人豬流感采集包裝

1山西省疾病預(yù)防控制中心張凡非依據(jù)衛(wèi)生部《甲型H1N1流感病毒實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)方案(試行)》衛(wèi)生部《甲型H1N1流感預(yù)防控制技術(shù)指南（試行）》衛(wèi)生部《甲型H1N1流感診療方案（2009年試行版第一版）》《人感染高致病性禽流感應(yīng)急預(yù)案

》國家CDC《全國流感/人禽流感監(jiān)測實(shí)施方案》《人間傳染的病原微生物名錄》《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》（2005年衛(wèi)生部45號令)2人禽流感3一、采集對象及采集要求1.采集對象人禽流感醫(yī)學(xué)觀察病例、疑似病例、臨床診斷病例及需要進(jìn)一步研究的確診病例。其他需要進(jìn)行人禽流感診斷或排除者。需要采集的環(huán)境標(biāo)本。4一、采集對象及采集要求2.采集要求從事人禽流感檢測標(biāo)本采集的技術(shù)人員必須經(jīng)過生物安全培訓(xùn)和具備相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)技能。在標(biāo)本的采集過程中參照《人感染高致病性禽流感應(yīng)急預(yù)案》(附件5)規(guī)定的防護(hù)措施進(jìn)行安全防護(hù)。5一、采集對象及采集要求2.采集要求住院病例的標(biāo)本由所在醫(yī)院的醫(yī)護(hù)人員在當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制機(jī)構(gòu)的專業(yè)人員指導(dǎo)下采集。標(biāo)本采集的種類和具體數(shù)量由現(xiàn)場工作組確定。密切接觸者標(biāo)本由當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)采集。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測工作的需要，結(jié)合病程再次采樣。6二、標(biāo)本采集的種類a.上呼吸道標(biāo)本：咽拭子、鼻拭子、鼻咽吸取物、咽漱液、深咳痰液。b.下呼吸道標(biāo)本：呼吸道吸取物、支氣管灌洗液、肺組織活檢標(biāo)本。c.血清標(biāo)本：每一病例必須采集血清標(biāo)本，須采集急性期和恢復(fù)期雙份血清。7二、標(biāo)本采集的種類d.尸檢標(biāo)本：主要采集肺、氣管組織標(biāo)本，條件允許下也可采集肝、腎、脾、心臟、腦、淋巴結(jié)等組織標(biāo)本。e.其他標(biāo)本：如果病例有腹瀉癥狀可在發(fā)病后采集糞便標(biāo)本，有胸水者可采集胸水標(biāo)本。8每個(gè)病例應(yīng)盡可能同時(shí)采集上、下呼吸道標(biāo)本。

需要排除人禽流感的死亡病例則根據(jù)《傳染病病人或疑似傳染病病人尸體解剖查驗(yàn)規(guī)定》（中華人民共和國衛(wèi)生部令第43號）的規(guī)定采集尸體標(biāo)本，沒有條件進(jìn)行尸體解剖的可采集呼吸道灌洗液或經(jīng)皮穿刺采集肺組織標(biāo)本。9三、標(biāo)本采集的時(shí)間上呼吸道標(biāo)本：在發(fā)病后的1～7日，最佳的采集時(shí)間為發(fā)病后3天以內(nèi)下呼吸道標(biāo)本：盡可能和上呼吸道標(biāo)本同時(shí)采集。急性期血清：在發(fā)病后的7天內(nèi)采集，恢復(fù)期血清在發(fā)病后的3～4周采集。10三、標(biāo)本采集的時(shí)間尸檢標(biāo)本：病人死亡后應(yīng)依法盡早進(jìn)行解剖，在嚴(yán)格按照生物安全防護(hù)的條件下，進(jìn)行尸檢。糞便標(biāo)本：在發(fā)病后有腹瀉癥狀時(shí)采集。胸水標(biāo)本：在發(fā)病后出現(xiàn)胸水癥狀時(shí)采集。11四、采樣液及采樣方法1.采樣液：采樣液應(yīng)包含有一定量的蛋白質(zhì)和抗菌素常用的采樣液有：普通肉湯（只用于雞胚，對細(xì)胞有毒性），pH7.4-7.6的Hanks氏液或MEM/DMEM液在采樣液中需加入抗菌素，可用青霉素（終濃度為100u/ml）慶大霉素（其終濃度1mg/ml）和抗真菌藥物（終濃度為2ug/ml）加入抗菌素后重新調(diào)pH為7.4，然后分裝，每個(gè)采集管3ml,-20℃保存。標(biāo)本采集后應(yīng)立即放入適當(dāng)?shù)牟蓸右褐械蜏乇４?12四、采樣液及采樣方法2.采樣方法：

