BS細(xì)胞庫建立記錄

資料整理資料整理2BS細(xì)胞庫建立記錄編號(hào)：F-SOP-ZL054-01第1頁共2頁版本號(hào)：01修訂號(hào)：01機(jī)密等級(jí)：秘密1.復(fù)蘇（18→19代）1.1生產(chǎn)前檢查生產(chǎn)前檢查項(xiàng)目生產(chǎn)前檢查內(nèi)容檢查情況生產(chǎn)環(huán)境檢查操作間名稱：細(xì)胞制備間（一）環(huán)境溫度15～26℃相對(duì)濕度30～70%清場(chǎng)是否在有效期內(nèi)。是口否口是口否口是口否口設(shè)施、設(shè)備檢查培養(yǎng)箱、超凈臺(tái)、倒置顯微鏡、電熱恒溫水浴箱是否處于清潔、完好狀態(tài)是否在驗(yàn)證有效期內(nèi)是口否口是口否口文件記錄檢查是否為現(xiàn)用版本是否準(zhǔn)備相應(yīng)記錄是口否口是口否口消毒劑檢查口１‰新潔爾滅：批號(hào)、效期有效期至：年月日口5‰新潔爾滅：批號(hào)、效期有效期至：年月日口１﹪來蘇兒：批號(hào)、效期有效期至：年月日口5﹪來蘇兒：批號(hào)、效期有效期至：年月日操作人：日期：___________復(fù)核人：日期:_____________1.2操作前準(zhǔn)備工藝步驟操作標(biāo)準(zhǔn)及工藝要求過程記錄物料確認(rèn)按照工藝要求準(zhǔn)備物品：100ml方瓶、橡膠塞、1ml吸管、毛細(xì)管、10ml吸管、無毛抹布、C級(jí)區(qū)潔凈服及口罩、不銹鋼盆、吸球。物品準(zhǔn)備完好且在滅菌有效期內(nèi)是口否口滅菌批號(hào)：有效期至：年月日滅菌批號(hào)：有效期至：年月日物料名稱來源規(guī)格(ml/瓶)批號(hào)領(lǐng)入數(shù)量（瓶）有效期E-MEM培養(yǎng)基本室配液組7.5％碳酸氫鈉本室配液組3.0％谷氨酰胺本室配液組新生牛血清細(xì)胞種子確認(rèn)細(xì)胞名稱代次批號(hào)復(fù)蘇支數(shù)人胚肺二倍體細(xì)胞（2BS株）備注操作人：日期：______復(fù)核人：日期：_________1.3生產(chǎn)操作工作時(shí)間：年月日時(shí)分至?xí)r分工藝步驟操作標(biāo)準(zhǔn)及工藝要求過程記錄液體配制復(fù)蘇液配制：配方：81.2﹪E-MEM+16.2﹪（ml/ml）新生牛血清+0.9﹪（ml/ml）（3.0﹪谷氨酰胺）+1.6﹪（ml/ml）（7.5﹪碳酸氫鈉）。以配制492.5ml復(fù)蘇液為例。1.計(jì)算：E-MEM=492.5×81.2﹪=400.0ml新生牛血清=492.5×16.2﹪（ml/ml）=80.0ml3.0﹪谷氨酰胺=492.5×0.9﹪（ml/ml）=4.5ml7.5﹪碳酸氫鈉=492.5×1.6﹪（ml/ml）=8.0ml2.操作步驟：取裝量為mlE-MEM培養(yǎng)基瓶;每瓶均按上述同樣的方法配制瓶。3.消耗E-MEM=ml，新生牛血清=ml3.0﹪谷氨酰胺=ml，7.5﹪碳酸氫鈉=ml生長液配制：配方：87.4﹪（ml/ml）E-MEM+10﹪（ml/ml）新生牛血清+0.9﹪（ml/ml）（3.0﹪谷氨酰胺）+1.7﹪（ml/ml）（8.0﹪碳酸氫鈉）以配制458.0ml生長液為例。1.計(jì)算：E-MEM=458.0×87.4﹪=400.0ml新生牛血清=458.0×10﹪（ml/ml）=46.0ml3.0﹪谷氨酰胺=458.0×0.9﹪（ml/ml）=4.1ml7.5﹪碳酸氫鈉=458.0×1.7﹪（ml/ml）=8.0ml2.操作步驟：取裝量為mlE-MEM培養(yǎng)基瓶;每瓶均按上述同樣的方法配制。速融1.按照《電熱恒溫水浴箱使用清潔維護(hù)保養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》運(yùn)行電熱恒溫水浴箱，設(shè)置溫度為37℃；2.當(dāng)水溫達(dá)到37℃時(shí)，帶上手套，按標(biāo)簽所示取出裝有人胚肺二倍體細(xì)胞的凍存管，檢查外觀無破損；3.核對(duì)細(xì)胞種子批號(hào)、代次無誤后立即放入電熱恒溫水浴箱內(nèi)，速融在1分鐘內(nèi)完成。是口否口是口否口是口否口分種1.