第七章 質(zhì)量控制

PAGEPAGE230第七章農(nóng)藥殘留分析的質(zhì)量控制農(nóng)藥殘留分析屬于痕量分析范疇，分析的農(nóng)藥及樣品基質(zhì)種類多，成份復(fù)雜，分析中投入的成本高。分析的結(jié)果經(jīng)常用于政府管理部門作為貿(mào)易、生產(chǎn)等活動的決定性依據(jù)，具有極大的責任和權(quán)威性。如果沒有嚴格、科學的質(zhì)量保證和質(zhì)量控制程序，難免出現(xiàn)分析結(jié)果不準確而造成決策失誤和花費大量投入建設(shè)的殘留分析實驗室不能合格有效運行的浪費等現(xiàn)象。因此，做好殘留分析的質(zhì)量控制是產(chǎn)生準確、可靠的殘留分析數(shù)據(jù)的重要前提和保證。農(nóng)藥殘留分析質(zhì)量控制的目的是使分析結(jié)果達到預(yù)定的準確和精密程度。為了達到這一預(yù)定目的所應(yīng)采取的措施和工作步驟都是事先規(guī)劃好的，通過一系列的規(guī)約加以確定，并要求有關(guān)分析人員按照規(guī)約操作，由此使分析過程處于受檢狀態(tài)。7.1農(nóng)藥殘留分析實驗室的基礎(chǔ)條件實驗室是獲得殘留分析結(jié)果的關(guān)鍵場所，要使殘留分析質(zhì)量達到規(guī)定水平，必須要有合格的實驗室和合格的分析操作人員。包括儀器的正確使用和定期校正；玻璃儀器的選用和校正；化學試劑和溶劑的選用；溶液的配制和標定、試劑的提純；實驗室的清潔度和安全工作；分析人員的操作技術(shù)等。7.1.1試劑要求1.蒸餾水蒸餾水是殘留分析實驗室最常用的水之一，通過蒸餾可以大大減少水中所含有的農(nóng)藥或其它雜質(zhì)，有效減少對殘留分析的干擾。但是，蒸餾水中常含有可溶性氣體和揮發(fā)性物質(zhì)。殘留分析實驗室一般不用金屬蒸餾器。也不采用離子交換法制備的去離子水，因為去離子水中仍然含有影響殘留農(nóng)藥分析的雜質(zhì)。最好采用石英玻璃蒸餾器蒸出的重蒸餾水。2.試劑一般化學試劑分為四級，其規(guī)格見表7-1。表7-1化學試劑的規(guī)格級別名稱代號標志顏色特級基準試劑、光譜純S?P白色一級保證試劑、優(yōu)級純G?R綠色二級分析試劑、分析純A?R紅色三級化學純C?P藍色殘留分析中所用試劑均應(yīng)為二級或二級以上，高效液相色譜儀流動相則應(yīng)使用一級（或稱色譜純）。由于市售的試劑往往達不到殘留分析的要求，需要進行凈化處理。為了確定溶劑的純度是否滿足農(nóng)藥殘留分析的要求，對市售的溶劑按下法檢驗：取300mL溶劑，放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，濃縮至5mL。取5μL，在準備應(yīng)用的色譜條件下，注入氣相色譜儀內(nèi)，在色譜圖上于2~60min內(nèi)，不應(yīng)有1mm以上的雜質(zhì)峰。某溶劑在整個分析方法過程中使用一定數(shù)量，取總量的2倍量，濃縮并定容到最小體積，取最大進樣量進樣，不出現(xiàn)雜質(zhì)峰或產(chǎn)生小于噪音兩倍或小于1～2mm的峰為標準。達到上述檢驗要求的溶劑，可以直接供農(nóng)藥殘留分析使用。達不到要求的溶劑，根據(jù)溶劑的性質(zhì)和所含的雜質(zhì)，分別選擇提純方法。常用試劑的處理方法如下：⑴.氧化鋁（層析用）：在550℃灼燒4小時。用前于130℃烘5小時，儲存于干燥器內(nèi)備用。⑵.弗羅里硅土（florisil）：在600~650℃灼燒3小時。用前于130℃烘5小時，儲存于干燥器內(nèi)備用。⑶.無水硫酸鈉（分析純，干燥脫水用）：在700℃灼燒4小時，用前于130℃烘5小時，儲存于干燥器內(nèi)備用。⑷.活性炭：分為兩種，第一，層析用活性炭：20~40目；第二，化學純級活性炭：黑色無定型顆粒物或粉末。處理方法：將活性炭放入濃鹽酸中，加熱煮沸1小時，用蒸餾水洗至中性，烘干后，放入帶蓋瓷皿內(nèi)、蓋上皿蓋，在600℃灼燒2小時，用前在105℃烘4小時，儲存于干燥器內(nèi)備用。⑸.脫脂棉及玻璃棉：放入索氏提取器中，加4%丙酮-正己烷溶劑，在水浴上回流4小時后，在通風櫥內(nèi)讓其自行揮發(fā)干。⑹.石油醚或正己烷：石油醚通常用沸程60~90℃。其主要成分是脂肪族烴類的混合物，雜質(zhì)主要為芳香族不飽和化合物。提純方法有：①.將石油醚通過中性的氧化鋁柱吸附后，再經(jīng)全玻璃系統(tǒng)蒸餾器蒸餾。收集其標程范圍內(nèi)的餾出部分（60～75℃）。②.取1000mL石油醚，加4gNaOH(A.R)，于水浴上回流2小時，再經(jīng)全玻璃系統(tǒng)蒸餾器蒸餾。收集其標程范圍內(nèi)的餾出部分（60～75℃）。③.將1000mL石油醚置于分液漏斗中，加入100mL濃硫酸（石油醚與硫酸的比例為10:1）充分混勻后，讓其分層，放去硫酸層。重復(fù)上述操作2~3次，然后用水洗，再用無水硫酸鈉干燥，過濾后，經(jīng)全玻璃系統(tǒng)蒸餾器蒸餾。收集其標程范圍內(nèi)的餾出部分（以下各種溶劑提純中，所說的蒸餾，均指全玻璃系統(tǒng)蒸餾器蒸餾）。⑺.丙酮：一般，市售的丙酮均能達到要求。其中含有大量水分，通常不超過0.5%。如果含水量較大，直接通過3A或4A分子篩層析柱脫水后，即可使用。如果丙酮中含有醛類和其他雜質(zhì)時，可向丙酮中逐次加入少量高錳酸鉀進行回流，直至紫色不褪為止。然后蒸餾，收集沸程為55~57℃的餾分，置于棕色瓶中保存。⑻.醋酸乙酯：醋酸乙酯中通常含有少量的游離酸（醋酸）、乙醇和水等雜質(zhì)。提純時，將醋酸乙酯置于分液漏斗中，用同等體積的5%Na2CO3水溶液充分洗滌后，棄去水層。然后，無水碳酸鉀進行干燥，過濾后，蒸餾。收集沸程為76.5~77.5℃的餾分。或1000mL乙酸乙酯，加入100mL乙酸酐和10滴濃硫酸，加熱回流4小時，蒸出后，再用碳酸鉀干燥，過濾，再蒸餾，收集沸程為76.5~77.5℃的餾分。⑼.乙腈：該溶劑由于毒性非常大，使用時應(yīng)特別注意。在國內(nèi)殘留分析方法中使用較少，國外使用較多。乙腈是一種非常惰性的試劑，可與水、醇和醚任意混合。其提純方法如下：①.向乙腈中加入數(shù)克無水碳酸鈉，至不溶為止。再加入少量高錳酸鉀，加熱回流至紫色不褪為止。然后進行蒸餾。蒸餾液用硫酸調(diào)至微酸性后，再進行精餾，收集81~82℃的餾分。②.取1L乙腈，加入1mL磷酸，再加入30g五氧化二磷，加沸石進行蒸餾。收集81~82℃的餾分（不超過82℃）。③.如果乙腈中所含雜質(zhì)較少，可直接通過硅膠或分子篩層析柱脫水后，蒸餾。收集81~82℃的餾分。⑽.三氯甲烷：三氯甲烷遇陽光照射后在空氣中氧的作用下，逐漸分解，生成極毒的光氣（碳酰氯）。為了防止生成光氣，一般市售的三氯甲烷加有0.5～1%的乙醇作為穩(wěn)定劑。如果乙醇不影響分析，可直接重蒸餾。收集沸點61.2℃的餾分。置于棕色試劑瓶中避光保存。如果需要除去乙醇，可按下法處理：取500mL三氯甲烷于1000mL分液漏斗中，加入25mL濃硫酸，振搖數(shù)分鐘，靜置分層后，棄去酸層，重復(fù)上述操作2~3次。然后用100mL2%的硫酸鈉溶液洗兩次，再經(jīng)無水硫酸鈉干燥，蒸餾，收集沸點61.2℃的餾分。置于棕色試劑瓶中避光保存。⑾.二氯甲烷：是常用溶劑，特別在液——液分配凈化中。一般二氯甲烷可直接重蒸餾后使用。如果需要進一步提純，可按三氯甲烷的提純方法進行處理。收集沸程39~41℃的餾分。置于棕色試劑瓶中避光保存。⑿.甲醇：一般甲醇進行重蒸餾，收集65±1℃的餾分，即可使用。如果需要除去甲醇中的微量丙酮，可于500mL甲醇中加入25mL呋喃甲醛和60mL10%NaOH溶液，加熱回流8小時后，蒸餾。收集65±1℃的餾分。再加入無水氯化鈣進行脫水，過濾。最后采用高效分餾柱進行重蒸餾，收集65℃的餾分。7.1.2實驗室的環(huán)境條件實驗室空氣中如含有固體、液體的氣溶膠和污染氣體，對痕量分析和超痕量分析會導(dǎo)致較大誤差。實驗室應(yīng)按照樣品存貯、天平稱量、樣品制備、儀器分析等劃分功能區(qū)。農(nóng)藥殘留分析中常用的高靈敏度儀器（GC，HPLC等），應(yīng)在潔凈的、單獨的實驗室中使用，不能和樣品制備實驗室混在一起。