A.咽拭子

用2根拭子同時(shí)擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，將拭子頭浸入3ml采樣液的管中，尾部棄去，旋緊管蓋。13四、采樣液及采樣方法2.采樣方法：

B.鼻拭子

將一根拭子（最好聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子，因?yàn)槟绢^柄棉拭子會抑制PCR實(shí)驗(yàn)）輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。另取一拭子？以同樣的方法采集另一側(cè)鼻孔。上述兩根拭子浸入同一3ml采樣液的管中，尾部棄去。旋緊管蓋。1415采咽拭子的器材和容器16采鼻拭子的器材和容器四、采樣液及采樣方法2.采樣方法：

C.鼻咽吸取物或呼吸道抽取物

用與負(fù)壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液或從氣管抽取呼吸道分泌物。將收集器頭部插入鼻腔或氣管，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并用采樣液3ml涮洗收集器1次（亦可用小孩導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來替代收集器）。17四、采樣液及采樣方法2.采樣方法：

D.深咳痰液要求病人深咳后，將咳出的痰液收集于50ml含3ml采樣液的螺口采樣管中。

18四、采樣液及采樣方法2.采樣方法：

E.咽漱液用10ml不含抗菌素的采樣液或生理鹽水漱口。漱時(shí)讓患者頭部微后仰，發(fā)“噢”聲，讓洗液在咽部轉(zhuǎn)動(dòng)。然后將咽漱液收集于50ml無菌的螺口的塑料管中。無條件的可用平皿或燒杯收集咽漱液并轉(zhuǎn)入10ml螺口塑料管中。

19四、采樣液及采樣方法2.采樣方法：

F.呼吸道灌洗液：將收集器頭部從鼻孔或氣管插口處插入氣管（約30cm深處），注入5ml生理鹽水，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并用采樣液涮洗收集器1次（亦可用小孩導(dǎo)尿管接在50ml注射器上來替代收集器）。20四、采樣液及采樣方法2.采樣方法：

G.胸水在B超定位下進(jìn)行胸腔穿刺，抽取胸水5ml,置于無菌的塑料螺口管中。H.肺組織活檢標(biāo)本在超聲或X線定位下，經(jīng)皮穿刺取肺組織活檢標(biāo)本，置于含3ml采樣液的塑料螺旋管中。21四、采樣液及采樣方法2.采樣方法：

I.尸檢標(biāo)本每一采集部位分別使用不同消毒器械，以防交叉污染；每種組織應(yīng)多部位取材，各部位應(yīng)取20-50mg,淋巴結(jié)取2個(gè)。J.糞便標(biāo)本采集5-10g糞便置于含5-10ml采樣液無菌螺口管中，嚴(yán)格密封。22四、采樣液及采樣方法2.采樣方法：

K.血清標(biāo)本用真空負(fù)壓管（塑料材質(zhì)為好）采集5毫升血液，1500-2000rpm室溫下離心10min。收集血清于2ml無菌螺口塑料管中。在4℃下運(yùn)送。23四、采樣液及采樣方法2.采樣方法：

環(huán)境樣本采樣液：

可使用Hank's或Eagle's等培養(yǎng)液加入以下抗菌素和0.5%BSA：氨芐青霉素(2x106IU/L)鏈霉素(200mg/L)多粘菌素B(2x106IU/L)慶大霉素(250mg/L)

