雙黃連口服液中有效成份含量測定技術(shù)

雙黃連口服液中有效成份含量測定技術(shù)目的利用HPLC法對雙黃連口服液中黃苓苷的含量進(jìn)行科學(xué)測定。方法其固定相主要是在結(jié)合實際的基礎(chǔ)上對十八烷基鍵合硅膠進(jìn)行選擇。其中流動相為甲醇：水：冰乙酸（60：50：1）。結(jié)果黃苓苷所呈現(xiàn)的線性良好，但是為范圍在25?220瞄范圍內(nèi)，注意其平均回收率需要控制在100.59%。結(jié)論該種方法不僅可實現(xiàn)對雜質(zhì)的有效分離，對該制劑中黃苓苷的含量測定工作的順利開展有積極意義。標(biāo)簽：高效液相色譜法；黃苓苷；雙黃連口服液金銀花、黃苓和連翹是雙黃連口服液處方的主要成分，辛涼解表、清熱解毒是雙黃連口服液的主要功效，在緩解外感風(fēng)熱引起的發(fā)熱、咳嗽、咽痛癥狀方面也起著相當(dāng)重要的作用。中國要藥典針對雙黃連口服液中黃苓苷含量測定工作所使用的質(zhì)量指標(biāo)為HPLC法。通過實驗發(fā)現(xiàn)黃苓苷峰與雜質(zhì)峰之間呈現(xiàn)出無法分離的狀態(tài)。效果好，快速準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好是改變流動相比例的明顯優(yōu)勢，因此我我們說將其用于制劑質(zhì)量控制工作過程中至關(guān)重要。一、 儀器與試藥1.SSIW型液相泵是在實際實驗過程中所使用的主要儀器，該儀器由美國生產(chǎn)，M525紫外檢測器，Anastar色譜工作站也是同一公司所提供的試驗儀器。電子天平也是試驗過程中不可缺少的工具之一，其型號為賽多利斯BP-211D。中國藥品生物制品檢定所，批號200512的黃苓苷是本次試驗的對照品。雙黃連口服液主要由哈高科白天鵝藥業(yè)集團(tuán)有限公司、江蘇吳中實業(yè)股份有限公司蘇州長征制藥廠以及中國黑龍江完達(dá)山制藥提供，批號分別為05117-1.050114以及050301。甲醇（色譜純）、冰乙酸（AR）以及重蒸水也是在試驗過程中所必須使用的材料，在實際準(zhǔn)備過程中必須對其質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格檢驗。KromasilC18tt（5^m，250mmx4.6mm）是藥典流動相樣品的HPLC色譜條件色譜柱，甲醇：水：冰乙醇（60：50：1）作為流動相存在于上述試驗中，注意其溫度最高不可超過40°C，檢測波長也需要借助必要的措施與手段控制在274nm。二、 試驗方法和結(jié)果在實際稱取黃苓苷對照品的過程中我們需要將其控制在20.60mg，這也是對照品液的制備工作順利開展的基礎(chǔ)與前提，注意必須保障其精密性，其放置的量瓶為200ml。在添加甲醇的過程中必須充分結(jié)合實際，為在真正意義上促使其溶解必須放置在水浴中進(jìn)行振搖。然后放置在室溫下進(jìn)行稀釋，直到刻度為止，最后要搖晃至均勻。標(biāo)準(zhǔn)曲線精密吸取上述對照品溶液0.25ml,0.50ml,0.75ml,1.00ml,1.25ml,1.50ml,1.75ml,2.00ml,置10ml容量瓶中，加50%甲醇至刻度。進(jìn)樣20^1,記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（ 曜）為橫坐標(biāo)繪制回歸方程：Y=6535.7X+9508（r=0.9995）,結(jié)果黃苓苷在25?220瞄范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。改進(jìn)流動相后對照品的HPLC色譜圖精密度試驗分別精密進(jìn)對照品溶液20^1，重復(fù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件記錄峰面積，結(jié)果RSD%=0.89%。