動物細(xì)胞培養(yǎng)的準(zhǔn)備

動物細(xì)胞培養(yǎng)的準(zhǔn)備第1頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月玻璃器皿金屬器械橡膠塑料制品

第2頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月玻璃器皿的清洗

浸泡（自來水）→刷洗（洗衣粉）→酸泡（24小時）→自來水沖洗→蒸溜水浸泡和沖洗→50℃烘干

橡膠、塑料制品的清洗

清水清洗→浸于自來水過夜→用紗布或棉簽和50℃稀洗液刷洗→流水沖洗（15－20遍）→晾干→浸于清潔液15分鐘→流水沖洗（15－20遍）→蒸餾水浸洗三次，三蒸水泡24小時→晾干或50℃烘干備用。第3頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月金屬器械的清洗

放到含洗滌劑的水中反復(fù)刷洗后→自來水反復(fù)沖洗干凈→晾干→用75％酒精擦拭→自來水反復(fù)沖洗干凈→最后三蒸水浸洗3次，晾干或50℃烘干備用。

正壓除菌濾器的清洗

含稀洗滌劑的水中，反復(fù)刷洗后→流水沖洗15min→漓水→蒸餾水浸泡24h→三蒸水浸泡24h→晾干或50℃烘干備用。第4頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月塑料器材常用的塑料器材有多孔培養(yǎng)板（4孔、6孔、12孔、24孔、96孔）、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶及吸頭。重復(fù)使用的處理步驟：自來水刷洗3％HCl或2％NaOH溶液浸泡過夜自來水充分沖洗雙蒸水沖洗3次紫外線直接照射或輻照滅菌第5頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月清洗時應(yīng)注意：浸泡、煮沸、酸泡的器皿內(nèi)要充滿液體，不得有氣泡。沖洗時要流水振蕩沖洗，方法是：每瓶灌2/3容積的自來水，振蕩后倒掉，重復(fù)15-20次。煮沸前水面要高于器材5厘米，水沸后投入洗滌劑第6頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月配制時先在容器中加入蒸餾水，加熱溶解重鉻酸鉀，再將容器置流動自來水中，待重鉻酸鉀液冷卻后，緩慢加入濃硫酸，邊加邊攪拌。重鉻酸鉀（克）濃硫酸（毫升）蒸餾水（毫升）弱液1001001000次強(qiáng)液1202001000強(qiáng)液631000200組成強(qiáng)度第7頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月包裝材料：牛皮紙硫酸紙鋁箔紗布金屬消毒桶鋁質(zhì)飯盒方式：全包裝局部包裝第8頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月包裝時應(yīng)注意：手指與器材接觸面積要小，手指不能觸及器材的使用端；封閉器材使用端，標(biāo)記器材手持端；小包裝；玻璃管道口（尖吸管、移液管手持端等）加棉花。第9頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月消毒滅菌方法清除或殺滅物品上的一切微生物,以殺滅芽孢為準(zhǔn)第10頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月物理法1：紫外線消毒紫外線直接照射消毒是各實(shí)驗(yàn)室常用的方法；主要用于培養(yǎng)室空氣、操作臺、塑料培養(yǎng)皿和培養(yǎng)板等表面消毒。紫外線消毒時產(chǎn)生臭氧，對身體有害，故紫外線消毒停止后30分鐘才可入室工作。目前有的實(shí)驗(yàn)室采用電子滅菌燈代替紫外燈進(jìn)行空氣消毒。