制霉菌素(0.5x106IU/L)

鹽酸氧氟沙星(60mg/L)磺胺甲基異惡唑(0.2g/L)。24四、采樣液及采樣方法2.采樣方法：籠具表面標(biāo)本：

用沾有采樣液的帶有聚丙烯纖維頭的拭子擦拭籠具表面3-5個(gè)不同部位，然后將擦拭過的拭子放入含5ml采樣液的采樣管中，尾部棄去。

（含聚丙烯纖維拭子的采集標(biāo)本:先將含聚丙烯纖維的拭子在管壁反復(fù)擠壓后取出）25四、采樣液及采樣方法2.采樣方法：水樣本：在禽類活動(dòng)或籠具旁的水溝或水池的不同部位采集15-20ml,置于50ml外螺旋蓋的管內(nèi)。水樣標(biāo)本到實(shí)驗(yàn)室后應(yīng)在采樣管中加入上述抗生素和0.5%BSA，再進(jìn)行分裝。26四、采樣液及采樣方法

上述標(biāo)本采集后應(yīng)迅速至于冰上或者4℃以下保存，因?yàn)榱鞲胁《緦岷苊舾?。否則，會影響病毒的分離率。27四、采樣液及采樣方法

所有標(biāo)本采集后在生物安全二級實(shí)驗(yàn)室生物安全柜內(nèi)分裝成一式三份（分裝標(biāo)本的生物安全柜不能用于提取核酸）。一份當(dāng)?shù)貦z測用，一份送中國疾病預(yù)防控制中心檢測，一份保存以備復(fù)核。28五、樣品的包裝依據(jù)：二○○六年一月十一日衛(wèi)生部制定的《人間傳染的病原微生物分類名錄》二○○五年十二月二十八日發(fā)布的衛(wèi)生部第45號令《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》,二○○六年二月一日起執(zhí)行。

29五、樣品的包裝感染性物質(zhì)是那些已知或有理由認(rèn)為含有致病原的物質(zhì)。致病原是指能使人或動(dòng)物感染疾病的微生物（包括病毒、細(xì)菌、支原體、衣原體、立克次體、放線菌、真菌和寄生蟲等）和其他因子，如朊病毒。國際民航組織《危險(xiǎn)物品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則》中將感染性物質(zhì)分為A、B兩類。

感染性物質(zhì)30五、樣品的包裝指在運(yùn)輸過程中與之接觸能對健康人或動(dòng)物造成永久性殘疾或致命疾病的感染性物質(zhì)。此處“接觸”系指感染性物質(zhì)離開保護(hù)性包裝與人或動(dòng)物的身體接觸或經(jīng)呼吸道吸入的情況。A類感染性物質(zhì)使人染病或使人和動(dòng)物都染病者聯(lián)合國編號為UN2814，其運(yùn)輸專用名稱為危害人的感染性物質(zhì)；僅使動(dòng)物染病者聯(lián)合國編號為UN2900，其運(yùn)輸專用名稱為僅危害動(dòng)物的感染性物質(zhì)。A類感染性物質(zhì)31五、樣品的包裝不符合列入A類標(biāo)準(zhǔn)的感染性物質(zhì)。其聯(lián)合國編號為UN3373。運(yùn)輸專用名稱為生命物質(zhì)B類。

B類感染性物質(zhì)32五、樣品的包裝

衛(wèi)生部第45號令“可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定”第十二條規(guī)定運(yùn)輸高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本的容器或包裝材料應(yīng)當(dāng)達(dá)到國際民航組織《危險(xiǎn)物品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則》（Doc9284包裝說明PI602）規(guī)定的A類包裝標(biāo)準(zhǔn)，符合防水、防破損、防外泄、耐高溫、耐高壓的要求，并應(yīng)當(dāng)印有衛(wèi)生部規(guī)定的生物危險(xiǎn)標(biāo)簽、標(biāo)識、運(yùn)輸?shù)怯洷怼⒕嬗谜Z和提示用語。