樣品分離度按樣品測定法制備供試液進(jìn)樣20^1，記錄色譜圖（圖3）,結(jié)果峰與相鄰雜質(zhì)峰分離完全，分離度＞2.5o重現(xiàn)性試驗取同一批樣品（05117-1），按樣品測定法制備供試液，在上述色譜條件下進(jìn)行5次平行測定，結(jié)果RSD=1.56%，表明本法測定的重現(xiàn)性好。穩(wěn)定性試驗取批號05117-1的供試品溶液，分別在制備后0,2,4,8,12h測定，結(jié)果黃苓苷的峰面積RSD=1.82%，表明溶液基本穩(wěn)定。陰性干擾實驗取陰性對照樣品（按《中國藥典》2000版一部缺黃苓苷制劑），精密進(jìn)陰性對照品溶液20^1,按上述色譜條件記錄色譜圖。結(jié)果黃苓苷對照品相應(yīng)無干擾峰出現(xiàn)，說明處方中其他成分對測定結(jié)果無干擾。改進(jìn)流動相后陰性對照的HPLC色譜圖。回收率試驗采用加樣回收法。精密量取已知含量的樣品1ml，置50ml量瓶中，分別精密加入濃度為10.30mg/ml；黃苓苷對照品溶液1ml，2ml,3ml，加50%甲醇稀群至刻度。進(jìn)樣20^1，測定峰面積，計算回收率。加樣回收率試驗結(jié)果。樣品測定精密量取各樣品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇適量，超聲處理20min，放置至室溫，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用45呻液膜過濾，濾液即為供試品溶液，在上述色譜條件下，進(jìn)樣20^1，記錄峰面積，計算黃苓苷含量。改進(jìn)流動相后樣品的HPLC色譜，雙黃連口服液含量測定結(jié)果。三、討論本法測定雙黃連口服液的黃苓苷的含量，操作簡單易行，以甲醇：水：冰乙酸（60：50：1）為流動相，樣品中黃苓苷與雜質(zhì)峰完全分離，出峰時間短，峰形穩(wěn)定，進(jìn)樣量在20?220瞄范圍內(nèi)呈良好線性，回收率高且穩(wěn)定，可以選定上述色譜條件的流動相，作為該制劑黃苓苷的含量測定。1.樣品的制備用50%甲醇溶解樣品后，分別觀察了不同頻率超聲波處理后綠原酸、連翹苷、黃苓苷和漢黃苓素溶出率的差別，結(jié)果顯示不同頻率超聲處理未能增加4種指標(biāo)成分的溶出率，從節(jié)省時間和能源角度出發(fā)，本實驗采用50%甲醇溶解樣品后直接檢測分析。分析波長的選擇通過對綠原酸、連翹苷、黃苓苷和漢黃苓素四種標(biāo)準(zhǔn)品在190?800nm紫外可見光譜掃描，結(jié)果表明綠原酸在326nm有較強(qiáng)吸收，連翹苷在226nm有較強(qiáng)吸收，黃苓苷和漢黃苓素在278nm波長處有較強(qiáng)吸收，由于連翹苷和漢黃苓素在樣品中含量較低，而綠原酸和黃苓苷在樣品中含量較高，為了兼顧4種成分的同時測定，增加方法的靈敏度和準(zhǔn)確度，并減少干擾，本實驗采用波長轉(zhuǎn)換點(diǎn)檢測方法，分別選擇4種成分的各自最大吸收波長作為測定波長。流動相的選擇雙黃連制劑為中藥復(fù)方，成分組成較復(fù)雜，而且綠原酸、連翹苷、黃苓苷、漢黃苓素4個指標(biāo)成分極性差別較大，曾采用等度洗脫，綠原酸與鄰近組分不能有效分離，連翹苷和黃苓苷也未能完全分離開來，且連翹苷和黃苓苷分離效果甲醇系統(tǒng)明顯優(yōu)于乙臘系統(tǒng)，但乙臘系統(tǒng)中4個指標(biāo)成分峰型對稱，優(yōu)于甲醇系統(tǒng)。因此，本文最終采用梯度洗脫的方法，在0?8min乙臘的比例為12%，使綠原酸和鄰近組分達(dá)到基線分離，8?20min乙臘的比例保持不變，通過增加甲醇濃度來提高洗脫和分離效果，使連翹苷和黃苓苷基線分離，20?27min提高乙臘的濃度，使?jié)h黃苓素達(dá)到基線分離。實驗結(jié)果表明雙黃連口服液中4種標(biāo)志成份峰分離度良好，峰形對稱，與相鄰峰達(dá)到基線分離，并且方法學(xué)考察也達(dá)到分析要求，