第11頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月紫外線消毒法是利用紫外線照射，使菌體蛋白發(fā)生光解、變性，菌體內(nèi)的核酸、酶遭到破壞而死亡的一種消毒方法。紫外線的殺菌力與其波長密切相關(guān)，最佳殺菌波長為250-270nm.第12頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月光照消毒法主要利用紫外線照射，使菌體蛋白發(fā)生光解變性而導(dǎo)致細(xì)菌死亡，常用方法有：日光曝曬消毒法日光曝曬法用于枕頭、床褥、床墊、棉絮等的消毒，一般曝曬6h可達(dá)到消毒，曝曬時2h翻面一次紫外線消毒法紫外線消毒法用于空氣消毒與物品表面的消毒第13頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月物理法2：干熱消毒干熱是指相對濕度在20%以下的高熱，由空氣導(dǎo)熱，傳熱較慢，干熱消毒滅菌常用的方法;1.焚燒滅菌法;2.燃燒滅菌法;3.干烤消毒滅菌法:用于高溫下不變質(zhì)、不損壞、不蒸發(fā)的物品，如油劑、粉劑、玻璃器具、金屬制品等;玻璃器皿，160oC90-240mins4.微波消毒滅菌法:①用于食品及餐具的消毒②醫(yī)療藥品及耐熱非金屬材料物品的消毒滅菌第14頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月物理法3：濾過消毒目前細(xì)胞培養(yǎng)工作中采用的培養(yǎng)用液，包括人工合成培養(yǎng)液、血清、消化用胰酶等常含有維生素、蛋白、多肽、生長因子等物質(zhì)，這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能，因而上述液體多采用濾過消毒以除去細(xì)菌。第15頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月濾膜使用時應(yīng)注意：

濾膜薄且光滑，容易移動，安裝時膜位置一定要放正。過分干燥的濾膜很脆，在高壓或高溫干燥時易破裂，因此安裝前可先用三蒸水潤濕濾膜。

為保證過濾效果，在使用時，每次墊兩張濾膜，上面一張孔徑為0．45微米，下面一張孔徑為0．22微米，或兩張均為0．22微米。

使用無齒玻片鑷子夾取濾膜，以防止鑷齒弄破濾膜。

加大壓力時用力應(yīng)均勻，用后打開濾器對光檢查濾膜是否移動和有無破裂。

第16頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月用于濾過除菌的各式濾器濾過除菌法：培養(yǎng)基、血清、消化酶、抗生素等。

第17頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月物理法4：濕熱滅菌濕熱由空氣和水蒸氣導(dǎo)熱，傳熱快，穿透力強(qiáng)，濕熱消毒滅菌常用的方法：煮沸消毒法高壓蒸汽滅菌法，一般高壓蒸汽滅菌的壓力為102.97-137.30kPa，溫度為121～1260C．經(jīng)15-30min可達(dá)到滅菌目的最常用、最有效的方法；布、金屬、橡膠、玻璃、某些培養(yǎng)液培養(yǎng)液，橡膠：10磅（115oC）20mins；玻璃、金屬：12磅（121oC）30mins；第18頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月高壓蒸汽滅菌器第19頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月化學(xué)消毒滅菌法化學(xué)消毒滅菌法是利用化學(xué)藥物滲透細(xì)菌體內(nèi)，使菌體蛋白凝固變性，干擾細(xì)菌酶的活性，抑制細(xì)菌代謝和生長或損害細(xì)菌膜的結(jié)構(gòu)，改變其滲透性，破壞其生理機(jī)能等，從而達(dá)到消毒滅菌目的第20頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月化學(xué)消毒劑的使用原則(1)根據(jù)物品的性能及微生物的特性，選擇合適的消毒劑。(2)嚴(yán)格掌握消毒劑的有效濃度、消毒時間及使用方法。

(3)消毒劑應(yīng)定期更換，易揮發(fā)的消毒劑要加蓋，并定期檢測，調(diào)整其濃度。(4)浸泡前將物品洗凈擦干，浸沒在消毒液內(nèi)的物品應(yīng)注意打開軸節(jié)或套蓋，管腔內(nèi)應(yīng)注滿消毒液。(5)在使用前用無菌生理鹽水沖凈消毒后的物品，避免消毒劑刺激人體組織第21頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月化學(xué)消毒劑的分類l、高效消毒劑高效消毒劑可殺滅一切微生物，包括芽孢(碘酊、福爾馬林等)2、中效消毒劑中效消毒劑可殺滅細(xì)菌繁殖體，不能殺滅芽孢(乙醇、碘伏等)3、低效消毒劑低效消毒劑可殺滅細(xì)菌繁殖體，不能殺滅結(jié)核桿菌、親水性病毒或芽孢(苯扎溴銨、氯己定等)第22頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月化學(xué)消毒劑的使用方法浸泡法侵泡法是將物品洗凈、擦干后，浸沒在消毒液中進(jìn)行消毒滅菌的方法。