樣品制備操作應(yīng)在專門的通風櫥內(nèi)進行，幾種分析同時進行時應(yīng)注意防止相互交叉污染。實驗室內(nèi)需設(shè)各種必備的安全設(shè)施（通風櫥、防塵罩、排氣管道及消防滅火器材等），并應(yīng)定期檢查，保證隨時可供使用。使用電、氣、水、火時，應(yīng)按有關(guān)使用規(guī)則進行操作，保證安全。7.1.3人員要求1.殘留分析人員應(yīng)具有大專以上的文化水平，經(jīng)培訓、考試合格后才能承擔殘留分析工作。2.熟練地掌握本崗位的殘留分析技術(shù)，對承擔的殘留分析項目要做到理解原理、操作正確、嚴守規(guī)程、準確無誤。3.接受新項目前，應(yīng)在測試工作中達到規(guī)定的各種質(zhì)量控制實驗要求，才能進行項目的殘留分析。4.認真做好分析測試前的各項技術(shù)準備工作，實驗用水、試劑、標準溶液、器皿、儀器等均應(yīng)符合要求，方能進行分析測試。5.負責填報殘留分析結(jié)果，做到書寫清晰、記錄完整、校對嚴格、實事求是。6.及時地完成分析測試后的實驗室清理工作，做到現(xiàn)場環(huán)境整潔，工作交接清楚，做好安全檢查。另外，農(nóng)藥殘留分析實驗室內(nèi)要有質(zhì)量保證專職或兼職人員，負責殘留分析的質(zhì)量保證工作。殘留分析質(zhì)量保證人員應(yīng)熟悉質(zhì)量保證的內(nèi)容、程序和方法，了解殘留分析環(huán)節(jié)中的技術(shù)關(guān)鍵，具有有關(guān)的數(shù)理統(tǒng)計知識等。7.1.4管理制度1.樣品管理由于殘留分析樣品的特殊性，要求樣品的采集、運送和保存等各環(huán)節(jié)都必須嚴格遵守有關(guān)規(guī)定，以保證其真實性和代表性。殘留分析實驗室的技術(shù)負責人應(yīng)和采樣人員、測試人員共同議定詳細的工作計劃，周密地安排采樣和實驗室測試間的銜接、協(xié)調(diào)，以保證自采樣開始至結(jié)果報告的全過程中，樣品都具有合格的代表性。樣品的登記、驗收和保存要按以下規(guī)定執(zhí)行：⑴.采好的樣品應(yīng)及時貼好樣品標簽，填寫采樣記錄。將樣品連同樣品登記表、送樣單在規(guī)定的時間內(nèi)送交指定的實驗室。填寫樣品標簽和采樣記錄需使用防水墨汁，最好用鉛筆填寫。⑵.如需對采集的樣品進行分裝，分樣的容器應(yīng)和樣品容器材質(zhì)相同，并填寫同樣的樣品標簽，注明“分樣”字樣，同時對“空白”和“副樣”也都要分別注明。⑶.實驗室應(yīng)有專人負責樣品的登記、驗收，其內(nèi)容如下：樣品名稱和編號；樣品采集點的詳細地址和現(xiàn)場特征；樣品的采集方式，是單獨樣品還是混合樣；采樣日期和時間；采樣人、送樣人及登記驗收人簽名。2.藥品管理⑴.實驗室使用的化學試劑應(yīng)有專人負責管理，分類存放，定期檢查使用和管理情況。⑵.易燃、易爆物品應(yīng)存放在陰涼通風的地方，并有相應(yīng)安全保障措施。易燃、易爆試劑要隨用隨領(lǐng)，不得在實驗室內(nèi)大量積存。保存在實驗室內(nèi)的少量易燃品和危險品應(yīng)嚴格控制、加強管理。⑶.劇毒試劑應(yīng)有專人負責管理，加雙鎖存放，批準使用，兩人共同稱量，登記用量。⑷.取用化學試劑的器皿（如藥匙、量杯等）必須分開，每種試劑用一件器皿，至少洗凈后再用，不得混用。⑸.使用有機溶劑和揮發(fā)性強的試劑，操作應(yīng)在通風良好的地方或在通風櫥內(nèi)進行。任何情況下，都不允許用明火直接加熱有機溶劑。3.儀器管理⑴.各種精密貴重儀器以及貴重器皿要有專人管理，分別登記造冊、建卡立檔。儀器檔案應(yīng)包括儀器說明書、驗收和調(diào)試記錄、儀器的各種初始參數(shù)，定期保養(yǎng)維修、檢定、校準以及使用情況的登記記錄等。⑵.精密儀器的安裝、調(diào)試、使用和保養(yǎng)維修均應(yīng)嚴格遵照儀器說明書的要求。上機人員應(yīng)該考核?？己撕细穹娇缮蠙C操作。⑶.使用儀器前應(yīng)先檢查儀器是否正常。儀器發(fā)生故障時，應(yīng)立即查清原因，排除故障后方可繼續(xù)使用，嚴禁儀器帶病運轉(zhuǎn)。⑷.儀器用完之后，應(yīng)將各部件恢復(fù)到所要求的位置，及時做好清理工作，蓋好防塵罩。⑸.儀器的附屬設(shè)備應(yīng)妥善安放，并經(jīng)常進行安全檢查。應(yīng)保存每一臺儀器設(shè)備的檔案，其內(nèi)容包括：①.儀器設(shè)備名稱；②.制造商名稱、型號。序號或其他唯一性標識；③.接收日期和啟用日期；④.目前放置地點（如果適用）；⑤.接收時的狀態(tài)及驗收記錄（例如全新的，用過的，經(jīng)改裝的）；⑥.儀器設(shè)備使用說明書（或復(fù)制件）；⑦.校準和／或檢定（驗證）的日期和結(jié)果以及下次校準和／或檢定(驗證)的日期；⑧.迄今所進行維護的記錄和今后維護的計劃；⑨.損壞、故障、改裝或修理的歷史記錄。7.2農(nóng)藥標準物質(zhì)農(nóng)藥殘留量的檢測，絕大多數(shù)是采用大型精密儀器實現(xiàn)的。這些定量方法通常為比較法，即用農(nóng)藥標準物質(zhì)校準分析儀器，以其峰面積或峰高值為基準，在獲得未知樣品峰面積或峰高值后，就可計算出未知樣品中某種農(nóng)藥的殘留量。因此，農(nóng)藥標準物質(zhì)是開展農(nóng)藥殘留分析工作的先決條件，也是測定結(jié)果準確與否的質(zhì)量保證。農(nóng)藥標準物質(zhì)既然是一個基準尺度，分析工作者對它的要求就非常嚴格。如果它不符合要求，就會在分析檢測過程中將不準確的信息傳遞到被測定的樣品中去。本來農(nóng)藥殘留量不超標的樣品，由于農(nóng)藥標準物質(zhì)標定值偏低，最后的檢驗結(jié)果可能是不合格，反之亦然。所以從這一點講農(nóng)藥標準物質(zhì)不在于純度有多么高，而在于它的標定值必須準確無誤。由于農(nóng)藥殘留分析為痕量分析，對不確定度的要求相對不高，因此用于農(nóng)藥殘留分析的標準物質(zhì)不象農(nóng)藥制劑分析標準物質(zhì)那樣苛刻，但也必須定值準確，無干擾組分。農(nóng)藥標準物質(zhì)在農(nóng)藥殘留分析中的主要作用是測定方法的建立或驗證已有方法的不確定度和精密度。另外，對于中介的授權(quán)質(zhì)檢機構(gòu)必須采用有證農(nóng)藥標準物質(zhì)，才能開展農(nóng)藥殘留的檢驗工作，對農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留指標進行判定。農(nóng)藥標準物質(zhì)是實現(xiàn)農(nóng)藥殘留準確一致的測定、保證量值傳遞的計量標準。采用標準物質(zhì)開展檢驗工作還可以保證測定結(jié)果的可比性，達到量值的統(tǒng)一。7.2.1概述1.定義和等級美國于1906年就對標準物質(zhì)開展了研究和應(yīng)用，先后采用StandardSample,StandardMaterial和StandardReferenceMaterial(SRM)三個名稱。我國農(nóng)藥分析工作者也習慣將農(nóng)藥標準物質(zhì)稱為農(nóng)藥標樣或農(nóng)藥標準品。但是“標樣”和“標準品”已經(jīng)不符合國際和國內(nèi)的有關(guān)法規(guī)規(guī)定的叫法，因此有必要加以更正、正確的理解和使用。國際標準化組織（ISO）、國際法制計量組織（OIML）、國際純粹與應(yīng)用化學聯(lián)合會（IUPAC）和世界衛(wèi)生組織（WHO）等國際組織經(jīng)過反復(fù)協(xié)商，1981年正式確定了國際公認的名稱：標準物質(zhì)和有證標準物質(zhì)。我國目前在有關(guān)法規(guī)中也明確采用這一名稱。標準物質(zhì)（ReferenceMaterial,RM）：具有一種或多種足夠均勻和很好確定了的特性值，用以校準設(shè)備，評價測量方法或給材料賦值的材料或物質(zhì)。有證標準物質(zhì)(CertifiedReferenceMaterial,CRM)：附有證書的標準物質(zhì)。