細(xì)胞速融后，立即送入細(xì)胞操作間，在A級(jí)工作臺(tái)下用1‰新潔爾滅或1﹪來蘇兒將凍存管表面徹底消毒；2.打開凍存管，用1ml吸管吸取0.5ml復(fù)蘇液加入凍存管中；3.用5ml毛細(xì)管將凍存管中液體吸出，加入到一個(gè)100ml方瓶中（已預(yù)先加入適量復(fù)蘇液），4.按上述方法，將全部細(xì)胞種子加入100ml瓶中；用毛細(xì)管充分吹打混勻，再用10ml吸管按1:2分種率分種于100ml方瓶中，每100ml瓶補(bǔ)加復(fù)蘇液至13～16ml，蓋橡膠塞，細(xì)胞面朝下放置。是□否□是□否□是□否□共分種個(gè)100ml瓶。每瓶補(bǔ)加液體至ml,共消耗復(fù)蘇液ml。培養(yǎng)1.培養(yǎng)方式：靜止培養(yǎng)2.培養(yǎng)時(shí)間:6～10小時(shí)3.培養(yǎng)溫度：37±0.5℃。是□否□是□否□是□否□換液1.細(xì)胞觀察待細(xì)胞已均勻貼壁即可準(zhǔn)備換液。2.換液在操作間A級(jí)工作臺(tái)，倒棄舊液，分別加入13～16ml生長液。是□否□是□否□培養(yǎng)1.培養(yǎng)方式：靜止培養(yǎng)2.培養(yǎng)溫度：37±0.5℃。是□否□是□否□物料平衡物料名稱領(lǐng)用數(shù)量（瓶）使用數(shù)量（瓶）剩余數(shù)量（瓶）去向物料平衡E-MEM3.0％谷氨酰胺新生牛血清8.0％碳酸氫鈉細(xì)胞使用情況細(xì)胞名稱使用數(shù)量（支）剩余數(shù)（支）規(guī)格（ml/瓶）人胚肺二倍體細(xì)胞（2B株）偏差生產(chǎn)操作過程中是否出現(xiàn)偏差□是□否偏差編號(hào)：備注操作人：日期：年月日復(fù)核人：日期：年月日1.4清場(chǎng)操作：清場(chǎng)要求清場(chǎng)過程確認(rèn)結(jié)果在生產(chǎn)完成后清場(chǎng)操作前需在房間門上懸掛“待處理”標(biāo)志牌，關(guān)閉層流罩，日光燈。懸掛“待處理”標(biāo)志牌，關(guān)閉層流罩，日光燈。合格口不合格口按《生產(chǎn)區(qū)清場(chǎng)、清潔、消毒管理標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》SOP-WS007-00對(duì)操作區(qū)域進(jìn)行清潔、消毒。將不銹鋼盆、桶、250ml瓶、500ml瓶、橡膠塞、吸管、送到洗刷間清洗。合格口不合格口按要求懸掛狀態(tài)標(biāo)識(shí)。正確懸掛狀態(tài)標(biāo)識(shí)牌標(biāo)識(shí)。合格口不合格口廢棄物裝袋放固定位置送出。廢棄物裝袋放固定位置送出。合格口不合格口集液槽用5‰（ml/ml）新潔爾滅或5﹪（ml/ml）來蘇兒溶液清洗消毒及液封。集液槽已用5‰（ml/ml）新潔爾滅或5﹪（ml/ml）來蘇兒溶液清洗消毒及液封。合格口不合格口操作人：日期：年月日復(fù)核人：日期：年月日1.5細(xì)胞觀察觀察日期細(xì)胞生長情況操作者復(fù)核者年月日口貼壁良好口未貼壁口典型成纖維狀口未伸展的球狀口光亮透明口渾濁口致密單層口薄單層口未成單層口可見較多分裂相口可見較少分裂相口無污染口有污染口細(xì)胞死亡口細(xì)胞脫落年月日口貼壁良好口未貼壁口典型成纖維狀口未伸展的球狀口光亮透明口渾濁口致密單層口薄單層口未成單層口可見較多分裂相口可見較少分裂相口無污染口有污染口細(xì)胞死亡口細(xì)胞脫落年月日口貼壁良好口未貼壁口典型成纖維狀口未伸展的球狀口光亮透明口渾濁口致密單層口薄單層口未成單層口可見較多分裂相口可見較少分裂相口無污染口有污染口細(xì)胞死亡口細(xì)胞脫落2.細(xì)胞傳代（19代-21代）2.1生產(chǎn)前檢查生產(chǎn)前檢查項(xiàng)目生產(chǎn)前檢查內(nèi)容檢查情況設(shè)施、設(shè)備檢查培養(yǎng)箱、潔凈臺(tái)、倒置顯微鏡是否處于清潔、完好狀態(tài)是否在驗(yàn)證有效期內(nèi)是口否口是口否口文件記錄檢查是否為現(xiàn)用版本是否準(zhǔn)備相應(yīng)記錄是口否口是口否口消毒劑檢查口１‰新潔爾滅：批號(hào)、效期有效期至：年月日口5‰新潔爾滅：批號(hào)、效期有效期至：年月日口１﹪來蘇兒：批號(hào)、效期有效期至：年月日口5﹪來蘇兒：批號(hào)、效期有效期至：年月日備注操作人：日期：復(fù)核人：日期：______________2.2操作前準(zhǔn)備步驟操作標(biāo)準(zhǔn)及工藝要求過程記錄物料確認(rèn)按照工藝規(guī)程要求準(zhǔn)備物品：100ml方瓶、橡膠塞、10ml吸管、無毛抹布、C級(jí)區(qū)潔凈服及口罩、不銹鋼盆、不銹鋼桶、吸球。