33五、樣品的包裝

這一包裝系統(tǒng)可以應(yīng)用于所有的感染性物質(zhì)，由以下三層包裝組成：

1.主容器：初級容器防水、防滲漏，內(nèi)裝標(biāo)本。其外包裹有的吸收材料。

樣品必須保存于大小合適、帶膠墊的外螺旋蓋的塑料管中，擰緊蓋、封好管口（如用封口膜或防水的塑料膠帶袋）管外要用油性筆注明標(biāo)本的編號、種類、姓名及采樣日期、采集量。

34五、樣品的包裝

2.次級包裝：次級包裝為第二層持久的、防水、防滲漏的包裝，它封閉和保護(hù)初級容器。多個(gè)包有緩沖材料的初級容器可放于同一個(gè)次級包裝中，但是，這要求同時(shí)也放入足夠的吸收材料以確保一旦發(fā)生泄漏后所有液體都可被吸收。標(biāo)本有關(guān)信息填寫“疑似人感染高致病性禽流感/不明原因肺炎病例標(biāo)本送檢單”，用一塑料袋密封，并粘在塑料容器外面。35五、樣品的包裝

3.外層包裝：次級包裝包裹有合適的緩沖材料后，即可被裝入外層運(yùn)輸包裝。外層運(yùn)輸包裝保護(hù)其內(nèi)容物免受外界影響，如運(yùn)輸過程中的物理損壞。樣品的容器要使用能夠承受不少于95Kpa壓力的高質(zhì)量的防水包裝材料并且密封，以防止運(yùn)輸發(fā)生內(nèi)容物的外泄。36五、樣品的包裝感染性物質(zhì)外包裝件上必須做出如下的使用標(biāo)記：1）托運(yùn)人名稱地址和收貨人名稱地址。2）運(yùn)輸專用名稱：A類感染性物質(zhì)為：感染性物質(zhì)；B類感染性物質(zhì)為：生命物質(zhì)。3）聯(lián)合國編號（UN編號）4）運(yùn)送A、B類感染性物質(zhì)的凈含量：A類感染性物質(zhì)要標(biāo)出；B類感染性物質(zhì)可以不標(biāo)出。5）標(biāo)記負(fù)責(zé)人姓名和聯(lián)系電話。6）如使用干冰作制冷劑，應(yīng)標(biāo)出DryIce(干冰)、UN1845以及干冰的凈重。7）生物危險(xiǎn)標(biāo)識。37五、樣品的包裝冷凍劑的使用:

1)在使用冰、干冰或其他冷凍劑進(jìn)行冷藏運(yùn)輸時(shí)，冷凍劑必須放在輔助容器和外包裝之間，內(nèi)部要有支撐物固定，當(dāng)冰或干冰消耗以后，仍可以把輔助容器固定在原位置上。如使用冰，外包裝必須不透水。如果使用干冰，外包裝必須能夠排放二氧化碳?xì)怏w，防止壓力增加造成容器破裂。在使用冷凍劑的溫度下，主容器和輔助容器必須能保持良好性能，在冷凍劑消耗完以后，仍能承受運(yùn)輸中的溫度和壓力。38五、樣品的包裝冷凍劑的使用:

2)當(dāng)使用液氮對樣品進(jìn)行冷藏時(shí)，必須保證主容器和輔助容器能適應(yīng)極低的溫度。此外，還必須符合其他有關(guān)液氮的運(yùn)輸要求。

3)主容器和輔助容器須在使用制冷劑的溫度下，以及在失去制冷后可能出現(xiàn)的溫度和壓力下保持完好無損。主容器和輔助容器必須在無泄漏的情況下能夠承受95kPa的內(nèi)壓，并能保證在－40℃到＋55℃的溫度范圍內(nèi)不被損壞。39A類感染性物質(zhì)的包裝與標(biāo)簽40B類感染性物質(zhì)的包裝與標(biāo)簽4142高致病性病原微生物運(yùn)輸?shù)怯洷砩镂ｋU(xiǎn)標(biāo)識六、標(biāo)本的運(yùn)送要求