其一種或多種特性值用建立了溯源性的程序確定，使之可溯源到準確復(fù)現(xiàn)的用于表示該特性值的計量單位，而且每個標準值都附有給定置信水平的不確定度。有證標準物質(zhì)一般成批制備，其特性值是通過對整批物質(zhì)的樣品進行測量而確定，并具有規(guī)定的不確定度。標準物質(zhì)一般分為兩級：一級標準物質(zhì)（PrimaryReferenceMaterial,PRM）：采用絕對測量方法或其他準確、可靠的方法測量標準物質(zhì)的特性量值，其測量準確度達到國內(nèi)最高水平的有證標準物質(zhì)。該標準物質(zhì)由國務(wù)院計量行政部門批準、頒布并授權(quán)生產(chǎn)。一級標準物質(zhì)的均勻性、穩(wěn)定性良好。它在溯源鏈中起著承上啟下的作用。許多二級標準物質(zhì)是通過一級標準物質(zhì)溯源至國家基準的。一級標準物質(zhì)的穩(wěn)定性在1年以上或達到國際上同類標準物質(zhì)的先進水平。在包裝形式上應(yīng)符合一級標準物質(zhì)技術(shù)規(guī)范的要求。生產(chǎn)一級標準物質(zhì)，國家有關(guān)業(yè)務(wù)主管部門有一套程序和管理辦法。在只有一種定值方法的情況下，一級標準物質(zhì)定值過去還采用多個實驗室以同種準確可靠的方法定值。目前，國際公認的化學測量權(quán)威方法有精密庫侖法、同位素稀釋質(zhì)譜法，重量法、容量法、凝固點下降法等。一級標準物質(zhì)通常用于描述該種農(nóng)藥的理化常數(shù)。即使制備少量的一級標準物質(zhì)，也要耗費大量的人力和寶貴材料，致使一級標準物質(zhì)價格昂貴，一般不用于日常農(nóng)藥殘留測定工作。二級標準物質(zhì)（SecondaryRM或WorkingStandard）是指用與一級標準物質(zhì)進行比較測量的方法或一級標準物質(zhì)的定值方法定值，其穩(wěn)定度和均勻性未達到一級標準物質(zhì)水平，但能滿足一般測量的需要。二級標準物質(zhì)是在日常分析檢測中大量采用的一類標準物質(zhì)。二級標準物質(zhì)通常是國際農(nóng)藥分析協(xié)作委員會（CIPAC）定義的工作標樣，許多工作標樣，可以直接應(yīng)用原藥或稍加純化。不論是一級標準物質(zhì)還是二級標準物質(zhì)均為有證標準物質(zhì)。農(nóng)藥純品（PurePesticide）是指目前對農(nóng)藥提純和鑒定技術(shù)最高水平所能達到的條件下，純化出的能夠真正反映農(nóng)藥化合物本身特性的高純度物質(zhì)。農(nóng)藥純品不同于農(nóng)藥標準物質(zhì)，而是農(nóng)藥標準物質(zhì)的原材料。它僅有科技含量，沒有業(yè)務(wù)主管部門的授權(quán)和認可。農(nóng)藥純品除不具有量值傳遞、質(zhì)量檢驗功能以外，其他的功能還是具備的，如用于教學和科學研究工作等。農(nóng)藥純品若要成為農(nóng)藥標準物質(zhì)必須按照國家有關(guān)業(yè)務(wù)主管部門的一套程序和管理辦法進行制備、鑒定、定級和定值。在國際農(nóng)藥分析協(xié)作委員會手冊（CIPACHANDBOOKVol.IA-J）中有農(nóng)藥純品制備一章，現(xiàn)已發(fā)表了2,4-D、2甲4氯、2,4,5-涕、敵敵畏、狄氏劑、二硝甲酚、艾氏劑、魚藤酮、地樂酚、草芽平、2甲4氯丁酸、2甲4氯丙酸、殺螨酯、除螨酯、敵草快二溴鹽一水合物、百草枯二氯化物、樂果、賽草清、2,4-滴丁酸、2,4-滴丙酸、溴苯腈、溴苯腈辛酸酯、毒蟲畏、2,4,5-滴丙酸、消螨通、新燕靈、氰草津、抗蚜威、甲基嘧啶磷、嘧啶磷、乙嘧酚、乙嘧酚磺酸酯的制備和定值方法。2.基本要求⑴.含量純度一般應(yīng)達到99%以上。一級標準物質(zhì)應(yīng)定值到小數(shù)點后兩位。工作標樣為小數(shù)點后一位。工作標樣的純度可以低于99%，但定值要準確可靠，無干擾物質(zhì)。在均勻性方面還必須按照均勻性檢驗程序分析并檢測合格。⑵.物理常數(shù)象熔點、折光率等一類的物理常數(shù)應(yīng)符合權(quán)威文獻報導(dǎo)。⑶.溶液用相應(yīng)溶劑溶解時，溶液應(yīng)該是澄清的。⑷.薄層層析鑒定用合適的吸附劑，兩種展開條件，顯色后均為單點。⑸.經(jīng)過氣相色譜或液相色譜鑒定。用兩種不同極性色譜柱或兩種不同的流動相測定，扣除溶劑峰，面積歸一化后雜質(zhì)的含量應(yīng)低于1%。⑹.紅外光譜鑒定與權(quán)威的標準圖譜比較完全一致。⑺.質(zhì)譜鑒定不論是氣質(zhì)聯(lián)用還是液質(zhì)聯(lián)用，應(yīng)該與標準譜庫中相對應(yīng)的農(nóng)藥質(zhì)譜圖有較高的相似度或通過對裂解的離子碎片進行解析，裂解機理合理。3.來源與合法性制備和定值農(nóng)藥純品是一項耗時多、技術(shù)要求高的工作，只能由具有良好裝備、豐富經(jīng)驗的專業(yè)人員并且得到有關(guān)方面認可的實驗室來承擔。我國的農(nóng)藥標準物質(zhì)研究工作還滿足不了市場和實際工作的需求。目前的現(xiàn)狀，通常是由負責起草農(nóng)藥制劑標準的單位來提供農(nóng)藥純品，至于通過什么手段和程序來純化和定值，則沒有統(tǒng)一規(guī)定。因此，有必要確定農(nóng)藥標準物質(zhì)的純化和定值方法，提高分析結(jié)果準確性和可比性。在我國能夠提供農(nóng)藥標準物質(zhì)或純品的單位主要有國家標準物質(zhì)研究中心、農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所、沈陽化工研究院。另外一部分由農(nóng)藥研究機構(gòu)、大學、農(nóng)藥公司、化學試劑公司提供。國外能夠提供農(nóng)藥純品的主要是化學試劑公司如Sigma公司等。Chemservice公司()是專門經(jīng)營純品的一家機構(gòu)，該公司經(jīng)銷800多種農(nóng)藥純品和代謝物以及用于各種標準分析方法（EPA）的混合溶液。外國農(nóng)藥公司在中國境內(nèi)農(nóng)藥注冊登記，農(nóng)藥殘留試驗所用的純品通常由各公司提供。由國際權(quán)威部門或國家標準物質(zhì)研究中心提供的有證農(nóng)藥標準物質(zhì)是開展農(nóng)藥殘留分析的基礎(chǔ)。即使在沒有合法的農(nóng)藥標準物質(zhì)時，質(zhì)檢機構(gòu)也要通過必要的程序保證檢驗工作的合法性。凡來自非授權(quán)機構(gòu)生產(chǎn)經(jīng)銷的農(nóng)藥純品，只能用于自己的教學、科學研究、方法的建立等，而不能用于開展執(zhí)法性質(zhì)的農(nóng)殘檢測工作和在產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢驗項目的仲裁工作。4.標簽標簽是農(nóng)藥一級標準物質(zhì)、二級標準物質(zhì)乃至農(nóng)藥純品的合格證書，圖7-1為一張二級標準物質(zhì)的合格證書樣例。有證農(nóng)藥標準物質(zhì)的標簽格式和內(nèi)容應(yīng)符合國家有關(guān)規(guī)定和要求。5.包裝和貯藏大批量的農(nóng)藥標準物質(zhì)和純品應(yīng)該及時分裝，分裝后可避免二次污染。液體的樣品可以采用安培瓶分裝。固體農(nóng)藥包裝最好采用小體積的帶有合適內(nèi)蓋（通常有錫箔紙或聚四氟乙烯內(nèi)襯）和螺紋外帽，開啟后能重新蓋好的小玻璃瓶。玻璃瓶的容量一般為1mL、2mL、5mL和10mL。由于有些農(nóng)藥遇光分解，因此還應(yīng)有棕色玻璃瓶或用避光紙包裝。農(nóng)藥標準物質(zhì)或純品在貯存和運輸過程中應(yīng)避免光照或包裝不嚴與空氣接觸。一般貯于干燥器（最好充氮氣）內(nèi)，然后置于冰箱中（-18℃）。有些農(nóng)藥純品極易分解，有效期很短，如有機磷農(nóng)藥敵敵畏、氧樂果等，這類農(nóng)藥往往是現(xiàn)制備現(xiàn)用。