物品準(zhǔn)備完好且在滅菌有效期內(nèi)是口否口滅菌批號(hào)：有效期至：年月日滅菌批號(hào)：有效期至：年月日物料名稱來源規(guī)格（ml/瓶）批號(hào)有效期致E-MEM培養(yǎng)基本室配液組7.5％碳酸氫鈉本室配液組3.0％谷氨酰胺本室配液組0.25％胰蛋白酶本室配液組新生牛血清細(xì)胞確認(rèn)細(xì)胞名稱代次瓶型數(shù)量（瓶）日齡人胚肺二倍體細(xì)胞（2BS株）備注操作人：日期：____________復(fù)核人：__________日期：___________2.3生產(chǎn)操作工作時(shí)間：年月日時(shí)分至?xí)r分工藝步驟操作標(biāo)準(zhǔn)及工藝要求過程記錄液體配制生長液配制配方：87.4﹪（ml/ml）E-MEM+10﹪（ml/ml）新生牛血清+0.9﹪（ml/ml）（3.0﹪谷氨酰胺）+1.7﹪（ml/ml）（7.5﹪碳酸氫鈉）以配制458.0ml生長液為例。1.計(jì)算：E-MEM=458.0×87.4﹪=400.0ml新生牛血清=458.0×10﹪（ml/ml）=46.0ml3.0﹪谷氨酰胺=458.0×0.9﹪（ml/ml）=4.1ml7.5﹪碳酸氫鈉=458.0×1.7﹪（ml/ml）=8.0ml2.操作步驟：取裝量為mlE-MEM培養(yǎng)基瓶,每瓶均按上述同樣的方法配制。消化液配制:以400ml體積裝量的濃度為0.25﹪胰蛋白酶為基質(zhì)液，加入2.0﹪（ml/ml）（8.0﹪碳酸氫鈉）。1．計(jì)算8.0﹪碳酸氫鈉=400ml×2.0﹪=8.0ml2．操作步驟：取裝量為400ml的0.25％胰蛋白酶瓶，每瓶均按上述同樣的方法配制。細(xì)胞消化棄掉舊液，每方瓶中加入胰蛋白酶消化液4～6ml，靜置片刻。待細(xì)胞面呈松散狀時(shí)，棄掉胰蛋白酶消化液。是口否口分種1．每個(gè)100ml方瓶內(nèi)加8ml生長液，用10ml吸管反復(fù)吹打細(xì)胞面，使所有細(xì)胞從瓶壁上脫下懸入生長液中，再吹打細(xì)胞使之分散成單個(gè)狀態(tài)。2．以1:4分種率分種方瓶內(nèi)，每個(gè)方瓶補(bǔ)加生長液至13～16ml，輕輕搖勻后蓋橡膠塞。是口否口共分種個(gè)方瓶，每瓶補(bǔ)加生長液至ml，共消耗生長液ml。培養(yǎng)培養(yǎng)方式：靜止培養(yǎng)培養(yǎng)溫度：37±0.5℃。是口否口是□否□細(xì)胞使用情況細(xì)胞名稱使用數(shù)量（瓶）剩余數(shù)量（瓶）去向瓶型人胚肺二倍體細(xì)胞（2BS株）偏差生產(chǎn)過程中是否出現(xiàn)偏差□是□否偏差編號(hào)：操作人：日期:________復(fù)核人：______________日期：______________2.4清場(chǎng)操作：清場(chǎng)要求清場(chǎng)過程確認(rèn)結(jié)果在生產(chǎn)完成后清場(chǎng)操作前需在房間門上懸掛“待處理”標(biāo)志牌，關(guān)閉層流罩，日光燈。懸掛“待處理”標(biāo)志牌，關(guān)閉層流罩，日光燈。合格口不合格口按《生產(chǎn)區(qū)清場(chǎng)、清潔、消毒管理標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》SOP03-3-0-008對(duì)操作區(qū)域進(jìn)行清潔、消毒。將不銹鋼盆、桶、100ml方瓶、250ml瓶、500ml瓶、橡膠塞、吸管、送到洗刷間清洗。合格口不合格口按要求懸掛狀態(tài)標(biāo)識(shí)。正確懸掛狀態(tài)標(biāo)識(shí)牌標(biāo)識(shí)。合格口不合格口廢棄物裝袋放固定位置送出。廢棄物裝袋放固定位置送出。合格口不合格口集液槽用5‰（ml/ml）新潔爾滅或5﹪（ml/ml）來蘇兒溶液清洗消毒及液封。