《臨床微生物學檢驗技術》實驗教學大綱（供四年制本科醫(yī)學檢驗技術專業(yè)使用）

《臨床微生物學檢驗技術》實驗教學大綱（供四年制本科醫(yī)學檢驗技術專業(yè)使用）Ⅰ前言本教學大綱是依據(jù)衛(wèi)生部規(guī)劃教材《臨床微生物學檢驗技術實驗指導》（第1版），并根據(jù)我校醫(yī)學檢驗技術本科教學計劃，為配合醫(yī)學檢驗系本科專業(yè)課程“臨床微生物學檢驗技術”的實驗教學而編寫，要求學生通過實驗課程的學習，一方面驗證理論，進一步鞏固已學到的理論知識；另一方面，通過親自動手操作，使學生能正確熟練地掌握微生物檢驗的基本技術和基本技能，熟悉臨床上常見病原微生物，特別是病原性細菌的生物學特性及其鑒定方法，并能對常見臨床標本進行細菌檢驗并作出正確報告。同時，在實驗過程中逐步培養(yǎng)學生獨立操作、獨立思考、分析問題和解決問題的能力。本大綱適用于四年制本科醫(yī)學檢驗技術專業(yè)使用?，F(xiàn)將大綱使用中有關問題說明如下:一為了使教師和學生更好地掌握教材，大綱每一章節(jié)均由教學目的、教學要求和教學內容三部分組成。教學目的注明教學目標；教學要求分掌握、熟悉和了解三個級別；教學內容中核心內容即知識點以下劃實線標示，重點內容以下劃虛線標示，一般內容不標示與教學要求相對應，便于學生重點學習。二總教學參考時數(shù)：118學時，其中理論66學時，實驗課52學時，根據(jù)醫(yī)學檢驗系本科教學計劃，“臨床微生物學檢驗技術”實驗課共52學時。三教材及參考書：《臨床微生物學檢驗技術實驗指導》，人民衛(wèi)生出版社，劉運德、樓永良主編，第1版，2015年4月。Ⅱ正文實驗一細菌形態(tài)學檢查技術一教學要求學習細菌涂片的制備方法，制備完后可用染色（革蘭染色）和不染色法觀察細菌形態(tài)。二教學目的（一）掌握細菌涂片的制備方法和革蘭染色技術。（二）熟悉不染色標本的觀察方法與用途（三）熟悉細菌基本形態(tài)三教學內容（一）微生物實驗室規(guī)則與生物安全防護（二）光學顯微鏡的使用（三）細菌染色方法分類與選擇（四）革蘭染技術的原理、染色方法步驟（五）常見細菌及臨床標本涂片方法。（六）細菌壓滴法（七）細菌懸滴法（八）細菌形態(tài)觀察實驗二培養(yǎng)基的制備及細菌培養(yǎng)方法與接種技術一教學要求學習常用培養(yǎng)基的制備方法、用途；細菌的培養(yǎng)方法；接種技術。二教學目的（一）掌握培養(yǎng)基制備的基本技術及細菌培養(yǎng)方法。（二）熟悉常用培養(yǎng)基的基本成份、種類和用途；細菌分離培養(yǎng)、接種技術和接種用具（三）了解壓力蒸汽滅菌器的使用三教學內容（一）常用培養(yǎng)基的成份及制備技術1血平板的制備2巧克力的制備3SS平板的制備4麥康凱瓊脂平板的制備5KIA的制備（二）細菌培養(yǎng)方法（三）細菌接種的基本程序（四）壓力蒸汽滅菌器的使用實驗三、四球菌的分離培養(yǎng)和鑒定一教學要求學習臨床上常見球菌屬細菌的菌落特點、菌體特點、染色特性及分離培養(yǎng)和鑒定方法，在鑒定過程中熟悉ATB操作流程。二教學目的（一）掌握常見葡萄球菌、腸球菌屬、鏈球菌屬、奈瑟菌屬和布蘭漢菌屬的菌落特點、菌體形態(tài)及染色性及分離培養(yǎng)和鑒定方法。（二）熟悉ATBNEW的操作流程；數(shù)字編碼鑒定技術的原理和結果判斷。（三）了解細菌鑒定技術的發(fā)展過程。