對于穩(wěn)定性好的農(nóng)藥即使過了有效期，重新定值后還不失去使用價值。而且這種定值通常只需要檢測有效成份含量。應(yīng)該說明的是大多數(shù)農(nóng)藥在經(jīng)過高度純化后，會比在原藥及制劑形式下更為穩(wěn)定。新農(nóng)藥的純品穩(wěn)定性通常要經(jīng)過2年時間的考察。農(nóng)藥二級標準物質(zhì)合格證書中文通用名稱：__________________英文通用名稱：_____________________化學名稱（IUPAC）：CAS：______________結(jié)構(gòu)式：分子式：______________分子量：__________________批號：樣號：_______________質(zhì)量：_________________(mg)純度：______________________%（m/m）；________________________g/kg純化和定值方法（必要時附圖）：____________________________________用途：____________________注意事項：_____________________________貯藏：____________________有效日期：_____________________________研制生產(chǎn)單位（章）_______________________________________________鑒定人（簽名）：__________________，_____________________生產(chǎn)日期：________年_____月______日圖7-1農(nóng)藥二級標準物質(zhì)的合格證書樣例7.2.2農(nóng)藥純品常用的制備方法農(nóng)藥純品的制備實際是對有機化合物的分離和純化的過程。如果需要制備的是一級標準物質(zhì)則必須采用一種或多種制備方法進行高度純化。如果制備工作標樣，則可根據(jù)用途和分析測定方法來決定純化的步驟和程度。農(nóng)藥純品的制備需要原料（起始物質(zhì)）。原料可以是工業(yè)原藥（原粉或原油），純度至少90%以上。同時要對原藥進行挑選，如色澤、不同部位等。在實驗室內(nèi)進行合成，也是獲得高純度原料的一種方法。這種合成需要使用純化后的試劑及中間體，其原料純度應(yīng)達99%以上。易光解、熱解或穩(wěn)定性差的農(nóng)藥更適合于實驗室內(nèi)合成。下列純化技術(shù)方法可以單獨或聯(lián)合采用。1.重結(jié)晶法對于含少量雜質(zhì)的農(nóng)藥原粉，最有效的純化方法是選用適宜的溶劑進行重結(jié)晶，以分離除去雜質(zhì)。⑴.重結(jié)晶原理農(nóng)藥原藥在溶劑中的溶解度與溫度有密切關(guān)系。一般是溫度升高，溶解度增大。如果把原藥溶解在熱的溶劑中并達到飽和，那么冷卻時，由于溶解度降低，結(jié)晶析出。利用溶劑對樣品和雜質(zhì)的溶解度不同（樣品溶解度在室溫時比雜質(zhì)的溶解度小），使樣品從過飽和溶液中以結(jié)晶析出，而雜質(zhì)則留在溶液里，從而達到了分離的目的。⑵.重結(jié)晶溶劑的選擇采用重結(jié)晶提純農(nóng)藥能否成功，關(guān)鍵是選擇合適的重結(jié)晶溶劑。常用的重結(jié)晶溶劑見表7-2。表7-2常用的重結(jié)晶溶劑溶劑沸點（℃）冰點（℃）相對密度與水的混溶性易燃性水甲醇95%乙醇冰乙酸丙酮乙醚石油醚氯仿乙酸乙酯苯四氯化碳100.065.078.1117.956.234.530~6061.70＜0＜016.7＜0＜0＜0＜0＜05＜01.00.79140.8041.050.790.710.641.480.900.881.59√√√√√×××××××√√√×√√√√√√√√√√√×√√√√√√×注：×—表示不溶解，√—表示溶解的程度⑶.選用重結(jié)晶溶劑的原則①.不與被純化的農(nóng)藥發(fā)生化學反應(yīng)。②.高溫時能溶解較多農(nóng)藥，低溫時只能溶解少量的農(nóng)藥。③.對雜質(zhì)溶解度非常大（留在母液中），或溶解度非常?。ㄒ怨虘B(tài)存在，過濾掉）。④.本身容易揮發(fā)易與結(jié)晶分離除去。⑤.如果該溶劑符合上述條件，取決析出的晶型如何。在提純農(nóng)藥的過程中，如果不能選擇到一種合適的溶劑時，?？墒褂没旌先軇┇@得滿意效果。具體操作是：先將待純化的農(nóng)藥在接近溶劑（溶解度大）的沸點時溶解，若有不溶物，趁熱過濾，若有顏色，則用活性炭煮沸脫色后再趁熱過濾。然后在此熱濾液中小心地加入熱的不良溶劑（溶解度?。敝了尸F(xiàn)的渾濁不再消失，再加入少量良溶劑或稍加熱使之恰好澄清。最后，冷至室溫，析出結(jié)晶。有時也將兩種溶劑預(yù)先混合好。常用的混合溶劑如下：乙醇—水，乙醚—甲醇，醋酸—水，乙醚—丙酮，丙酮—水，乙醚—石油醚，吡啶—水，苯—石油醚。⑷.重結(jié)晶操作步驟選擇重結(jié)晶溶劑→加熱溶解→趁熱過濾→結(jié)晶析出→減壓抽濾→干燥①.加熱溶解回流根據(jù)溶解度，稱取適量的農(nóng)藥，加入回流瓶體積2/3的溶劑，脫色制備高溫飽和溶液。回流時間一般30min?；钚蕴考臃ㄓ袃煞N：一是回流時加入到溶劑和農(nóng)藥樣品一起回流；二是，待溶劑冷卻至沸點以下時加入攪拌?；钚蕴考尤肓繛?%~5%，太多對農(nóng)藥有吸附。必要時可兩次脫色。注意事項：防止溶劑著火和活性炭引起爆沸。②.趁熱過濾整個過程要迅速，防止結(jié)晶析出時操作無法進行，可采用保溫漏斗，往往也采用減壓抽濾，過濾后的溶液應(yīng)是澄清的。減壓抽濾要防止活性炭被抽入到濾液中。過濾可以使活性炭、不溶物（化學雜質(zhì)、機械雜質(zhì)）與高溫的飽和溶液分離。③.結(jié)晶將濾液靜置，使其慢慢冷卻。慢慢得到的晶體顆粒大而均勻，純度好，迅速冷卻并攪拌得到的晶體顆粒細而不均勻，純度差。對不易析出結(jié)晶的過飽和溶液，可采用玻璃棒摩擦容器內(nèi)壁或投入“晶種”的方法。通過結(jié)晶可得到農(nóng)藥純品和初純品。④.抽濾通常減壓抽濾，使用玻璃砂芯漏斗。洗滌晶體時，最好用重結(jié)晶溶劑（最好低溫貯藏），洗滌時應(yīng)先停止抽氣，再加洗滌溶劑，用玻璃棒小心攪拌，使所有晶體濕潤，靜置片刻，再抽氣。如果用沸點高的重結(jié)晶溶劑，改用低沸點溶劑沖洗，低沸點的溶劑必須與高沸點溶劑互溶，且對純化的農(nóng)藥溶解度低。抽濾的目的是結(jié)晶與溶液分離。⑤.干燥將晶體轉(zhuǎn)移到表面皿或合適的容器上。干燥可分為3種方法，自然干燥：放在實驗臺面上，讓溶劑自然揮發(fā)。但對在空氣中吸濕的樣品不能采取這種方法。烘干：對熱穩(wěn)定性好的農(nóng)藥，可在低于其熔點的溫度下于烘箱中或紅外線燈下烘干。真空干燥器中干燥，可加熱，可減壓，干燥徹底。干燥的目的是排除殘存的重結(jié)晶溶劑或某些揮發(fā)性雜質(zhì)。干燥后的樣品通常要研磨，貯存在合適的容器里或分裝。然后放置在避光低溫干燥場所。重結(jié)晶法適用于下列常用農(nóng)藥的純化：樂果、亞胺硫磷、甲基對硫磷、敵百蟲、克百威、甲霜靈、百菌清、2甲4氯、甲草胺、氟樂靈、溴氰菊酯、抗蚜威等。2.蒸餾法⑴.原理將液體農(nóng)藥加熱至沸騰，使液態(tài)變?yōu)闅鈶B(tài)，然后再使蒸汽冷卻凝結(jié)為液體進到另一容器中去，這樣兩個過程聯(lián)合操作稱為蒸餾。純的液體農(nóng)藥在一定壓力下有固定的沸點。如果在蒸餾過程中，沸點發(fā)生變動，就說明有雜質(zhì)流出。為了得到純的農(nóng)藥，就必須進行餾分截割。必須指出，具有固定沸點的液體不一定都是純的物質(zhì)，因為某些有機物常常和其它組分形成二元或三元共沸混合物，它們也有固定的沸點。大多數(shù)二元或三元共沸混合物，通常其共沸點要比任一單一組分的沸點都低。也有例外，如20%丙酮（56.2℃）和80%氯仿（61.2℃）混合，其混合液的沸點變成了64.7℃。液體的沸點隨壓力的不同而變化，所以分為常壓蒸餾和減壓蒸餾兩種，農(nóng)藥純品的制備采用減壓蒸餾（圖7-2）。圖7-2農(nóng)藥純品制備的減壓蒸餾裝置⑵.操作步驟和注意事項減壓蒸餾裝置主要由三部分組成,蒸餾、抽氣以及在它們之間的保護和測壓裝置。