1.標(biāo)本的運(yùn)送必須專車和不少于兩人的專人護(hù)送或者通過航空運(yùn)輸,單位或者個(gè)人不得通過公共電（汽）車和城市鐵路運(yùn)輸病原微生物菌（毒）種或者樣本。2.標(biāo)本運(yùn)送的生物安全要求應(yīng)按照《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》（國務(wù)院424號令）和《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》（中華人民共和國衛(wèi)生部第45號令）等有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。43七、標(biāo)本的保存

新鮮的臨床采集標(biāo)本應(yīng)在4℃條件下，24小時(shí)內(nèi)運(yùn)送至能開展相關(guān)檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室；未能24小時(shí)內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室的，應(yīng)置-70℃或以下保存。如無條件的則于-20℃冰箱暫存。血清標(biāo)本時(shí)間不超過3天可暫存在4℃冰箱，在-20℃以下冰箱內(nèi)可長期保存。標(biāo)本運(yùn)送期間應(yīng)避免反復(fù)凍融。標(biāo)本應(yīng)設(shè)立專庫或?qū)９駟为?dú)保存。44八、標(biāo)本采集的防護(hù)要求

采集人禽流感臨床樣本時(shí)，采集人員在標(biāo)本的采集過程中參照《人感染高致病性禽流感應(yīng)急預(yù)案》(附件5)規(guī)定的防護(hù)措施的需要做好個(gè)人防護(hù)，戴防護(hù)口罩、帽子、護(hù)目鏡、乳膠手套（雙層），穿工作服、防護(hù)衣、鞋套。45九、實(shí)驗(yàn)室生物安全

凡涉及活病毒的操作必須在生物安全三級實(shí)驗(yàn)室（BSL-3級）里進(jìn)行，不涉及活病毒的實(shí)驗(yàn)可以在生物安全二級實(shí)驗(yàn)室（BSL-2級）內(nèi)操作，但是必須采取生物安全三級防護(hù)。所有涉及人禽流感病毒的相關(guān)活動(dòng)必須符合《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》（國務(wù)院424號令）的有關(guān)規(guī)定。46甲型H1N1流感人感染豬流感預(yù)防控制技術(shù)指南（試行）附件347一、標(biāo)本采集所有豬流行性感冒（H1N1病毒）疑似病例？應(yīng)該采集上呼吸道標(biāo)本來檢測豬流行性感冒（H1N1病毒）的病毒。疾病發(fā)病后應(yīng)盡快采集如下標(biāo)本：鼻咽拭子/吸取物或者鼻腔沖洗液/吸取物。如果不能收集這些標(biāo)本，可合并鼻拭子與口咽拭子。氣管插管的病人也應(yīng)收集氣管吸取物。標(biāo)本應(yīng)置于無菌病毒運(yùn)輸液，并立即用冰塊或冰排保存或置于4℃（冰箱），并馬上運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室。48一、標(biāo)本采集排除標(biāo)本的標(biāo)準(zhǔn)：1.未在2-4°C(≤4天)或-70°C及以下保存的樣本2.以上未列的其它不當(dāng)樣本49二、拭子理想的情況下，標(biāo)本應(yīng)使用頭部為合成纖維的拭子（例如，聚酯纖維），用鋁或塑料做桿。不推薦棉拭子和木桿。不能用海藻酸鈣做的拭子收集標(biāo)本。標(biāo)本采集管應(yīng)包含3毫升病毒運(yùn)輸液50常采集標(biāo)本的種類1、咽拭子、鼻咽拭子2、雙份血3、確診病例出院前糞便標(biāo)本

51標(biāo)本采集所需要的器材1、拭子、壓舌板、采樣液管、剪刀2、10ml真空取血管3、記號筆、標(biāo)簽、登記表4、酒精、塑料袋、包裝容器等5、防護(hù)用品52標(biāo)本采集注意事項(xiàng)1、拭子不要剪得太