6種多倍體大花萱草組織培養(yǎng)研究

種多倍體大花萱草組織培養(yǎng)研究分蘗2~3株,而且不牢固或很少牢固,繁殖效率低,不能滿意市場需求,需要利用植物組織培育技術(shù)對引進的萱草品種進行種苗的大量繁殖,以滿意園林市場需求,解決限制多倍體大花萱草繁殖速度的瓶頸問題。

大花萱草的組織培育討論已有一些報道[1-6]。

采納組織培育方法可以大幅提高繁殖系數(shù),短時間內(nèi)就可以生產(chǎn)出大量的種苗投放市場,加快了新品種的應用。

為了能夠滿意市場對多倍體大花萱草數(shù)量及品種的需求,降低由國外引種的成本,增加新品種多倍體的數(shù)量,該討論引進多倍體大花萱草“紅運”“紅寶石”“橘黃色”“肉粉色”“大金杯”和“金娃娃”6個品種為材料,采納組織培育的繁殖方式進行離體快繁技術(shù)討論,為其實現(xiàn)工廠化生產(chǎn)供應理論依據(jù)和技術(shù)支持。

1材料試驗材料為哈爾濱市農(nóng)業(yè)科學院園區(qū)內(nèi)種植的6個多倍體大花萱草品種,取樣時間為每年6—9月盛花期。

外植體消毒與處理。

選取花蕾、分蘗莖段和根作為外植體材料。

將實行的分蘗莖段切成1~2的留芽小段,先用洗衣粉清洗材料,再用流水沖洗60后,在超凈工作臺上用滅菌劑處理,選用75%%升***滅菌,設5個處理表1。

不定芽誘導。

不同植物品種相宜的基本培育基也不盡相同。

目前,多倍體大花萱草最常用基本培育基為培育基[7-9],通過在基本培育基中添加不同植物生長調(diào)整物質(zhì)和比例促使外植體材料分化和發(fā)育,其次是添加不同的養(yǎng)分物質(zhì),調(diào)整培育基內(nèi)的微環(huán)境,達到適合外植體發(fā)育和分化抱負環(huán)境。

以培育基為基本培育基,添加不同濃度的植物生長調(diào)整劑6-、,共設置10個濃度梯度表2。

將預處理好的6種多倍體萱草的分蘗莖段分別接種于上述培育基中,每個品種每個處理接種10瓶,每瓶3個外植體,重復3次。

以為基本培育基,添加蔗糖30、瓊脂7,,培育溫度25℃左右,空氣相對濕度掌握在40%~60%,光照強度1000~2000。

培育肯定時間后調(diào)查污染狀況和統(tǒng)計不定芽誘導狀況。

誘導率=勝利誘導不定芽數(shù)接種培育基總數(shù)100%。

不定芽增殖培育。

以培育基為基本培育基,添加不同濃度植物生長調(diào)整劑6-、,共設6個濃度梯度表3,將經(jīng)過勝利誘導的6種多倍體大花萱草組培苗分別接種于增殖培育基上,每個品種每個處理接種10瓶,每瓶3叢塊,重復3次,20統(tǒng)計其芽量和增殖系數(shù)。

光照強度為2000~3000,溫度為25℃。

增殖系數(shù)=增殖苗數(shù)接種苗數(shù)。

生根培育。

當不定芽長至2~3時,將不定芽分割成單個外植體,以12為基本培育基添加不同濃度的和表4,比較2種植物生長調(diào)整劑的生根狀況。

選擇出“紅寶石”“紅運”“橘黃色”“肉粉色”“大金杯”和“金娃娃”增殖培育20、4~6高的健壯植株,其葉色濃綠,切除基部的愈傷組織,分別接種于生根培育基上,每處理接種10瓶,每瓶接種3株培育苗,重復3次。

轉(zhuǎn)接后留意觀看記錄苗的生根狀況,20后測量根長,統(tǒng)計生根率,并進行移栽。

生根率=生根苗數(shù)接種小苗數(shù)100%。

煉苗及移栽。

打開組培瓶蓋,在室溫下煉苗3~4接受太陽光照耀,取出組培苗并用流水洗凈根系上的培育基,然后直接移栽到養(yǎng)分缽中,待長出新芽后再移栽到花盆或大田。

2外植體的確立從3種外植體接種到培育基后的表現(xiàn)看,花蕾部分先產(chǎn)生愈傷組織,再由愈傷組織誘導生成不定芽,而根的誘導率極低,分蘗莖段以器官發(fā)生途徑直接誘導形成不定芽,縮短了不定芽生成時間,不簡單引起變異,是誘導不定芽形成的最佳外植體。

滅菌方法對外植體的影響由表5可知,乙醇處理時間過長簡單導致外植體死亡,然而乙醇處理時間短則簡單導致滅菌效果不抱負。

在乙醇處理時間全都的狀況下外植體污染率隨著升***處理時間增加而削減,但死亡率同步上升。

說明滅菌時間越長,其污染率越低,而滅菌時間過長,對外植體會造成嚴峻的創(chuàng)傷,如加重外植體的褐化程度,使外植體發(fā)生水浸狀態(tài)變化致使其死亡或失水萎蔫[10]。