集液槽已用5‰（ml/ml）新潔爾滅或5﹪（ml/ml）來蘇兒溶液清洗消毒及液封。合格口不合格口操作人：日期：年月日復(fù)核人：日期：年月日2.5細(xì)胞觀察觀察日期細(xì)胞生長情況操作者復(fù)核者年月日口貼壁良好口未貼壁口典型成纖維狀口未伸展的球狀口光亮透明口渾濁口致密單層口薄單層口未成單層口可見較多分裂相口可見較少分裂相口無污染口有污染口細(xì)胞死亡口細(xì)胞脫落年月日口貼壁良好口未貼壁口典型成纖維狀口未伸展的球狀口光亮透明口渾濁口致密單層口薄單層口未成單層口可見較多分裂相口可見較少分裂相口無污染口有污染口細(xì)胞死亡口細(xì)胞脫落年月日口貼壁良好口未貼壁口典型成纖維狀口未伸展的球狀口光亮透明口渾濁口致密單層口薄單層口未成單層口可見較多分裂相口可見較少分裂相口無污染口有污染口細(xì)胞死亡口細(xì)胞脫落3.細(xì)胞傳代（21代→23代）3.1生產(chǎn)前檢查生產(chǎn)前檢查項(xiàng)目生產(chǎn)前檢查內(nèi)容檢查情況設(shè)施、設(shè)備檢查設(shè)施名稱：恒溫室(一)、層流罩、倒置顯微鏡設(shè)備是否處于清潔、完好狀態(tài)是否在驗(yàn)證有效期內(nèi)是口否口是口否口文件記錄檢查是否為現(xiàn)用版本是否準(zhǔn)備相應(yīng)記錄是口否口是口否口消毒劑檢查口１‰新潔爾滅：批號(hào)、效期有效期至：年月日口5‰新潔爾滅：批號(hào)、效期有效期至：年月日口１﹪來蘇兒：批號(hào)、效期有效期至：年月日口5﹪來蘇兒：批號(hào)、效期有效期至：年月日備注操作人：日期：__________復(fù)核人：日期:______________3.2操作前準(zhǔn)備工藝步驟操作標(biāo)準(zhǔn)及工藝要求過程記錄物料確認(rèn)按照工藝規(guī)程要求準(zhǔn)備物品：100ml方瓶、橡膠塞、10ml吸管、無毛抹布、C級(jí)區(qū)潔凈服及口罩、不銹鋼盆、不銹鋼桶、吸球。物品準(zhǔn)備完好且在滅菌有效期內(nèi)是口否口滅菌批號(hào)：有效期至：年月日滅菌批號(hào)：有效期至：年月日物料名稱來源規(guī)格（ml/瓶）批號(hào)領(lǐng)入數(shù)量（瓶）有效期至E-MEM培養(yǎng)基本室配液組8.0％碳酸氫鈉本室配液組3.0％谷氨酰胺本室配液組0.25％胰蛋白酶本室配液組新生牛血清細(xì)胞確認(rèn)細(xì)胞名稱代次瓶型數(shù)量（瓶）日齡人胚肺二倍體細(xì)胞（2BS株）備注操作人：日期：__________復(fù)核人：日期:______________3.3生產(chǎn)操作工作時(shí)間：年月日時(shí)分至?xí)r分工藝步驟操作標(biāo)準(zhǔn)及工藝要求過程記錄液體配制生長液配制:配方：87.4﹪（ml/ml）E-MEM+10﹪（ml/ml）新生牛血清+0.9﹪（ml/ml）（3.0﹪谷氨酰胺）+1.7﹪（ml/ml）（8.0﹪碳酸氫鈉）以配制458.0ml生長液為例。1.計(jì)算：E-MEM=458.0×87.4﹪=400.0ml新生牛血清=458.0×10﹪（ml/ml）=46.0ml3.0﹪谷氨酰胺=458.0×0.9﹪（ml/ml）=4.1ml8.0﹪碳酸氫鈉=458.0×1.7﹪（ml/ml）=8.0ml2.操作步驟：取裝量為400mlE-MEM培養(yǎng)基瓶,每瓶均按上述同樣的方法配制。3.消耗E-MEM=ml，新生牛血清=ml3.0﹪谷氨酰胺=ml，7.5﹪碳酸氫鈉=ml消化液配制:以400ml體積裝量的濃度為0.25﹪的胰蛋白酶消化液為基質(zhì)液，加入2.0﹪（ml/ml）（8.0﹪碳酸氫鈉）。1．計(jì)算8.0﹪碳酸氫鈉=400ml×2.0﹪=8.0ml2．操作步驟：取裝量為400ml的0.25％胰蛋白酶瓶，每瓶均按上述同樣的方法配制。3．消耗0.25﹪胰蛋白酶=ml，8.0﹪碳酸氫鈉=ml細(xì)胞消化與分種棄掉舊液，每方瓶中加入胰蛋白酶消化液4～6ml，靜置片刻。待細(xì)胞面呈松散狀時(shí)，棄掉胰蛋白酶消化液。是口否口1．每個(gè)100ml方瓶內(nèi)加8ml生長液，用10ml吸管反復(fù)吹打細(xì)胞面，使所有細(xì)胞從瓶壁上脫下懸入生長液中，再吹打細(xì)胞使之分散成單個(gè)狀態(tài)。2．