蒸餾部分由蒸餾瓶、冷凝器和接收瓶組成。蒸餾瓶采用兩個頸的克氏蒸餾瓶，一個頸插溫度計，另一個頸插一根毛細管，起到沸石防止暴沸的作用。其他為普通冷凝器和接收瓶。減壓裝置主要由真空泵、真空膠管、保護和測壓裝置組成。在保護系統(tǒng)中，要有安全瓶，主要用于調(diào)節(jié)系統(tǒng)壓力及放氣。封閉式壓力計用于測量系統(tǒng)中的實際壓力。三個吸收塔，第一個裝無水氯化鈣或硅膠用于吸水；第二個裝粒狀氫氧化鈉，用于吸酸；第三個裝石蠟片，可吸收烴類氣體。普通旋片式真空泵達不到工作壓力時，還應(yīng)串聯(lián)真空擴散泵。減壓蒸餾時，必須保證系統(tǒng)不漏氣，各接口要涂好真空脂，不要用普通膠管代替真空膠管。具體步驟：①.加料液體量不要超過克氏蒸餾瓶容積的一半，可防止暴沸或液體的飛沫被蒸汽帶走。蒸餾瓶要有2/3浸入到浴液中。②.減壓檢漏，調(diào)壓調(diào)整到需要的壓力，如敵敵畏，0.1Pa。減壓蒸餾，采用磁力加熱攪拌器是一種非常簡便，高效的方法。③.加熱100℃以下樣品采用水浴，100~250℃油?。ǜ视偷龋?，250℃以上砂浴。超過250℃時，不能采用玻璃蒸餾器。④.沸騰此時，溫度計指示急劇上升。⑤.蒸餾開始時既不要快也不能太慢，控制速度為每秒鐘1~2滴。接前餾分，注意觀察壓力和溫度的變化，當達到所需餾分沸點時，更換餾分瓶；當溫度超過所需餾分沸點時，停止蒸餾。減壓蒸餾法對在常壓下蒸餾易分解或遇熱易分解的樣品非常有效。一般要進行2~3次重蒸餾，才能達到要求。注意事項：溫度計水銀球的上限與蒸餾瓶支管下限在一水平面上，先攪拌、減壓、后升溫。減壓蒸餾法適用的農(nóng)藥品種：2,4-D丁酯、敵敵畏、稻瘟凈、禾草丹等，3.柱層析法柱層析法的特點是應(yīng)用范圍廣（固體、液體都適宜），操作簡便，分離效率高。⑴.基本原理：根據(jù)組分在固定相中的作用原理不同，柱層析可分為吸附層析、分配層析、離子交換層析和排阻層析。農(nóng)藥純化常用吸附層析和分配層析。吸附層析是根據(jù)固定相（吸附劑）對混合物中各組分的吸附能力不同來完成分離和純化的目的。比如我國用硅膠作固定相，當混合物的溶液流經(jīng)固定相時，混合物中各組分就被吸附在硅膠顆粒表面上。再用單一溶劑或混合溶劑作流動相通過該柱，由于硅膠對混合物中各組分的吸附性能不同，已被吸附在氧化鋁上的各組分就會以不同的速度解吸并重新回到溶劑中。隨著溶劑的向前移動，已解吸的各組份遇到新的吸附劑就又再一次以不等的吸附力被吸附，當新的流動相流過時，它們就又一次解吸進入流動相并向前移動。如此在層析柱上不斷地發(fā)生吸附、解吸、再吸附、再解吸，使混合物中各組分在吸附劑表面上表現(xiàn)出的吸附能力的微小差異經(jīng)多次重復(fù)積累而成為大的差異。結(jié)果吸附力小的組分先從柱中流出，吸附力大的組分后從柱中流出，從而達到分離的目的。分配層析與吸附層析的不同之處是混合物中各組分的分離是根據(jù)其在兩種不相溶或微溶的液體間溶解度的差異來實現(xiàn)的。吸附層析實質(zhì)屬于液—固色譜范疇，而分配層析屬于液—液色譜范疇。⑵.操作的基本步驟①.選擇層析柱（長度和口徑之比10:1為宜），堿式滴定管可當層析柱來使用。②.選擇吸附劑要求：a.不溶于使用的洗脫劑；b.不與洗脫劑和分離組分起化學反應(yīng)，也不起催化作用；c.無色，粒度均勻，細度合適。常用有硅膠、氧化鋁、弗羅里硅土等。一般分離極性大的物質(zhì)，選用吸附力小的吸附劑；分離極性小的物質(zhì)，應(yīng)選用吸附力強的吸附劑。③.填裝吸附劑要求均勻緊密一致干法和濕法兩種：干法不容易填裝均勻，濕法容易裝好層析柱，濕法是稱取適量的吸附劑，一般為分離樣品重量的50倍加入溶劑調(diào)和，調(diào)好后倒入柱中，使其慢慢沉降。④.選擇洗脫劑，可采用薄層色譜的方法選出理想的洗脫劑。選擇原則如下：a.分離極性大的農(nóng)藥，選用吸附能力較弱的吸附劑和極性較強的溶劑作洗脫劑。b.分離極性小的農(nóng)藥，宜選用吸附能力較強的吸附劑和極性較小的溶劑作洗脫劑。c.在單一溶劑作為洗脫劑不理想時，可加入一些極性更大或更小的溶劑來調(diào)節(jié)洗脫劑的極性，以達到最佳分離效果。⑤.洗柱除去柱中的殘留空氣，使柱更緊密均勻，保持柱頂不干。⑥.加樣待洗柱時的洗脫劑離柱填料平面1mm左右，加入待分離的組分。滴加洗脫劑，流速1滴/s，或1滴/4s。在操作過程中，防止柱頂端進入空氣，不要讓柱填料裸露在空氣中。⑦洗脫根據(jù)分離情況，切割收集各組分，進行鑒定，找到純度高的餾分，然后蒸餾干燥得到農(nóng)藥純品。柱層析適用于下列農(nóng)藥品種的純化：如殺草丹、丁草胺、2,4-D丁酯等。4.區(qū)熔提純法（區(qū)域熔融法）根據(jù)被提純農(nóng)藥中各組分在相變化中的重分布的原理，從而得到較純組分的提純方法。雜質(zhì)一般使純物質(zhì)的熔點降低，隨著熔區(qū)的移動，能使雜質(zhì)一起移動，而富集于一端，純物質(zhì)則向相反的方向移動而富集于另一端。該方法設(shè)備簡單，提純效率高，操作可自動化，應(yīng)用范圍廣。一般操作先臥式提六次，再立式提一次。本方法適用于六六六4種異構(gòu)體等農(nóng)藥的提純。5.升華法所謂升華就是指物質(zhì)不經(jīng)過液態(tài)而直接從固態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)闅鈶B(tài)的現(xiàn)象，這樣的農(nóng)藥必須具有相當高的蒸汽壓。升華法有常壓和減壓兩種方法。可以升華的農(nóng)藥品種有：硫磺、六六六、西力生、磷化鋁等。升華法在農(nóng)藥純品制備中應(yīng)用較少。6.色譜法常用的薄層色譜也可以制備農(nóng)藥純品，但獲得量僅為毫克級。利用制備色譜儀或半制備色譜儀純化農(nóng)藥，可獲得克級水平純品。該方法要求有大型設(shè)備，適于工業(yè)化、商品化生產(chǎn)。目前液相制備色譜儀應(yīng)用較多，缺點是分離后往往需要重新蒸餾。7.2.3農(nóng)藥純品常用的鑒定方法對于提純的農(nóng)藥純品樣品，還要經(jīng)過定性鑒定和定量分析，綜合考慮各種因素對測量結(jié)果的影響，確定該種農(nóng)藥純品的純度后才能應(yīng)用，若想成為農(nóng)藥標準物質(zhì)還必須符合有關(guān)程序要求，獲得授權(quán)，合法生產(chǎn)。農(nóng)藥純品的定性通常要采用三種不同的方法進行檢驗，方法中至少應(yīng)包括一種物理化學方法和一種色譜方法。定性檢驗的目的是明確農(nóng)藥在提純過程中是否發(fā)生了化學變化，或者純度能否達到一級標準物質(zhì)的要求。定性檢驗應(yīng)先于定量檢驗。清楚定性檢驗結(jié)果后，才能決定是否對被提純農(nóng)藥進行準確定值。農(nóng)藥純品的定值至關(guān)重要，對于一級標準物質(zhì)必須采用絕對測量方法，二級標準物質(zhì)可用一級標準物質(zhì)直接對比測量。農(nóng)藥純品的定值通常要采用二種不同原理的方法定值。常用的農(nóng)藥純品定性方法有：1.物理常數(shù)的測定采用的測定方法應(yīng)該是經(jīng)典的或國際、國家標準中承認的有效方法，不采用上述方法，所測數(shù)據(jù)則沒有可靠性、可比性。⑴.熔點測定對固體農(nóng)藥純品定性鑒定測定熔點是一種方便和可靠的方法。每種農(nóng)藥純品都有其固定的熔點（見表7-3）。對于純化好的農(nóng)藥，其熔程越窄說明純度越高，質(zhì)量越好。熔點100℃以下的農(nóng)藥通常熔程應(yīng)小于0.5℃。表7-310種農(nóng)藥純品的熔點農(nóng)藥名稱熔點（℃）農(nóng)藥名稱熔點（℃）丙體六六六樂果除草醚亞胺硫磷甲基對硫磷111.8~112.851~5270~7172.0~72.735~36莠去津甲草胺稻瘟靈芐嘧磺隆百菌清173~17539.5~41.550~51185~188250~251⑵.沸點的測定對液體農(nóng)藥可以通過測定其沸點定性。常壓測定時農(nóng)藥通常會分解。幾乎所有農(nóng)藥的沸點都是在減壓的情況下測定，因此實際測定不方便，常見農(nóng)藥的沸點見表7-4。