積(mL)T:兩個單體的總百分濃度C:與總濃度有關(guān)的交聯(lián)百分濃度凝膠的機械強度和孔徑大小等由T和C兩個參數(shù)決定。(二)、分類根據(jù)凝膠孔徑和緩沖體系的不同:v連續(xù)電泳不連續(xù)電泳根據(jù)樣品的處理方式不同:vSDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳v常規(guī)(非變性)電泳(三)不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠電泳加樣樣遷移方向1、不連續(xù)PAGE電泳:用濃縮膠(上層膠)和分離膠(下層膠)兩種不同濃度,不同ρH的凝膠灌制凝膠板,通過電荷效應(yīng),濃縮效應(yīng)和分子篩效應(yīng),達(dá)到蛋白質(zhì)高分辨率的分離。濃縮膠3.5%凝膠濃度分離膠(Tris-HCl,pH6.8)12%凝膠濃度(Tris-HCl,pH8.8)電泳緩沖液(Tis-glycine(甘氨酸),pH8.3)不同的pH,氯離子和甘氨酸將會在電泳中發(fā)揮作用圣2、樣品分離原理(1)樣品的濃縮效應(yīng)(2)凝膠的分子篩效應(yīng)(3)電荷效應(yīng)圣(1)樣品的濃縮效應(yīng)電泳介質(zhì)的四個不連續(xù)性,使樣品在電泳開始時,得以濃縮,然后再被分離。①、凝膠層的不連續(xù)性濃縮膠:大孔膠濃縮膠分離膠:小孔膠樣品在大孔與小孔凝膠的界面分離膠處濃縮,區(qū)帶變窄②緩沖離子成分的不連續(xù)性上電極緩沖液:(Trs+Gy)濃縮膠(Tris+cl,)分離膠:不電極緩沖液pH:(

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