三教學內容（一）細菌鑒定技術的發(fā)展過程（二）數(shù)碼鑒定法基本原理（三）全自動和半自動化細菌鑒定和藥敏分析系統(tǒng)（四）細菌形態(tài)觀察和鑒定程序（五）觸酶試驗（六）血漿凝固酶試驗（七）膽汁-七葉苷試驗（八）65g/LNaCl生長試驗（九）奧普托欣試驗（十）桿菌肽敏感試驗（十一）CAMP試驗（十二）氧化酶試驗（十三）DNA酶實驗實驗五腸桿菌科細菌的分離培養(yǎng)及鑒定一教學要求通過本次實驗課使學生能對腸桿菌科常見細菌的形態(tài)、染色特點、生長特性等基本知識在理論課的基礎上有實體的認識，并能運用細菌的形態(tài)、生長特性及一些常用實驗對腸桿菌科細菌進行初步的鑒別，幫助學生掌握腸桿菌科細菌分離培養(yǎng)及鑒定的基本技能。二教學目的（一）掌握腸桿菌科細菌的形態(tài)、染色特點、培養(yǎng)特性、生化反應及檢驗方法；掌握各種生化反應的原理、操作方法。（二）熟悉沙門菌屬血清學鑒定方法；志賀菌屬血清學鑒定方法；編碼鑒定方法；ATB半自動細菌鑒定儀基本操作。（三）了解耶爾森菌屬的基本生物學特性及臨床意義。三教學內容（一）腸桿菌科編碼鑒定及原理（二）半自動化ATB儀器細菌鑒定（三）KIA實驗（四）多價血清凝集實驗（五）大腸埃希氏菌、肺炎克雷伯菌、變形桿菌、傷寒沙門氏的生物學特性與鑒定方法實驗六弧菌屬細菌分離培養(yǎng)及鑒定一教學要求弧菌屬共有36個種，有12個種與人類感染有關，其中以霍亂弧菌和副溶血最為重要，分別引起霍亂和食物中毒。尤其霍亂弧菌（O1和O139群引起霍亂）是烈性腸道傳染病霍亂的病原體，雖然在我們臨床菌株分離中比較少見，但我們儲備必要的理論知識是必須要的，所以通過本次所以希望學生能：（一）掌握弧菌的形態(tài)染色、培養(yǎng)特性、菌落特征和主要生化反應；弧菌的分離培養(yǎng)與鑒定方法；（二）熟悉弧菌屬與氣單胞菌和鄰單胞菌主要的生長及生化特性區(qū)別；以加強學生在以后工作中遇到類似細菌的分離培養(yǎng)及鑒定能力。二教學目的（一）掌握弧菌的形態(tài)染色、培養(yǎng)特性、菌落特征和主要生化反應；弧菌的分離培養(yǎng)與鑒定方法；（二）熟悉弧菌屬與氣單胞菌和鄰單胞菌主要的生長及生化特性區(qū)別；弧菌屬編碼鑒定方法；ATB半自動細菌鑒定儀基本操作。（三）了解霍亂弧菌檢驗程序、標本采集和運送以及主要致病因素；霍亂弧菌標本直接鏡檢、動力和制動試驗；致腹瀉的氣單胞菌致病機制。三教學內容（一）細菌的形態(tài)染色、菌落特征。（二）生化鑒別試驗1氧化酶試驗2克氏雙糖試驗3O/F試驗4O/129試驗（三）微量生化管鑒定（四）ATB半自動鑒定試驗實驗七非發(fā)酵革蘭陰性桿菌分離培養(yǎng)及鑒定一教學要求近10多年來,由于在人群中廣泛使用廣譜抗生素、免疫制劑和進行放射治療,由非發(fā)酵革蘭氏陰性桿菌引起的各種感染癥愈來愈多。被公認的致病菌如腦膜炎膿毒性黃桿菌、鼻疽假單胞菌、類鼻疽假單胞菌等仍是人和動物的重要病原菌,椰毒假單胞菌產生強烈的毒素可引起死亡率極高的食物。二教學目的（一）掌握銅綠假單胞菌、不動桿菌、嗜麥芽窄食單胞菌屬的分離培養(yǎng)及鑒定方法。（二）熟悉非發(fā)酵菌的概念（三）了解非發(fā)酵菌在醫(yī)院感染中的地位三教學內容（一）銅綠假單胞菌的生物學特性與鑒定方法（二）嗜麥芽窄食單胞菌的生物學特性與鑒定方法（三）鮑曼不動桿菌的生物學特性與鑒定方法（四）氧化酶實驗（五）O-F試驗（六）非發(fā)酵革蘭陰性桿菌生化鑒定編碼鑒定技術及原理（七）ATB半自動鑒定試驗實驗八嗜血桿菌、革蘭陽性桿菌分離培養(yǎng)及鑒定一目的要求通過本次實驗課使學生學會能掌握嗜血桿菌、需氧革蘭陽性桿菌及分枝桿菌的微生物檢驗能力。