表7-410種農(nóng)藥純品的沸點農(nóng)藥名稱沸點農(nóng)藥名稱沸點敵敵畏2,4-D丁酯禾草丹禾草特百菌清70℃/133Pa169℃/267Pa126~129℃/1.07Pa202℃/1333Pa350℃/101325Pa丁草胺殺蟲脒三氯殺螨醇異丙甲草胺倍硫磷156℃/66Pa163~165℃/18Pa100℃/13Pa100℃/0.1Pa87℃/1.33Pa沸程同農(nóng)藥的純度也有密切關(guān)系，一般沸程應(yīng)該在0.5~1℃。⑶.溶解度的測定各種農(nóng)藥純品在不同溶劑中的溶解度可從文獻中查出。溶解后的溶液應(yīng)該完全澄清。⑷.其它物理常數(shù)的測定農(nóng)藥純品的相對密度、折光系數(shù)、蒸汽壓等也是同樣重要的檢驗項目，所測值應(yīng)與文獻記載數(shù)據(jù)完全一致。2.光譜法定性⑴.紫外光譜法利用農(nóng)藥分子吸收紫外光的特性，對農(nóng)藥純品進行定性或結(jié)構(gòu)分析的方法。雖然紫外光譜圖提供的信息較簡單，但是也能夠反映出農(nóng)藥分子中是否存在雙鍵、芳烴、共軛體系，其中吸收曲線、最大吸收峰、摩爾吸光系數(shù)都是很重要的定性指標。農(nóng)藥紫外光譜圖庫較少，多散見在各種文獻中。所用的測定方法、溶劑對紫外吸收曲線有很大影響，產(chǎn)生藍移或紅移。⑵.紅外光譜法利用農(nóng)藥分子對紅外光吸收的特性，分析農(nóng)藥分子結(jié)構(gòu)的一種方法。能夠快速測定農(nóng)藥分子的骨架和官能團。有標準的紅外光譜圖庫供檢索，提純后的農(nóng)藥紅外光譜圖應(yīng)與標準譜圖一致。無雜峰出現(xiàn)。⑶.核磁共振波譜法通過測定原子核在磁場中及電磁波照射下的共振信號，作出核磁共振圖譜，用以分析鑒定農(nóng)藥分子的組成和結(jié)構(gòu)的方法。通常能精確地測定農(nóng)藥分子的微細結(jié)構(gòu)。特別適合于光學異構(gòu)體結(jié)構(gòu)鑒定。3.色譜法定性色譜法定性的依據(jù)是Rf值、相對保留時間、相對保留指數(shù)。要求農(nóng)藥純品與農(nóng)藥標準物質(zhì)的相對保留值應(yīng)一致或在允許范圍內(nèi)。色譜法的另一優(yōu)點還可以篩分農(nóng)藥純品中的雜質(zhì)。⑴.薄層色譜法該方法為經(jīng)典的方法，文獻量較大，易于查找和應(yīng)用。通常選用合適的吸附劑和顯色條件后，采用二種展開劑展開，應(yīng)顯現(xiàn)出單一斑點，原點無殘存物。在條件一致的情況下，農(nóng)藥的Rf值是定性的重要依據(jù)。⑵.氣相色譜方法氣相色譜法適合于大多數(shù)農(nóng)藥品種的定性分析。要求用兩種不同極性色譜柱，農(nóng)藥純品與標準物質(zhì)的相對（絕對）保留時間一致或在允許范圍內(nèi)。頂空氣相色譜法適用于殘存在農(nóng)藥純品中溶劑的定量分析。⑶.液相色譜法對熱穩(wěn)定性差、極性較強的農(nóng)藥非常適用，是氣相色譜法的重要補充。要求用兩種不同的流動相，農(nóng)藥純品與標準物質(zhì)的相對（絕對）保留時間一致或在允許范圍內(nèi)。⑷.質(zhì)譜法現(xiàn)多采用氣質(zhì)或液質(zhì)聯(lián)用的分析方法。一次分析即可通過總離子流圖獲得農(nóng)藥純品及其所含雜質(zhì)的種類和面積歸一化的信息。色質(zhì)聯(lián)用定性不僅僅是根據(jù)相對保留時間，更重要的可以獲得農(nóng)藥純品的分子量，特征離子碎片。不同的農(nóng)藥在慢電子轟擊下裂解的離子碎片有其特征性。常用農(nóng)藥純品定值的方法有：4.絕對測量法⑴.差示掃描量熱法（DSC）屬于一種熱量分析技術(shù)。該方法是在程序控制溫度下，測量輸出物質(zhì)與參比物的功率差與溫度關(guān)系的一種技術(shù)。當試樣發(fā)生任何物理或化學變化時，所釋放或吸收的熱量使樣品溫度高于或低于參比物的溫度，從而相應(yīng)地在差熱曲線上可得到放熱或吸熱峰。差示掃描量熱法具有快速、精確，試樣用量少的優(yōu)點，可測定農(nóng)藥的絕對純度。DSC測定純度是根據(jù)熔點或凝固點下降來確定雜質(zhì)含量的，基本原理依據(jù)Van'tHoff方程。⑵.相溶解度分析法原理是當一種農(nóng)藥純品在某一種溶劑中飽和時，其雜質(zhì)不會飽和，根據(jù)其溶解雜質(zhì)增量的變化，計算出農(nóng)藥純品中雜質(zhì)含量的方法。相溶解度法要求測量儀器精確可靠，能夠重現(xiàn)。⑶.容量分析法可采用經(jīng)典的化學容量滴定分析方法，如銀量法、碘量法對農(nóng)藥純品定值，但是這種方法應(yīng)用有很大的局限性，它要求被測定農(nóng)藥要有特征的、無副反應(yīng)的化學反應(yīng)。5.相對測量法⑴.氣相色譜法目前廣泛應(yīng)用的定值方法之一，快速簡便，面積歸一法假設(shè)的前提是檢測器對各組分的響應(yīng)因子均為1，但實際情況可能是檢測器對有些雜質(zhì)沒響應(yīng)或響應(yīng)因子不等于1，對定值結(jié)果的準確性有一定影響。這種影響可通過其他定值方法加以校正。⑵.高效液相色譜法對于一種農(nóng)藥純品的面積歸一化定值，如果在紫外檢測器有響應(yīng)，最好在采用氣相色譜法面積歸一定值后，再采用高效液相色譜法定值，綜合考慮給出該農(nóng)藥純品的純度值。⑶.元素分析法各種農(nóng)藥純品依據(jù)其分子式，可計算出各種元素所占的比例，依此來分析判斷該種農(nóng)藥的純度。如除草醚的分子式為C12H7Cl2NO3，其中Cl占24.96%，N占4.93%，H占2.48%，C占50.73%。6.純度值的統(tǒng)計分析與給定農(nóng)藥純品在均勻性檢驗（包括瓶間、瓶內(nèi)測定）的基礎(chǔ)上，應(yīng)給出純度值。對一種農(nóng)藥純品通常要采用3種以上的測定方法定值，每種方法測得5~8個值。對于一級標準物質(zhì)至少有20個以上測定值。這些數(shù)據(jù)可參考有關(guān)文獻進行統(tǒng)計分析。綜合考慮各個影響定值的因素，給出每次測定的總平均值。在有些情況下，定值也采用從100%中減去雜質(zhì)的做法，如減去水分、灰分、溶劑、酸度等雜質(zhì)，然后給出最終的純度值。7.2.4農(nóng)藥純品制備和鑒定的實例在常溫下，大多數(shù)農(nóng)藥以固態(tài)或液態(tài)兩種形式存在，現(xiàn)以抗蚜威、敵敵畏兩種殺蟲劑為例，具體介紹農(nóng)藥純品制備和鑒定的方法。1.抗蚜威（pirimicarb）化學名稱：2-N,N-二甲基氨基-5,6-二甲基嘧啶-4-N,N-二甲基氨基甲酸酯（CASNo.23103-98-2）。結(jié)構(gòu)式：分子式：C11H18N4O2分子量：238.2理化性質(zhì)：純品為無色無味結(jié)晶體，熔點90.5℃，30℃時蒸汽壓為4×10-3Pa，25℃水中溶解度0.27g/100mL，溶于大多數(shù)有機溶劑，易溶于醇、酮、酯、芳烴、氯代烷烴。在一般條件下比較穩(wěn)定，但遇到強酸或強堿，或在酸堿中煮沸則分解，水溶液見光易分解，無腐蝕性。⑴.提純①.方法提要：樣品用活性炭脫色后，在異丙醇中重結(jié)晶。②.試劑：抗蚜威原藥，石油醚（60~90℃），活性炭（分析純），異丙醇。③.儀器：燒杯、攪拌器、布氏抽濾裝置、濾紙、錐形瓶、結(jié)晶皿、電熱板、烘箱、研缽。④.操作步驟：用足夠量的石油醚制備抗蚜威原藥的懸浮液，在室溫下攪拌5min后，布氏漏斗抽濾，棄掉石油醚。將布氏漏斗中的固體物轉(zhuǎn)移至燒杯中，加入少量異丙醇，保持電熱板的溫度，使溶液不超過65℃，制備抗蚜威熱飽和溶液。以2g/100mL的量加入脫色活性炭，加入活性炭時要防止爆沸。邊加入邊攪拌，在65℃條件下攪拌10min，然后趁熱過濾，將濾液轉(zhuǎn)入錐形瓶中，室溫下放置過夜。用玻璃砂芯漏斗過濾結(jié)晶，（必要時再重結(jié)晶一次，但不加活性炭）將結(jié)晶體轉(zhuǎn)移放在結(jié)晶皿內(nèi)，于65℃烘箱內(nèi)徹底干燥。將干燥后的結(jié)晶置于研缽內(nèi)研磨成均勻的粉末，貯存在密閉的玻璃瓶中。