擦拭法擦拭法是用消毒劑直接擦拭人體或物品表面，如皮膚、桌椅等，達(dá)到消毒滅菌的方法。

噴霧法噴霧法是利用噴霧器將消毒劑變成微粒氣霧彌散在空氣中．對空氣和物品表面進(jìn)行消毒滅菌的方法。熏蒸法熏蒸法是將消毒劑加熱或加人氧化劑，使其產(chǎn)生氣體來進(jìn)行消毒滅菌的方法。第23頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月常用消毒劑過氧乙酸peraceticacid

福爾馬林formalin（37-40%的甲醛溶液)戊二醛glutaraldehyde環(huán)氧乙烷ethyleneoxide含氯消毒劑乙醇alcohol苯扎漠銨(新潔爾滅)第24頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月過氧乙酸消毒效力：高效0.2％用于手消毒，浸泡1-2min0.5％用于用具消毒，浸泡30-60min0.2％-0.5％用于物體表面消毒，或浸泡10min1％-2％用于空氣消毒，8mL/m3，加熱熏蒸，密閉門窗30-120min第25頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月注意事項(xiàng)：

對金屬有腐蝕性，不可用于金屬器械的消毒；易氧化分解而降低殺菌力，需現(xiàn)配現(xiàn)用；濃溶液有腐蝕性，配制時要戴口罩和橡膠手套；存放于陰涼避光處，防高溫引起爆炸；第26頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月福爾馬林(37-40%的甲醛溶液)消毒效力：高效40％甲醛2～10mL／m3加水4～20mL加熱，作室內(nèi)物品及空氣消毒；40％甲醛40—60mL／m3加高錳酸鉀20—40g，柜內(nèi)熏蒸，密閉6～12h；10％甲醛可作浸泡器械消毒第27頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月注意事項(xiàng)：

蒸汽穿透力弱，因此衣服應(yīng)掛起消毒；消毒效果易受溫度、濕度影響，要求室溫在18℃以上，相對濕度在70％以上；對人體有一定毒性和刺激性，使用時注意防護(hù)；第28頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月戊二醛消毒效力：高效濃度和用法：2％戊二醛溶液加入0.3％碳酸氫鈉，成為2％堿性戊二醛，用于浸泡不耐高溫的金屬器械、醫(yī)學(xué)儀器、內(nèi)鏡等，消毒需10-30min，滅菌需7-10h.第29頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月注意事項(xiàng)：每周過濾1次，每2周應(yīng)更換消毒液1次；浸泡金屬類物品時，加入0.5％亞硝酸鈉作為防銹劑；消毒滅菌后的物品，使用前用無菌蒸餾水沖凈第30頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月含氯消毒劑含氯消毒劑：常用的有漂白粉消毒效力：中、高效濃度和用法：0.5％漂白粉溶液、0.5％～1％氯胺溶液用于浸泡餐具、便器等，浸泡30min；1％～3％漂白粉溶液、0.5％～3％氯胺溶液噴灑或擦拭地面、墻壁及物品表面；排泄物消毒：干糞5份加漂白粉1份攪拌，放置2h，尿液100mL加漂白粉1g，放置1h第31頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月注意事項(xiàng)：