以1:4分種率分種方瓶內(nèi)，每個(gè)方瓶補(bǔ)加生長液至13～16ml，輕輕搖勻后蓋橡膠塞。是口否口共分種個(gè)方瓶，每瓶補(bǔ)加生長液至ml，共消耗生長液ml。培養(yǎng)1.培養(yǎng)方式：靜止培養(yǎng)2.培養(yǎng)溫度：37±0.5℃是口否口是□否□物料平衡物料名稱領(lǐng)入數(shù)量(瓶)使用數(shù)量(瓶)剩余數(shù)量(瓶)去向物料平衡E-MEM培養(yǎng)基3.0％谷氨酰胺8.0％碳酸氫鈉0.25％胰蛋白酶細(xì)胞使用情況細(xì)胞名稱使用數(shù)量（瓶）剩余數(shù)量（瓶）去向瓶型人胚肺二倍體細(xì)胞（2BS株）偏差生產(chǎn)過程中是否出現(xiàn)偏差□是偏差編號(hào)：□否備注操作人：日期：__________復(fù)核人：日期:______________3.4清場(chǎng)操作：清場(chǎng)要求清場(chǎng)過程確認(rèn)結(jié)果按《生產(chǎn)區(qū)清場(chǎng)、清潔、消毒管理標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》SOP03-3-0-008對(duì)操作區(qū)域進(jìn)行清潔、消毒。將不銹鋼盆、100ml方瓶、250ml瓶、500ml瓶、橡膠塞、吸管、送到洗刷間清洗。合格口不合格口按要求懸掛狀態(tài)標(biāo)識(shí)。正確懸掛狀態(tài)標(biāo)識(shí)牌標(biāo)識(shí)。合格口不合格口廢棄物裝袋放固定位置送出。廢棄物裝袋放固定位置送出。合格口不合格口集液槽用5‰新潔爾滅或5﹪來蘇兒溶液清洗消毒及液封。集液槽已用5‰（ml/ml）新潔爾滅或5﹪（ml/ml）來蘇兒溶液清洗消毒及液封。合格口不合格口操作人：日期：__________復(fù)核人：日期:______________3.5細(xì)胞觀察觀察日期細(xì)胞生長情況操作者復(fù)核者年月日口貼壁良好口未貼壁口典型成纖維狀口未伸展的球狀口光亮透明口渾濁口致密單層口薄單層口未成單層口可見較多分裂相口可見較少分裂相口無污染口有污染口細(xì)胞死亡口細(xì)胞脫落年月日口貼壁良好口未貼壁口典型成纖維狀口未伸展的球狀口光亮透明口渾濁口致密單層口薄單層口未成單層口可見較多分裂相口可見較少分裂相口無污染口有污染口細(xì)胞死亡口細(xì)胞脫落年月日口貼壁良好口未貼壁口典型成纖維狀口未伸展的球狀口光亮透明口渾濁口致密單層口薄單層口未成單層口可見較多分裂相口可見較少分裂相口無污染口有污染口細(xì)胞死亡口細(xì)胞脫落4.細(xì)胞傳代（23代→24代）4.1生產(chǎn)前檢查生產(chǎn)前檢查項(xiàng)目生產(chǎn)前檢查內(nèi)容檢查情況生產(chǎn)環(huán)境檢查操作間名稱：細(xì)胞制備間（一）操作間編號(hào)：29—WXBZBJY—C/A—08環(huán)境溫度15～26℃相對(duì)濕度30～70%相對(duì)壓差≥5Pa清場(chǎng)是否在有效期內(nèi)。是口否口是口否口是口否口是口否口設(shè)施、設(shè)備檢查設(shè)施名稱：恒溫室、層流罩、倒置顯微鏡是否處于清潔、完好狀態(tài)是否在驗(yàn)證有效期內(nèi)是口否口是口否口文件記錄檢查是否為現(xiàn)用版本是否準(zhǔn)備相應(yīng)記錄是口否口是口否口消毒劑檢查口１‰新潔爾滅：批號(hào)、效期有效期至：年月日口5‰新潔爾滅：批號(hào)、效期有效期至：年月日口１﹪來蘇兒：批號(hào)、效期有效期至：年月日口5﹪來蘇兒：批號(hào)、效期有效期至：年月日備注操作人：日期：__________復(fù)核人：日期:______________4.2操作前準(zhǔn)備工藝步驟操作標(biāo)準(zhǔn)及工藝要求過程記錄物料確認(rèn)按照工藝規(guī)程要求準(zhǔn)備物品：100ml方瓶、橡膠塞、10ml吸管、無毛抹布、C級(jí)區(qū)潔凈服及口罩、不銹鋼盆、不銹鋼桶、吸球。