⑵.鑒定定性①.熔點：采用CIPACMT2方法測定?？寡镣p.90.5℃。②.薄層色譜基本測定條件可參見CIPACMT164。用下列條件檢驗純品中的雜質(zhì)。硅膠GF254，板厚0.25mm，展開劑：二氯甲烷:丙酮=90:10（V/V），點樣量：10%的抗蚜威三氯甲烷溶液，10L和50L兩個點。Rf值：0.54，顯色為UV254nm。在硅膠板上50L點樣量應(yīng)顯示單一斑點，并且原點不顯示出殘留物。如可觀察到雜質(zhì)應(yīng)繼續(xù)重結(jié)晶。③.抗蚜威的紅外光譜圖④.抗蚜威質(zhì)譜圖(EI)定量①.溶劑含量采用氣相色譜法，測定殘存的異丙醇。色譜柱：玻璃填充柱1.8m×4mm內(nèi)徑，內(nèi)裝10%SE30/ChromosorbW-HP125m~149m(100~120目)；檢測器：FID；溫度：柱溫：80℃（2min）230℃；氣化室：220℃；檢測室：250℃；進樣：采用SGE固體進樣器。正式分析樣品前，先進一針空氣，驗證有無干擾峰的存在。然后取適量的固體樣品進樣，用面積歸一化法確定溶劑所占的百分含量。②.灰分含量測定用5g的樣品，按照CIPAC1AMT29的方法測定。③.水分含量的測定用1g的樣品，按照CIPAC1AMT30.1的方法測定。④.采用毛細管氣相色譜法測定純度：色譜柱：12m長，涂OV-73；檢測器：FID；溫度：柱箱：60℃（1min）125℃（5min）270℃；氣化室：250℃；檢測室：300℃；氣體流速：載氣：H22mL/min(125℃)；尾吹氣：N22mL/min(125℃)；燃氣：氫氣30mL/min(125℃)；助燃氣：空氣450mL/min；吹掃氣：N24mL/min；不分流；進樣量：1L（進樣濃度為55mg/25mL正已烷）?？鄢粽淹樯V峰面積值，用面積歸一化法計算抗蚜威的含量。至少要稱4~8個樣本，進樣分析，符合要求后計算出平均值，減去溶劑含量、灰分含量、水分含量后即為抗蚜威純品純度值。2.敵敵畏（dichlorvos）化學名稱：O,O-二甲基-O-（2,2-二氯乙烯基）磷酸酯（CASNo.62-73-7）結(jié)構(gòu)式：分子式：C4H7Cl2O4P分子量：220.98理化性質(zhì)：純品為無色油狀液體，略帶芳香氣味。揮發(fā)性強。沸點74℃（133Pa），蒸汽壓1.60Pa(20℃)，相對密度1.4(20℃)，揮發(fā)度145.0mg/m3(20℃)，折光系數(shù)1.45。在室溫下水中的溶解度為1g/100mL，易溶于大多數(shù)有機溶劑。對熱穩(wěn)定。在酸性介質(zhì)和水中緩慢分解，在堿性條件下迅速降解。對鐵有一定的腐蝕性。⑴.提純①.方法提要：將敵敵畏原油在以乙二醇做固定相、耐火磚為載體的色譜柱進行分離，進一步純化采用減壓蒸餾的方法。②.試劑：敵敵畏原油、乙二醇（分析純）、石油醚（30~60℃，分析純）、四氯化碳（分析純）、二乙醚（分析純）、無水硫酸鈉、耐火磚250m~355m（40~60目）：先用蒸餾水徹底地洗干凈，然后用丙酮清洗，過濾待溶劑揮發(fā)后，在105℃條件下干燥，用分級篩截取250m~355m粒度的耐火磚材料。③.儀器：厚壁玻璃管色譜柱，規(guī)格2.5m×50mm、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、100mL餾分收集器、抽氣泵：適合于石油醚四氯化碳混合溶劑（3:2，V/V），壓力為100KPa，排氣量為6L/hr、減壓蒸餾裝置：0.1Pa，70℃條件下工作，蒸餾瓶（100mL），具有10cm長的維格羅分餾柱，20cm長的冷凝器，尾端裝有3分頭的餾分收集器。圖7-3液相色譜制備裝置④.操作步驟：向裝入2.5kg的耐火磚聚乙烯（大約厚0.1mm）袋中加入2.5kg的乙二醇，反復(fù)顛倒混合均勻。每次取50g填料裝入色譜柱中，輕輕地填實。倒入石油醚四氯甲烷混合液（用乙二醇飽和）5.5L排除柱中的氣體，然后用合適的進樣環(huán)在柱頂部加入80mL敵敵畏原油（見圖7-3）。以6L/hr的流速用石油醚四氯甲烷混合溶劑淋洗色譜柱，放棄前2L淋洗液，用100mL分餾瓶，收集后6L淋洗液用氣相色譜法測定這些餾分，通常只有在25~55號餾分瓶中有敵敵畏。用旋轉(zhuǎn)濃縮器蒸掉淋洗液，用400mL二乙醚溶解剩余溶液，先后2次各用300mL水清洗二乙醚層，然后用旋轉(zhuǎn)濃縮器濃縮掉二乙醚。減壓蒸餾敵敵畏，收集0.1Pa（55℃~60℃）條件下無色液體。收率可達50%。⑵.鑒定定性.敵敵畏紅外光譜圖.敵敵畏質(zhì)譜圖(EI)③.薄層色譜硅膠GF254板，紫外光254nm顯色，展開劑：二氯甲烷:丙酮=4:1（V/V）。點樣濃度為100g/L丙酮溶液，點樣5L，展開后應(yīng)為單點。定量①.水分含量按照CIPACMT30.1方法測定，含水量<0.02%(m/m)。②.酸度含量測定按照CIPACMT31方法，含量以H2SO4計，<0.02%(m/m)。③.氣相色譜歸一化法色譜柱：柱長1.5m×4mm內(nèi)徑，內(nèi)裝3%Reoplex100/GaschromQ74m~149m(100~200目)；檢測器：FID；柱箱溫度：100℃（2min）200℃；載氣：N260mL/min；進樣量：0.1L敵敵畏純品；保留時間：約12min。用面積歸一化法計算敵敵畏的含量。至少要稱4~8個樣本進樣分析，符合要求后計算出平均值，減去水分，酸度含量即為敵敵畏純品的純度值。7.3殘留分析方法可靠性的確認農(nóng)藥殘留分析方法直接決定殘留分析結(jié)果的真實程度。所以應(yīng)盡可能采用國際或國家認可的標準方法，但在很多情況下，殘留分析實驗室使用非標準方法也可以保證方法的可靠性（credibility）。無論何種方法，對其可靠性的確認（validation）有以下要素：7.3.1方法的靈敏度分析方法的靈敏度(sensitivity)是指該方法對單位濃度或單位質(zhì)量的待測物質(zhì)的變化所引起的響應(yīng)量變化的程度，它可以用儀器的響應(yīng)量或其他指示量與對應(yīng)的待測物質(zhì)的濃度或量之比來描述，因此常用標準曲線的斜率來度量靈敏度。靈敏度因?qū)嶒灄l件而變。在農(nóng)藥殘留分析中，方法的靈敏度常用檢測限（LOD,limitofdetection）或定量限（LOQ,limitofquantification）表示。檢測限指由基質(zhì)空白所產(chǎn)生的儀器背景信號的3倍值的相應(yīng)量；或者以基質(zhì)空白產(chǎn)生的背景信號平均值加上3倍的均數(shù)標準差。均以分析物質(zhì)的濃度表示，單位μg/kg或mg/kg。定量限指由基質(zhì)空白所產(chǎn)生的儀器背景信號的10倍值的相應(yīng)量；或者以基質(zhì)空白產(chǎn)生背景信號平均值加上10倍的均數(shù)標準差。均以分析物質(zhì)的濃度表示，單位μg/kg或mg/kg。方法的靈敏度應(yīng)該至少比該農(nóng)藥在指定的該作物上的最大殘留限量低一個數(shù)量級。當樣品中檢測不出分析物質(zhì)時，用“<LOD”表示，同時應(yīng)指出方法的靈敏度。7.3.2方法的準確度準確度(accuracy)是用一個特定的分析程序所獲得的分析結(jié)果（單次測定值和重復(fù)測定值的均值）與假定的真值之間符合程度的度量。它是反映分析方法或測定系統(tǒng)存在的系統(tǒng)誤差和隨機誤差兩者的綜合指標。準確度用絕對誤差和相對誤差表示。評價準確度的方法大多數(shù)情況下是用加標回收率來表征，即在樣品中加入標準物質(zhì)，測定其回收率，以確定準確度，多次回收試驗還可發(fā)現(xiàn)方法的系統(tǒng)誤差，這是目前常用而方便的方法，其計算式是：………………（7………………（7.1）添加標準物質(zhì)的量應(yīng)與待測樣品中存在的分析物質(zhì)濃度范圍相接近。一般設(shè)高、中、低3個濃度梯度，最高濃度不應(yīng)超過標準曲線的線性范圍。最低濃度也可按最低定量限（LOQ）設(shè)。每個濃度的樣品重復(fù)數(shù)視要求而定，一般在3~12之間。加標和未加標試樣分析期間必須相同處理以免出現(xiàn)試驗偏差。