但是滅菌時間過短,污染率增加,不能達到真正的滅菌目的,污染致使外植體死亡。

綜合認為,75%乙醇30+%升***8是多倍體大花萱草分蘗莖段相宜的滅菌方法。

多倍體大花萱草不定芽形成過程將多倍體大花萱草的分蘗莖段分割成1~2,接種到誘導培育基中,5后莖芽呈黃綠色,部分開頭伸長,7左右莖芽開頭增粗略有伸長,顏色偏綠,新長出的嫩葉稍稍向外翻卷;10后莖芽長出嫩葉,,顏色翠綠,莖基部消失不同數(shù)量的不定芽,嫩葉向外翻卷,寬度明顯增加;接種15后,新芽伸長量平均達3左右,不定芽增多,形成芽叢;20~25,不定芽平均長度可達5左右圖1。

不同濃度6-和配比對不定芽誘導的影響6-是誘導再生芽的主要因素,隨著6-濃度的增加,產(chǎn)生的不定芽數(shù)漸漸增加,但是過高濃度的6-會抑制叢生芽后期生長、黃化,直至漸漸枯萎。

另外添加肯定濃度的生長素可以促進不定芽分化,提高平均再生芽數(shù),但過高會使不定芽矮小,抑制其伸長生長,因此適合的植物生長調(diào)整劑配比是生長不定芽的必要條件。

由表6可知,不同濃度的植物生長調(diào)整劑對不同基因型多倍體萱草的誘導率影響也有很大的差異,從整體變化趨勢看,“紅寶石”“紅運”“橘黃色”“肉粉色”和“大金杯”在3、4、5、6、7中有不同的表現(xiàn),但誘導率最高的狀況都消失在6培育基上;“金娃娃”與其他5個品種不同,在2、3、4、5、6上較為活躍,而誘導率最高的狀況消失在處理3中。

多倍體大花萱草增殖培育由表7可知,不同濃度的植物生長調(diào)整劑對“紅寶石”“紅運”“橘黃色”“肉粉色”“大金杯”和“金娃娃”6個品種芽量和增殖系數(shù)的影響較大。

“橘黃色”“肉粉色”和“金娃娃”在3處理上芽量和增殖系數(shù)最大,其中,“橘黃色”芽量為185個,;“紅寶石”和“紅運”的最大芽數(shù)消失在4處理中,“紅運”的增殖系數(shù)最大,;“大金杯”。

不同植物生長調(diào)整劑對6種多倍體萱草芽量和增殖系數(shù)的影響變化趨勢全都,但在同種處理上,不同品種間存在著差異:在2處理上,“紅寶石”“紅運”和“大金杯”的芽量和增殖系數(shù)均無變化,而“橘黃色”芽數(shù)為72,,“金娃娃”;在3處理上,芽數(shù)和增殖系數(shù)均表現(xiàn)為“紅寶石”“大金杯”“紅運”“肉粉色”“金娃娃”“橘黃色”。

多倍體大花萱草生根和成苗過程由圖2可知,將組培苗轉(zhuǎn)接到生根培育基中,4左右根部生成乳黃色根瘤狀,根瘤隨著時間的增加漸漸增大,7后每株長出3~4條白色細根,當組培苗轉(zhuǎn)接到生根培育基中16左右時,,顏色轉(zhuǎn)為黃綠色,根尖部依舊為黃白色,同時根瘤處長出一些白色細小須根,生根培育20左右時各品種根部生長都達到了煉苗標準,。

因此,多倍體大花萱草組培苗相宜的生根培育時間為20左右。

不同濃度植物生長調(diào)整劑對多倍體大花萱草生根率的影響與表8相比,表9的生根率變化更大。

在無植物生長調(diào)整劑添加的狀況下,%~%,“肉粉色”和“金娃娃”在12+,%%,而在12+%%;當植物生長調(diào)整劑為時,“橘黃色”和“大金杯”最大生根率消失在濃度為12+,%、%,當植物生長調(diào)整劑為時,“橘黃色”最大生根率消失在12+,%,“大金杯”的最大生根率在12+,%,都較植物生長調(diào)整劑為時大幅降低,綜合2種植物生長調(diào)整劑對6種多倍體大花萱草根長、生根率的影響以及從價格考慮,建議在大批量生產(chǎn)中采納為佳。

3結(jié)論1通過對多倍體大花萱草花蕾、分蘗莖段和根作為外植體討論發(fā)覺,花蕾部分可產(chǎn)生愈傷組織,根的誘導率極低,分蘗莖段以器官發(fā)生途徑直接誘導形成不定芽,縮短了不定芽生成時間,不簡單引起變異,是誘導不定芽形成的最佳外植體。

75%乙醇30+%升***8是多倍體大花萱草分蘗莖段相宜的滅菌方法。

2多倍體大花萱草分蘗莖段在培育基中培育20~25,不定芽