物品準(zhǔn)備完好且在滅菌有效期內(nèi)是口否口滅菌批號(hào)：有效期至：年月日滅菌批號(hào)：有效期至：年月日物料名稱來源規(guī)格(ml/瓶)批號(hào)領(lǐng)入數(shù)量有效期至E-MEM培養(yǎng)基本室配液組8.0％碳酸氫鈉本室配液組3.0％谷氨酰胺本室配液組0.25％胰蛋白酶本室配液組新生牛血清外購細(xì)胞確認(rèn)細(xì)胞名稱代次瓶型數(shù)量（瓶）日齡人胚肺二倍體細(xì)胞（2BS株）備注操作人：日期：__________復(fù)核人：日期:______________4.3生產(chǎn)操作工作時(shí)間：年月日時(shí)分至?xí)r分工藝步驟操作標(biāo)準(zhǔn)及工藝要求過程記錄液體配制生長液配制配方:87.4﹪（ml/ml）E-MEM+10﹪（ml/ml）新生牛血清+0.9﹪（ml/ml）（3.0﹪谷氨酰胺）+1.7﹪（ml/ml）（8.0﹪碳酸氫鈉）以配制458.0ml生長液為例。1.計(jì)算：E-MEM=458.0×87.4﹪=400.0ml新生牛血清=458.0×10﹪（ml/ml）=46.0ml3.0﹪谷氨酰胺=458.0×0.9﹪（ml/ml）=4.1ml8.0﹪碳酸氫鈉=458.0×1.7﹪（ml/ml）=8.0ml2.操作步驟：取裝量為400mlE-MEM培養(yǎng)基瓶,每瓶均按上述同樣的方法共配制_________瓶。3.消耗E-MEM=ml，新生牛血清=ml3.0﹪谷氨酰胺=ml，8.0﹪碳酸氫鈉=ml消化液配制:以400ml體積裝量的濃度為0.25﹪的胰蛋白酶為基質(zhì)液，加入2.0﹪（ml/ml）（8.0﹪碳酸氫鈉）。1．計(jì)算8.0﹪碳酸氫鈉=400ml×2.0﹪=8.0ml2．操作步驟：取裝量為400ml的0.25％胰蛋白酶瓶，每瓶均按上述同樣的方法配制。3．消耗0.25﹪胰蛋白酶=ml，8.0﹪碳酸氫鈉=ml細(xì)胞消化棄掉舊液，每方瓶中加入胰蛋白酶消化液4～6ml，靜置片刻。待細(xì)胞面呈松散狀時(shí)，棄掉胰蛋白酶消化液。是口否口分種1．每個(gè)100ml方瓶內(nèi)加8ml生長液，用10ml吸管反復(fù)吹打細(xì)胞面，使所有細(xì)胞從瓶壁上脫下懸入生長液中，再吹打細(xì)胞使之分散成單個(gè)狀態(tài)。2．以1:2分種率分種方瓶內(nèi)，每個(gè)方瓶補(bǔ)加生長液至13～16ml，輕輕搖勻后蓋橡膠塞。是口否口共分種個(gè)方瓶，每瓶補(bǔ)加生長液至ml，共消耗生長液ml。培養(yǎng)培養(yǎng)方式：靜止培養(yǎng)培養(yǎng)溫度：37±0.5℃。是口否口是□否□物料平衡物料名稱領(lǐng)入數(shù)量（瓶）使用數(shù)量（瓶）剩余數(shù)量（瓶）去向物料平衡E-MEM培養(yǎng)基3.0％谷氨酰胺8.0％碳酸氫鈉0.25％胰蛋白酶新生牛血清細(xì)胞使用情況細(xì)胞名稱使用數(shù)（瓶）剩余數(shù)（瓶）去向瓶型人胚肺二倍體細(xì)胞（2BS株）偏差生產(chǎn)過程中是否出現(xiàn)偏差□是□否偏差編號(hào)：備注操作人：日期：__________復(fù)核人：日期:______________4.4清場(chǎng)操作：清場(chǎng)要求清場(chǎng)過程確認(rèn)結(jié)果在生產(chǎn)完成后清場(chǎng)操作前需在房間門上懸掛“待處理”標(biāo)志牌，關(guān)閉層流罩，日光燈。懸掛“待處理”標(biāo)志牌，關(guān)閉層流罩，日光燈。合格口不合格口按《生產(chǎn)區(qū)清場(chǎng)、清潔、消毒管理標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》SOP03-3-0-008對(duì)操作區(qū)域進(jìn)行清潔、消毒。將不銹鋼盆、桶、100ml方瓶、250ml瓶、500ml瓶、橡膠塞、吸管、送到洗刷間清洗。合格口不合格口廢棄物裝袋放固定位置送出。廢棄物裝袋放固定位置送出。合格口不合格口集液槽用5‰新潔爾滅或5﹪來蘇兒溶液清洗消毒及液封。集液槽已用5‰（ml/ml）新潔爾滅或5﹪（ml/ml）來蘇兒溶液清洗消毒及液封。