消毒劑保存在密閉容器內(nèi)，置于陰涼、干燥、通風(fēng)處，減少有效氯的喪失；配制的溶液性質(zhì)不穩(wěn)定，應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用；有腐蝕及漂白作用，不宜用于金屬制品、有色衣服及油漆家具的消毒；3d更換一次消毒液第32頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月乙醇消毒效力：中效濃度和用法：70％-75％用于皮膚消毒95％用于燃燒滅菌注意事項(xiàng)：易揮發(fā)，需加蓋保存，定期測定，保持有效濃度有刺激性，不宜用于黏膜及創(chuàng)面消毒易燃，故應(yīng)置于避火處第33頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月苯扎漠銨(新潔爾滅)消毒效力：低效0.1％-0.2％用于皮膚消毒0.1%-0.2％用于金屬器械消毒，浸泡15-30min(加入0.5％亞硝酸鈉以防銹)第34頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月注意事項(xiàng)：對肥皂、碘、高錳酸鉀等陰離子表面活性劑有拮抗作用有吸附作用，會降低藥效，所以溶液內(nèi)不可投人紗布、棉花等對鋁制品有破壞作用，故不可用鋁制品盛裝第35頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月

75％酒精、新潔爾滅、過氧乙酸、乳酸和洗必泰等都是常用的有效消毒劑。0.5％的過氧乙酸在10分鐘內(nèi)可將芽孢菌和各種病毒殺死；乳酸蒸汽常用做無菌室內(nèi)或周圍環(huán)境的定期消毒；75％酒精常用于超凈臺的臺面、器械、實(shí)驗(yàn)操作者的皮膚等的消毒;0.1％新潔爾滅用于對桌、椅、地面、皮膚、操作臺面進(jìn)行擦拭或浸泡消毒；0.1％洗必泰水溶液用于皮膚浸泡消毒。

第36頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月總結(jié)：物理消毒

（1）射線消毒：60Co、X射線，用于血清和塑料制品滅菌。（2）紫外線：器皿需結(jié)合75％酒精浸泡，照射30min。（3）干熱滅菌：160?C，90～120min。主要用于玻璃、金屬器皿。（4）濕熱滅菌：121?C，30min；適用布、橡膠、某些塑料、金屬、玻璃等。（5）過濾除菌：用孔徑小于0.22μm的濾膜過濾，適用于培養(yǎng)用液和其他不能高壓滅菌的溶液。第37頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月總結(jié)：化學(xué)消毒

（1）70％（75％）酒精：用于手、器械、工作臺面。（2）0.1％新潔爾滅：主要用于手的清洗和工作臺面的清洗。（3）來蘇水：主要用于桌椅、墻壁、地面的消毒，也可用于空氣消毒。（4）0.5%過氧乙酸：10min可將芽孢菌殺死，用于表面消毒。（5）其他：乳酸、甲醛、高錳酸鉀、氯等。第38頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月無菌室的滅菌：

1.定期打掃無菌室：每周打掃一次，先用自來水拖地、擦桌子、超凈工作臺等，然后用3‰來蘇爾或者新潔爾

滅或者0.5％過氧乙酸擦拭。

2.CO2孵箱（培養(yǎng)箱）滅菌：先用3‰新潔爾滅擦拭，然后用75％酒精擦拭或者0.5％過氧乙酸，再用紫外燈照射

3.實(shí)驗(yàn)前滅菌：打開紫外燈、三氧殺菌機(jī)、空氣凈化器系統(tǒng)各20-30分鐘

4.實(shí)驗(yàn)后滅菌：用75％酒精（3‰新潔爾滅）擦拭超凈臺、邊臺、倒置顯微鏡的載物臺。

第39頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月實(shí)驗(yàn)人員的無菌準(zhǔn)備：

1.肥皂洗手。

2.穿好隔離衣、帶好隔離帽、口罩、放好拖鞋

3.用75％酒精棉球擦凈雙手。第40頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月無菌操作的注意事項(xiàng)：

1.凡是帶入超凈工作臺內(nèi)的酒精、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面

2.靠近酒精燈火焰操作。

3.器皿使用前必須過火滅菌

4.繼續(xù)使用的器皿（如瓶蓋、滴管）要放在高處，使用時仍要過火。

5.各種操作要靠近酒精燈，動作要輕、準(zhǔn)確，不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。