二教學目的（一）掌握流感嗜血桿菌的染色、培養(yǎng)特性及菌落特點；結核分枝桿菌的基本形態(tài)和抗酸染色法的原理及操作步驟；“衛(wèi)星現(xiàn)象（satellitephenomenon）”試驗、因子實驗操作。（二）熟悉蠟樣芽胞桿菌、產單核李斯特菌、陰道加特納菌染色、菌落特點及微生物學檢驗意義；熟悉抗酸染色的操作步驟、報告方式及結果解釋。（三）了解杜克雷嗜血桿菌的臨床意義；布魯菌的培養(yǎng)特性及臨床意義；炭疽芽孢桿菌的染色、培養(yǎng)特性、菌落特點及臨床意義；白喉棒狀桿菌的臨床意義；麻風分枝桿菌的臨床意義。三教學內容（一）流感嗜血桿菌革蘭染色、菌落形態(tài)及衛(wèi)星現(xiàn)象觀察。（二）流感嗜血桿菌V因子、X因子實驗。（三）流感嗜血桿菌半自動化鑒定和藥敏分析。（四）流感嗜血桿菌β-內酰胺酶檢測。（五）枯草芽孢桿菌、蠟樣芽胞桿菌染色、菌落形態(tài)觀察。（六）抗酸染色的操作步驟、報告方式及結果解釋。（七）杜克雷嗜血桿菌的臨床意義。（八）布魯菌的培養(yǎng)特性及臨床意義。（九）炭疽芽孢桿菌的染色、培養(yǎng)特性、菌落特點及臨床意義。（十）白喉棒狀桿菌的臨床意義。（十一）麻風分枝桿菌的臨床意義。實驗九革蘭陽性厭氧桿菌和醫(yī)院感染中生物監(jiān)測與消毒滅菌技術一教學目的通過本次實驗課使學生能對革蘭陽性厭氧芽胞梭菌的形態(tài)、染色特點、培養(yǎng)特性等初步認識，掌握壓力蒸汽滅菌器滅菌效果的監(jiān)測方法及評估應用，本次所學的技術能鑒別厭氧菌感染的特性及醫(yī)院感染微生物監(jiān)測的重要性。二教學要求（一）掌握壓力蒸汽滅菌器滅菌效果的監(jiān)測方法及評估；厭氧芽胞梭菌的形態(tài)特點和培養(yǎng)特性。（二）熟悉空氣、物體表面等消毒效果的監(jiān)測方法及結果評價。（三）了解厭氧菌的分離方法。三教學內容（一）革蘭陽性厭氧芽孢梭菌的形態(tài)、染色特點、培養(yǎng)特性、檢測方法。（二）高壓蒸汽滅菌效果監(jiān)測及評估（三）飲用桶裝水、自來水、污水細菌數(shù)監(jiān)測（四）室內空氣室外空氣細菌學監(jiān)測（五）物體體表細菌學監(jiān)測（六）人體體表細菌學監(jiān)測實驗十支原體檢驗、真菌實驗室檢查一教學目的學習臨床上檢驗真菌的常用方法，包括真菌標本的采集、直接鏡檢、染色鏡檢、分離培養(yǎng)等。與細菌相比，真菌試驗要特別注意實驗中生物安全防護問題。學習支原體的微生物學特性及微生物學檢驗。二教學要求（一）掌握不染色標本直接鏡檢技術；真菌檢查染色技術和墨汁負染技術；常見真菌培養(yǎng)方法和鑒定要點；掌握支原體（Uu、Mh）分離培養(yǎng)藥敏試驗的原理、操作方法及結果判讀。（二）熟悉酵母樣真菌的菌落特點、形態(tài)、結構特點及分離培養(yǎng)與鑒定。（三）了解絲狀真菌的菌落特點、形態(tài)、結構特點。三教學內容（一）真菌不染色直接檢查法（二）新型隱球菌革蘭染色和墨汁負染實驗（三）假絲酵母菌革蘭染色、培養(yǎng)特征和芽管形成實驗（四）臨床常見真菌顯色培養(yǎng)基接種培養(yǎng)鑒定（五）真菌半自動化細菌鑒定和藥敏分析方法（六）絲狀真菌形態(tài)觀察和鑒別要點（示教）（七）支原體（Uu、Mh）分離培養(yǎng)藥敏試驗原理、操作步驟、結果判讀實驗十一臨床標本細菌學檢驗一教學目的通過本次實驗課學生對血液、尿液、痰液及糞便等臨床標本如何進行細菌學檢驗，如何采集臨床標本，要求同學綜合前面所學的細菌學檢驗知識，獨立完成本次模擬標本中細菌的檢驗。