galecin-7和mmp-9在食管鱗癌組織中的表達及意義

galecin-7和mmp-9在食管鱗癌組織中的表達及意義

癌癥是人類常見的腫瘤之一。在中國大陸地區(qū),食管癌的主要類型為鱗狀細胞癌,發(fā)病率居全國惡性腫瘤第五位,死亡率居第四位1材料和方法1.1材料表面1.1.1病例選擇及術(shù)后隨訪收集重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院胸外科2012年3月至2013年3月50例食管鱗癌者術(shù)后標本,同時收集其中38例距癌組織5cm以外的食管上皮組織。其中男性38例,女性12例,年齡44歲~83歲,平均年齡60.12歲;美國腫瘤聯(lián)合會(AmericanJointCommitteeonCancer)食管癌TNM臨床分期(2010年標準):I期11例,II期20例,III期19例;組織分化程度中低分化35例,高分化15例;伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者27例,無轉(zhuǎn)移者13例;有侵及外膜者23例,無外膜侵及者27例,排除身體其他部位原發(fā)性腫瘤。所選患者術(shù)前均未使用化療藥物及免疫增強藥物,患者術(shù)后第1年,每3個月復查胸部增強CT、全身骨顯像、頭顱CT、腹部彩超等以判斷是否出現(xiàn)復發(fā)轉(zhuǎn)移。術(shù)后第2年,每半年復查一次。患者隨訪時間12~24個月,平均隨訪時間16.5個月。1.1.2mmp-9蛋白多克隆抗體兔抗人Galectin-7蛋白多克隆抗體、兔抗人MMP-9蛋白多克隆抗體均購自Proteintech公司。二抗山羊抗兔SABC試劑盒及DAB染色試劑盒購自武漢博士德公司。1.2方法1.2.1in-7一抗、兔抗人mmp-9免疫組化采用鏈霉親和素–生物素復合物法(streptavidin-biotincomplex,SABC),兔抗人Galectin-7一抗、兔抗人MMP-9一抗均以1:200比例稀釋,PBS代替一抗作為陰性對照。使用ImageProPlus軟件觀察免疫組化染色結(jié)果,采用二級計分法:陽性細胞數(shù)<5%為0分,5%~20%為1分,20%~50%為2分,51%~75%為3分,>75%為4分;陽性強度:淡黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分,不著色為0分。兩者分數(shù)相加,<3分為陰性(–),≥3分為陽性(+)1.2.2資料統(tǒng)計分析應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析處理,蛋白表達比較用卡方檢驗,配對資料的相關(guān)性分析采用Pearson檢驗。平均光密度值以均數(shù)±標準差表示,兩組間比較采用t檢驗,相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析。對診斷方法的判斷使用ROC曲線分析。均以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2結(jié)果2.1galectin-7,mmp-9在因變量和細胞漿中表達免疫組化結(jié)果顯示,Galectin-7陽性染色表現(xiàn)為淡黃色至深棕色顆粒,定位于細胞漿。MMP-9陽性染色表現(xiàn)淡黃色至棕褐色顆粒,定位于胞漿及間質(zhì)(圖1和圖2)。食管鱗癌組織Galectin-7、MMP-9表達陽性率高于癌旁組織,差異有統(tǒng)計學意義(表1)。Galectin-7、MMP-9在食管鱗癌組織中的平均光密度值與癌旁組織中的平均光密度值差異有統(tǒng)計學意義(表2)。2.2galectin-7和mmp-9的發(fā)現(xiàn)與殘留動物的臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系食管鱗癌中,Galectin-7表達陽性率在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例中明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病例(χ2.3各因素的相關(guān)性對Galectin-7和MMP-9的表達進行的關(guān)聯(lián)性分析(Pearson關(guān)聯(lián)性分析),結(jié)果呈顯著正相關(guān)性(r=1.000,P=0.000)(表5)。對MMP-9和Galectin-7表達的平均光密度值進行Spearman相關(guān)性分析,結(jié)果(r=0.430,P=0.002)與Pearson關(guān)聯(lián)性分析一致,二者表達呈正性相關(guān)。2.4galec-tin-7和mmp-9在術(shù)后一年內(nèi)發(fā)生時間50例患者中,19例術(shù)后出現(xiàn)復發(fā)轉(zhuǎn)移,其中復發(fā)伴肝轉(zhuǎn)移2例,復發(fā)伴肺轉(zhuǎn)移5例,復發(fā)伴骨轉(zhuǎn)移2例,縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移3例,復發(fā)伴胸膜轉(zhuǎn)移1例,吻合口復發(fā)6例。其中I期0例,II期3例,III期9例。12例復發(fā)轉(zhuǎn)移均發(fā)現(xiàn)于術(shù)后一年以內(nèi)(第6~12月),平均發(fā)生時間為第10.25月,截止最后一次隨訪日(2014-04-02),已有7例患者死亡。19例復發(fā)轉(zhuǎn)移患者Galec-tin-7和MMP-9表達均陽性,單陽性患者及雙陰性患者均未出現(xiàn)復發(fā)轉(zhuǎn)移。將Galectin-7和MMP-9的平均光密度值做為預測術(shù)后早期復發(fā)的檢測指標,通過ROC曲線分析(圖3),Galectin-7的靈敏度為89.5%,特異度為71%;MMP-9的靈敏度94.7%,特異度為77.4%;聯(lián)合MMP-9和Galectin-7的靈敏度為94.7%,特異度為96.8%,說明聯(lián)合檢測MMP-9和Galectin-7對于獨立檢測MMP-9或Galectin-7有更高的診斷價值(表6和圖3)。3聯(lián)合檢測mmp-9和galectin-7對治療食鱗癌早期復發(fā)轉(zhuǎn)移的預測作用Galectin-7是一種β-半乳糖苷結(jié)合蛋白,在多種類型的腫瘤中存在著過表達,但是在不同腫瘤中的作用有差異,甚至完全相反。在多數(shù)鱗癌中,Galectin-7與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系大量研究表明,基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)對腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移起重要作用。MMP-9在基質(zhì)金屬酶家族中都屬于明膠酶類,是MMPs家族中分子量最大的酶。大量研究發(fā)現(xiàn),MMP-9在多種惡性腫瘤中過度表達Saussez等在本研究中,通過檢測MMP-9與Galectin-7的表達,分析二者表達與患者術(shù)后早期復發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系,我們發(fā)現(xiàn)聯(lián)合檢測MMP-9和Galectin-7對于預測食管鱗癌早期復發(fā)轉(zhuǎn)移具有較高的靈敏度和特異度,并且優(yōu)于單獨檢測MMP-9和Galectin-7,說明聯(lián)合檢測MMP-9和Galectin-7可作為預測食管鱗癌早期復發(fā)轉(zhuǎn)移的指標,并且比單獨檢測MMP-9及Galectin-7更具診斷價值。本研究表明,在食管鱗癌中Galectin-7和MMP-9蛋白存在正相關(guān)性,且均與腫