6.吸取兩種以上的使用液時要注意更換吸管，防止交叉污染。第41頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)前準(zhǔn)備器材物品放到操作場所（培養(yǎng)室、超凈臺）內(nèi)消毒。第42頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月操作間消毒每天0.2%新潔爾滅拖地；每天紫外線照射３０－５０分鐘超凈臺在每次試驗(yàn)前用７５％酒精擦拭，然后紫外線消毒３０分鐘第43頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月洗手和著裝火焰消毒操作：動作準(zhǔn)確敏捷避免手碰到器皿布局合理瓶口順風(fēng)不同移液管取液不能講話、咳嗽第44頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月專門人配液，滅菌，標(biāo)簽一切用品固定存放；“避免污染”第45頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)、細(xì)胞培養(yǎng)用液第46頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月水：平衡鹽溶液（BBS）：消化液：培養(yǎng)基抗生素液：染色液：第47頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）水第48頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）平衡鹽溶液維持滲透壓、調(diào)節(jié)PH值細(xì)胞生存能量、無機(jī)離子第49頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月成分：無機(jī)鹽＋葡萄糖用途：洗滌配制其他溶液的基礎(chǔ)溶液可加指示劑BBS作用：提供細(xì)胞生長的基本元素；維持滲透壓、緩沖和調(diào)節(jié)酸堿度；第50頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月平衡鹽溶液：無Ca2+、Mg2+的緩沖液PBS：NaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO4.H2O1.56gKH2PO40.20g加水至1000ml第51頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）消化液作用：貼附型細(xì)胞原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)過程中細(xì)胞和組織的分散；胰蛋白酶液：使細(xì)胞間蛋白質(zhì)水解，細(xì)胞分散EDTA（二乙烯四乙酸二鈉）：吸取Ca2＋，Mg2＋，使細(xì)胞分離膠原酶原代培養(yǎng)分散組織細(xì)胞聯(lián)用第52頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月胰蛋白酶消化液來源：豬或者牛的胰臟，白色粉末作用：水解細(xì)胞之間的蛋白質(zhì)濃度：0.25%0.125%特點(diǎn)：不同細(xì)胞的要求不同終止：血清可以中止胰蛋白酶的繼續(xù)作用第53頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月EDTA－２Na又稱Versen溶液化學(xué)鰲合劑對細(xì)胞具有一定的解離作用毒性小，價格低0.02%第54頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月膠原酶溶液來源：細(xì)菌作用：對膠原組織和細(xì)胞間質(zhì)有較強(qiáng)的消化作用。第55頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞培養(yǎng)用容器及培養(yǎng)基Culturevesselsandmediumforanimalcellculture二、培養(yǎng)基（液）第56頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)基（液）是維持體外細(xì)胞生存和生長的溶液天然培養(yǎng)基：合成培養(yǎng)基：氨基酸、維生素、糖類無機(jī)離子、其它成分

完全培養(yǎng)基：合成培養(yǎng)基+血清無血清培養(yǎng)基：

第57頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基有生物性液體（血清），組織浸液（胚胎浸液），凝固劑（血漿）優(yōu)點(diǎn)：營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好缺點(diǎn)：來源受限。成分復(fù)雜，影響對某些實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析。易發(fā)生支原體污染第58頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月

血清(serum)：

一般常用為小牛血清(包括胎牛血清)，人血清和其它動物血清。滅活：56度，30min消除補(bǔ)體活性。成分：總蛋白3.5-4.5g/100ml球蛋白不高于2g/100ml外觀：透明淡黃色，無溶血，無沉淀。1、血清第59頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月第60頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月常用血清有胎牛血潔,新生牛血清,小牛血清,兔血清,馬血清等,其中以胎牛血清質(zhì)量最好.