合格口不合格口操作人：日期：__________復(fù)核人：日期:______________4.5細(xì)胞觀察觀察日期細(xì)胞生長情況操作者復(fù)核者年月日口貼壁良好口未貼壁口典型成纖維狀口未伸展的球狀口光亮透明口渾濁口致密單層口薄單層口未成單層口可見較多分裂相口可見較少分裂相口無污染口有污染口細(xì)胞死亡口細(xì)胞脫落年月日口貼壁良好口未貼壁口典型成纖維狀口未伸展的球狀口光亮透明口渾濁口致密單層口薄單層口未成單層口可見較多分裂相口可見較少分裂相口無污染口有污染口細(xì)胞死亡口細(xì)胞脫落年月日口貼壁良好口未貼壁口典型成纖維狀口未伸展的球狀口光亮透明口渾濁口致密單層口薄單層口未成單層口可見較多分裂相口可見較少分裂相口無污染口有污染口細(xì)胞死亡口細(xì)胞脫落5換液5.1生產(chǎn)前檢查生產(chǎn)前檢查項(xiàng)目生產(chǎn)前檢查內(nèi)容檢查情況生產(chǎn)環(huán)境檢查操作間名稱：細(xì)胞制備間環(huán)境溫度15～26℃相對(duì)濕度30～70%清場(chǎng)是否在有效期內(nèi)。是口否口是口否口是口否口設(shè)施、設(shè)備檢查設(shè)備名稱：恒溫室(一)、潔凈臺(tái)、倒置顯微鏡設(shè)備是否處于清潔、完好狀是否在驗(yàn)證有效期內(nèi)是口否口是口否口文件記錄檢查是否為現(xiàn)用版本是否準(zhǔn)備相應(yīng)記錄是口否口是口否口消毒劑檢查口１‰新潔爾滅：批號(hào)、效期有效期至：年月日口5‰新潔爾滅：批號(hào)、效期有效期至：年月日口１﹪來蘇兒：批號(hào)、效期有效期至：年月日口5﹪來蘇兒：批號(hào)、效期有效期至：年月日備注操作人：日期：__________復(fù)核人：日期:______________5.2操作前準(zhǔn)備工藝步驟操作標(biāo)準(zhǔn)及工藝要求過程記錄物料確認(rèn)按照工藝要求準(zhǔn)備物品：100ml方瓶、橡膠塞、10ml吸管、無毛抹布、C級(jí)區(qū)潔凈服及口罩、不銹鋼盆、不銹鋼桶、吸球。物品準(zhǔn)備完好且在滅菌有效期內(nèi)是口否口滅菌批號(hào)：有效期至：年月日滅菌批號(hào)：有效期至：年月日物料名稱來源規(guī)格（ml/瓶）批號(hào)領(lǐng)入數(shù)量（瓶）有效期至E-MEM培養(yǎng)基本室配液組8.0％碳酸氫鈉本室配液組3.0％谷氨酰胺本室配液組新生牛血清細(xì)胞確認(rèn)細(xì)胞名稱代次瓶型數(shù)量（瓶）日齡人胚肺二倍體細(xì)胞（2BS株）備注操作人：日期：__________復(fù)核人：日期:______________5.3生產(chǎn)操作工作時(shí)間：年月日時(shí)分至?xí)r分工藝步驟操作標(biāo)準(zhǔn)及工藝要求過程記錄生長液配制生長液配方:80.9﹪E-MEM+16.2﹪（ml/ml）新生牛血清+0.9﹪（ml/ml）（3.0﹪谷氨酰胺）+2.0﹪（ml/ml）（8.0﹪碳酸氫鈉）。以配制494.5ml生長液為例。1、計(jì)算：E-MEM=494.5ml×80.9﹪=400.0ml新生牛血清=494.5×16.2﹪=80.0ml3.0﹪谷氨酰胺=494.5×1﹪=4.5ml8.0﹪碳酸氫鈉=494.5×2.0﹪=10.0ml2、操作步驟：取裝量為mlMEM培養(yǎng)基瓶，每瓶均按上述同樣方法配制。3.消耗E-MEM=ml，新生牛血清=ml3.0﹪谷氨酰胺=ml，8.0﹪碳酸氫鈉=ml換液1．凍存前24小時(shí)，細(xì)胞換一次生長液2.棄掉舊液，每瓶再加入13～16ml含20%（ml/ml)新生牛血清的生長液。1.是口否口2.每瓶加入ml生長液,共消耗生長液ml培養(yǎng)1.培養(yǎng)方式：靜止培養(yǎng)2.培養(yǎng)時(shí)間:24h3.培養(yǎng)溫度：37±0.5℃。是口否口是口否口是口否口細(xì)胞使用情況細(xì)胞名稱使用數(shù)（瓶）剩余數(shù)量（瓶）去向瓶型人胚肺二倍體細(xì)胞（2BS株）偏差生產(chǎn)操作過程中是否出現(xiàn)偏差是口否口偏差編號(hào)：備注操作人：日期：__________復(fù)核人：日期:______________5.4清場(chǎng)操作：清場(chǎng)要求清場(chǎng)過程確認(rèn)結(jié)果在生產(chǎn)完成后清場(chǎng)操作前需在房間門上懸掛“待處理”標(biāo)志牌，關(guān)閉層流罩，日光燈。懸掛“待處理”標(biāo)志牌，關(guān)閉層流罩，日光燈。