二教學要求（一）掌握血液、尿液、痰液、糞便標本的細菌學檢驗。（二）熟悉血液、尿液、痰液、糞便標本的實驗室檢驗流程。（三）了解血液、尿液、痰液、糞便標本的采集、運送、驗收標準。三教學內容血液、尿液、痰液、糞便標本的標本的細菌學檢驗方法、檢驗流程和及標本的采集、運送、驗收標準。實驗十二抗菌藥物敏感性實驗（一）一教學目的學習抗菌藥物敏感性試驗常用方法：藥敏紙片瓊脂擴散法（K-B法）、肉湯稀釋法藥敏試驗、E-Test的原理、操作方法及結果判讀等。二教學要求（一）掌握藥敏紙片瓊脂擴散法（K-B法）的原理、操作方法、結果判讀、抑菌圈直徑測量方法（二）熟悉肉湯稀釋法藥敏試驗的原理、操作方法、影響因素、結果判讀和臨床意義；E-Test的原理、操作方法、結果判讀及E-Test的注意事項。（三）了解紙片擴散法的質量控制三教學內容（一）常見抗菌藥物種類及其作用機制（二）紙片瓊脂擴散法（K-B法）的原理、操作方法、結果判斷及臨床意義。（三）肉湯稀釋法藥敏試驗的原理、操作方法、影響因素、結果判讀和臨床意義。（四）E-Test的原理、操作方法、結果判讀及E-Test的注意事項。實驗十三抗菌藥物敏感性實驗（二）一教學目的學習常見細菌的耐藥性和產生機制及細菌耐藥表型的實驗室檢查方法。二教學要求（一）掌握頭孢西丁檢測耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的方法、結果判讀；頭孢硝噻吩紙片檢測β-內酰胺酶的方法、結果判讀；超廣譜β-內酰胺酶（ESBL）檢測的方法（雙紙片法）、結果判讀；碳青霉烯類篩選試驗-改良Hodge試驗的方法、結果判讀。（二）熟悉苯唑西林瓊脂稀釋法檢測耐甲氧西林葡萄球菌；葡萄球菌克林霉素誘導耐藥的檢測方法。（三）了解常見細菌的耐藥性和產生機制,超級細菌的概念。三教學內容（一）超級細菌的概念。（二）頭孢西丁紙片法檢測耐甲氧西林葡萄球菌的原理、方法、結果判讀（三）頭孢硝噻吩紙片紙片法檢測β內酰胺酶的原理、方法、結果判讀（四）紙片法檢測超廣譜β內酰胺酶（ESBLs）的原理、方法、結果判讀（五）常見碳青霉烯酶篩選試驗-改良hodge試驗的原理、方法、結果判讀（六）葡萄球菌克林霉素誘導耐藥的檢測原理、方法、結果判讀Ⅲ教學組織與方法一實施機構：由醫(yī)學檢驗系臨床微生物學免疫檢驗教研室執(zhí)行。二組織內容：教案講義審核、集體教學備課、教學方法研究、教學手段應用。三教學方法：1實驗教學：布置實驗內容，課堂講解和演示，以8-10人為1組，學生獨立操作。2教學點：在醫(yī)學檢驗系臨床微生物實驗室教學，承擔教師由臨床微生物學免疫檢驗教研室委派。3輔導形式：課堂巡視和指導、討論、復習等結合。四考核辦法：實驗成績占20%（實驗教師權限占其中的90%，包括實驗課紀律、實驗操作、實驗報告等；實驗管理人員權限占其中的10%，包括實驗室衛(wèi)生狀況、使用儀器設備登記、按管理員編排座號入座、學生干部履行職責等）。=4\*ROMANIV教學時數(shù)分配表實驗課學時數(shù)類型實驗一細菌形態(tài)學檢查技術4驗證型驗證型實驗二培養(yǎng)基的制備、細菌分離培養(yǎng)技術和培養(yǎng)方法4驗證型實驗三球菌的分離培養(yǎng)及鑒定（一）4綜合型驗證型實驗四球菌的分離培養(yǎng)及鑒定（二）4綜合型驗證型實驗五腸桿菌科細菌分離培養(yǎng)及鑒定