優(yōu)質(zhì)血清的標(biāo)準(zhǔn):透明,淡黃色,無沉淀物,無細(xì)菌,支原體,病毒污染.第61頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月①多種PR（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）②多種金屬離子③激素；④促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。⑤各種生長因子⑥轉(zhuǎn)移蛋白⑦不明成分第62頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月血清的使用與儲存使用前的處理56℃滅活30min→

去除補(bǔ)體成分儲存條件滅活后分裝成小包裝（10mL、20mL、50mL），－20℃儲存；使用前4℃融化，可用1個月。使用濃度一般為5％～20％，最常用的是10％。第63頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月影響血清的各種因素年齡：較老動物的血清對細(xì)胞生長有抑制作用血型：AB型血清比A型和O型血清對細(xì)胞生長有利

血色素膽紅質(zhì)脂肪酸血清在培養(yǎng)液中的濃度并非越高越好第64頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月細(xì)胞培養(yǎng)中使用血清的缺點(diǎn)

使用血清有可能改變某種細(xì)胞在體內(nèi)的正常狀態(tài)。如：血清可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞的生長，同時會抑制表皮角質(zhì)細(xì)胞的生長。

血清中含有一些物質(zhì)對細(xì)胞會產(chǎn)生毒性作用。

如：多胺氧化酶每批血清之間都有差別，其成分不能保持一致。取材過程中有可能帶入支原體、病毒，對培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生影響。第65頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月關(guān)于血清的幾個問題

血清必須貯存于–20～-70℃，若存放于4℃，請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶，可將40～45ml分裝于無菌50ml離心管中，由于血清結(jié)凍時體積會增加約10%，必須預(yù)留此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。

一般廠商提供之血清為無菌，不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾，勿直接過濾血清。第66頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月

瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天，至室溫下全溶后再分裝，一般以50ml無菌離心管可分裝40～45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。第67頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月血漿：1907年Harrison首次使用優(yōu)點(diǎn)：支持培養(yǎng)組織塊，供給細(xì)胞生長物質(zhì)。缺點(diǎn)：易于液化。2、血漿第68頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月閱讀：P48

4、水解乳蛋白

5、膠原回答：膠原在細(xì)胞培養(yǎng)中的用途？膠原的制備方法？膠原的使用方法？第69頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基：根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。

主要成分：氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。

優(yōu)點(diǎn)：

標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對固定。成本低

缺點(diǎn)：

缺少某些成分，不能完全滿足體外細(xì)胞生長需要。

第70頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月常用合成培養(yǎng)基

MEM:12種氨基酸+谷氨酰胺+8種維生素廣泛適用已建成細(xì)胞系的培養(yǎng)minimumessentialmedium第71頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月DMEM:MEM改良成份加倍葡萄糖(高糖1000mg/L或者低糖400mg/L)低糖:生長速度快,附著性稍差的腫瘤細(xì)胞;高糖:附著性差的細(xì)胞第72頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月RPMI-1640:成份簡單,正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞,廣泛適用第73頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月干粉培養(yǎng)基商品培養(yǎng)液第74頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月完全培養(yǎng)基也叫血清培養(yǎng)基;分成細(xì)胞生長和細(xì)胞維持培養(yǎng)基細(xì)胞生長培養(yǎng)基:血清含量高,10-20%維持培養(yǎng)基:血清含量低,2-5%第75頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月完全培養(yǎng)基配制舉例:基礎(chǔ)培養(yǎng)基80％一95％血清5％一20％碳酸氫鈉2.0g/L青霉素50~100IU/ml培養(yǎng)液鏈霉素50~100ug/ml培養(yǎng)液第76頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月配制:RPMI-1640培養(yǎng)粉1袋碳酸氫鈉2.0g青、鏈霉素各100IU/ml加三蒸水至1000ml,過濾除菌,調(diào)節(jié)pH值至7.2,加血清（終濃度10％）.第77頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）無血清培養(yǎng)基第78頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月

血清中不僅存在促細(xì)胞生長因子，同對也存在細(xì)胞生長抑制因子或毒性因子，故在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞所反映的生物學(xué)特性是細(xì)胞和復(fù)雜血清因子的綜合反應(yīng)。在生長因子、蛋白質(zhì)工程、基因表達(dá)調(diào)控等研究領(lǐng)域，迫切需要用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞．

第79頁，課件共90頁，創(chuàng)作于2023年2月

1975年，Sato首次成功地用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)了垂體細(xì)胞株，近20多年來已報道了幾十種細(xì)胞系在無血清培養(yǎng)基中成功地生長和增殖。無血清細(xì)胞培養(yǎng)基的使用保證