合格口不合格口按《生產(chǎn)區(qū)清場(chǎng)、清潔、消毒管理標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》SOP03-3-0-008對(duì)操作區(qū)域進(jìn)行清潔、消毒。將不銹鋼盆、桶、100ml方瓶、250ml瓶、500ml瓶、橡膠塞、吸管、送到洗刷間清洗。合格口不合格口按要求懸掛狀態(tài)標(biāo)識(shí)。正確懸掛狀態(tài)標(biāo)識(shí)牌標(biāo)識(shí)。合格口不合格口廢棄物裝袋放固定位置送出。廢棄物裝袋放固定位置送出。合格口不合格口集液槽用5‰（ml/ml）新潔爾滅或5﹪（ml/ml）來蘇兒溶液清洗消毒及液封。集液槽已用5‰（ml/ml）新潔爾滅或5﹪（ml/ml）來蘇兒溶液清洗消毒及液封。合格口不合格口操作人：日期：年月日復(fù)核人：日期：年月日檢查人：日期：年月日6細(xì)胞凍存6.1生產(chǎn)前檢查生產(chǎn)前檢查項(xiàng)目生產(chǎn)前檢查內(nèi)容檢查情況生產(chǎn)環(huán)境檢查操作間名稱：細(xì)胞制備間（一）環(huán)境溫度15～26℃相對(duì)濕度30～70%清場(chǎng)是否在有效期內(nèi)。是口否口是口否口是口否口設(shè)備檢查設(shè)備、設(shè)施名稱：潔凈臺(tái)、倒置顯微鏡、離心機(jī)、低溫冰箱、液氮罐是否處于清潔、完好狀態(tài)是否在驗(yàn)證有效期內(nèi)是口否口是口否口文件記錄檢查是否為現(xiàn)用版本是否準(zhǔn)備相應(yīng)記錄是口否口是口否口消毒劑檢查口１‰新潔爾滅：批號(hào)、效期有效期至：年月日口5‰新潔爾滅：批號(hào)、效期有效期至：年月日口１﹪來蘇兒：批號(hào)、效期有效期至：年月日口5﹪來蘇兒：批號(hào)、效期有效期至：年月日備注操作人：日期：__________復(fù)核人：日期:______________6.2操作前準(zhǔn)備工藝步驟操作標(biāo)準(zhǔn)及工藝要求過程記錄物料確認(rèn)按照工藝規(guī)程要求準(zhǔn)備物品：100ml方瓶、橡膠塞、2ml吸管、10ml吸管、250ml瓶、100ml離心瓶、2ml凍存管無毛抹布、C級(jí)區(qū)潔凈服及口罩、不銹鋼盆、不銹鋼桶、吸球。物品準(zhǔn)備完好且在滅菌有效期內(nèi)是口否口滅菌批號(hào)：有效期至：年月日滅菌批號(hào)：有效期至：年月日物料名稱來源規(guī)格（ml/瓶）批號(hào)領(lǐng)入數(shù)量（瓶）有效期至E-MEM培養(yǎng)基本室配液組0.25％胰蛋白酶本室配液組3.0％谷氨酰胺本室配液組8.0％碳酸氫鈉本室配液組二甲基亞砜新生牛血清細(xì)胞確認(rèn)細(xì)胞名稱代次瓶型數(shù)量（瓶）日齡人胚肺二倍體細(xì)胞（2BS株）備注操作人：日期：__________復(fù)核人：日期:______________6.3生產(chǎn)操作工作時(shí)間：年月日時(shí)分至?xí)r分工藝步驟操作標(biāo)準(zhǔn)及工藝要求過程記錄液體配制凍存液配制配方:80.9﹪E-MEM+16.2﹪（ml/ml）新生牛血清+0.9﹪（ml/ml）（3.0﹪谷氨酰胺）+2.0﹪（ml/ml）（8.0﹪碳酸氫鈉）。以配制494.5ml生長液為例。1、計(jì)算：E-MEM=494.5ml×80.9﹪=400.0ml新生牛血清=494.5×16.2﹪=80.0ml3.0﹪谷氨酰胺=494.5×1﹪=4.5ml8.0﹪碳酸氫鈉=494.5×2.0﹪=10.0ml2、操作步驟：取裝量為mlE-MEM培養(yǎng)基瓶，每瓶均按上述方法配制。3.消耗E-MEM=ml，新生牛血清=ml3.0﹪谷氨酰胺=ml，8.0﹪碳酸氫鈉=ml生長液配制配方：87.4﹪（ml/ml）E-MEM+10﹪（ml/ml）新生牛血清+0.9﹪（ml/ml）（3.0﹪谷氨酰胺）+1.7﹪（ml/ml）（8.0﹪碳酸氫鈉）以配制458.0ml生長液為例。1.計(jì)算：E-MEM=458.0×87.4﹪=400.0ml新生牛血清=458.0×10﹪（ml/ml）=46.0ml3.0﹪谷氨酰胺=458.0×0.9﹪（ml/ml）=4.1ml8.0﹪碳酸氫鈉=458.0×1.7﹪（ml/ml）=8.0ml2.操作步驟：取裝量為mlE-MEM培養(yǎng)基瓶，每瓶均按上述同樣的方法配制瓶。3.消耗E-MEM=