7.3.3方法的精密度精密度（precision）是指用一特定的分析程序在受控條件下重復(fù)分析均一樣品所得測定值的一致程度，它反映分析方法或測量系統(tǒng)所存在隨機誤差的大小。極差、平均偏差、相對平均偏差、標準偏差和相對標準偏差都可用來表示精密度大小，較常用的是標準偏差。在討論精密度時，經(jīng)常要遇到如下一些術(shù)語：1.平行性平行性系指在同一實驗室中，當分析人員、分析設(shè)備和分析時間都相同時，用同一分析方法對同一樣品進行雙份或多份平行樣測定結(jié)果之間的符合程度。2.重復(fù)性重復(fù)性系指在同一實驗室內(nèi)，當分析人員、分析設(shè)備和分析時間三因素中至少有一項不相同時，用同一分析方法對同一樣品進行的兩次或兩次以上獨立測定結(jié)果之間的符合程度。3.再現(xiàn)性再現(xiàn)性系指在不同實驗室（分析人員、分析設(shè)備、甚至分析時間都不相同），用同一分析方法對同一樣品進行多次測定結(jié)果之間的符合程度。方法精密度用變異系數(shù)（C.V.）表示?！?.2………………（7.2）根據(jù)Horwity方法，實驗室內(nèi)和實驗室間分析方法的變異系數(shù)范圍如表7-5。表7-5殘留分析方法的實驗室間和實驗室內(nèi)變異系數(shù)分析濃度C.V（%）實驗室間實驗室內(nèi)10mg/kg1171mg/kg1611100g/kg231510g/kg32211g/kg45300.1g/kg64437.3.4方法的專一性專一性（specificity）指分析方法實際測定分析物質(zhì)而不受雜質(zhì)化合物干擾的能力。一般通過分析溶劑空白和樣品基質(zhì)空白來評價，以選擇性系數(shù)來表征。選擇性（selectivity）表示分析方法區(qū)別特性相近成份的能力，可表示為方法對樣品中分析對象組分與其他組分（干擾雜質(zhì)）靈敏度之比。若以△Ct表示分析對象組分濃度變化，△CI表示干擾組分濃度變化，設(shè)由此二者變化引起輸出信號相等時，可規(guī)定選擇性系數(shù)為：……………（7.3……………（7.3）假定對象組分濃度變化△Ct=1%時，輸出信號為5mV；干擾組分濃度變化△CI=50%時，輸出信號才為5mV，則：………（7………（7.4）也就是說該方法對于分析對象組分的靈敏度較干擾組分的靈敏度大50倍。一般在k=0.001時，即可認為樣品中的干擾組分影響可忽略不計。如果樣品中除對象組分外無干擾組分影響測定，則該方法是專一性的。一般在標準分析方法中應(yīng)列舉出影響測定專一性的干擾物質(zhì)和去除干擾的方法。農(nóng)藥殘留分析中的樣品制備過程就是去除測定干擾物的過程。7.3.5校準曲線校準曲線（calibrationcurve）是表達被分析物質(zhì)不同濃度與測定儀器響應(yīng)值之間的線性定量關(guān)系的曲線。農(nóng)藥殘留分析的校準曲線通常以標準溶液的不同系列濃度（最少應(yīng)有5個點）為橫座標、所得到的響應(yīng)值為縱座標，連接各點得到相應(yīng)的曲線，也稱標準曲線。一般以最小二乘法處理數(shù)據(jù)，得出線性方程y=ax+b。該直線方程中的斜率a（回歸系數(shù)）和截距b可按下式計算：…………………（7.5…………………（7.5）…………………（7…………………（7.6）對線性的相關(guān)系數(shù)r可按下式計算：…（7…（7.7）要求線性相關(guān)系數(shù)不得小于0.9995。7.4農(nóng)藥殘留分析重要環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制根據(jù)歐盟農(nóng)藥殘留監(jiān)測指南對農(nóng)藥殘留分析質(zhì)量控制的要求，對殘留分析的一些關(guān)鍵環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制是尤其重要的。7.4.1樣品運輸及貯存樣品必須放置在潔凈、牢固的容器或包裝中運至實驗室；樣品在運輸、貯存和在實驗室處理時必須相互分離，并避免和任何潛在的污染物接觸；分析易揮發(fā)的或熏蒸劑的殘留樣品必須用低通透性的袋子包裝（如尼龍薄膜）；新鮮易碎易腐的樣品（如草莓）應(yīng)冰凍防止腐敗，以干冰或類似方式運輸并防止融化；會受冷凍損壞的樣品（如香蕉）須防止過高、過低的溫度。樣品要迅速運送到實驗室，新鮮樣品最好在一天之內(nèi)運到。實驗室對所有樣品的分析都應(yīng)近可能在最短時間內(nèi)完成，測定不穩(wěn)定的或揮發(fā)性的農(nóng)藥殘留時，應(yīng)在樣品到達當天就立即開始。當不穩(wěn)定的殘留農(nóng)藥易損失時，樣品可以在冰凍條件下（如干冰存在下）粉碎。實驗室對樣品的加工處理和貯存過程應(yīng)能證明對樣品中的殘留農(nóng)藥沒有明顯影響。7.4.2農(nóng)藥純品與標準溶液配制1.每種農(nóng)藥純品應(yīng)明確標出接受日期和有效期，在有效期過后，如果其純度仍可接受，則可以保留純品并確定一個新的有效期限。新的和舊的純品的相對純度可以通過比較其新配溶液在檢測器中的響應(yīng)來確定。每次新進的純品都應(yīng)對其特性進行檢查。純品應(yīng)按供應(yīng)商的指導(dǎo)進行貯存，一般是放置于干燥器內(nèi)貯存在黑暗低溫條件下，容器須密封以防止水份進入。貯存期間應(yīng)使降解最小化。2.配制標準溶液配制標準溶液和工作標準溶液須按照以下要求進行：⑴.分析純品包括內(nèi)標物不可與配制溶劑存在任何反應(yīng)，要有適當溶解性，所用溶劑必須適合分析方法且與測定系統(tǒng)共容。每次配制稱取純品量不應(yīng)少于5-10mg，如果純品為揮發(fā)性液體應(yīng)以重量或體積直接溶入溶劑。⑵.配制的標準溶液應(yīng)注明有效期，超過有效期的標準溶液一般應(yīng)棄去。新配制的標準溶液要與將要棄置的溶液測試比較，如果新溶液測定均值與舊溶液均值的差異＞±5%，則要更新配制的溶液，與測試的新溶液進行測試比較來檢查其準確性。如果擬棄置的舊標準溶液測定中產(chǎn)生的響應(yīng)小于或等于新配制溶液響應(yīng)的95%，則標準溶液貯存的時間應(yīng)縮短，或者貯存條件應(yīng)改善。如果新、舊標準溶液的響應(yīng)沒有顯著差異，則可考慮更長貯存時間。⑶.標準溶液要避免光照；要密封以避免溶劑揮發(fā)和進入水分；貯存在黑暗低溫下的冰箱或冷凍箱內(nèi)；從低溫貯存下取出的溶液在室溫下平衡后，用前要搖勻。如果在低溫下的溶解性有限，則標準溶液從低溫下取出后一定要極為小心使其完全溶解。7.4.3防止實驗室污染和干擾農(nóng)藥殘留實驗室內(nèi)或附近嚴禁使用任何農(nóng)藥；殘留分析所用玻璃容、量器要避免使用劣質(zhì)和刻蝕的器皿，所有器皿必須徹底清洗潔凈（應(yīng)盡可能分別以固定的器皿用于標準溶液和樣品提取，以避免交叉污染）；儀器、容器、溶劑（包括水）、試劑、過濾器材等均應(yīng)檢查可能的干擾源。注意橡膠、塑料器皿以及潤滑劑等都是經(jīng)常的干擾源。來自樣品天然成分的干擾物如果與農(nóng)藥殘留的響應(yīng)重疊，則應(yīng)采用另外不同的凈化或檢測系統(tǒng)。7.4.4減少提取和濃縮過程的殘留農(nóng)藥損失提取時樣品應(yīng)徹底粉碎以得到最大的提取效率，溫度、pH等參數(shù)如果影響提取效率則要加以適當控制。提取液濃縮蒸發(fā)時溶劑不可全干，因為很多痕量物質(zhì)在此時損失很大。為避免這種情況，可以加少量高沸點溶劑作為“保護劑”。濃縮中溫度要盡可能低，避免提取液沸騰起泡或液滴濺散。小體積的提取液濃縮一般用N2流或真空減壓蒸發(fā)而不用空氣流，因為空氣會造成氧化反應(yīng)或引入水分和其它污染物。在對殘留分析方法進行生效試驗時，要研究提取液中農(nóng)藥殘留的穩(wěn)定性。7.4.5回收率測定與校準1.回收率測定⑴.進行樣品的殘留分析時，每一批樣品測定都應(yīng)做所有分析農(nóng)藥的回收率測定。但如果在多殘留分析中，測定量太大，進行回收率測定的最低要求是：每一批樣品測定中，選擇幾種代表性農(nóng)藥進行回收率測定，每次回收測定的添加回收濃度≥2個水平（包括LCL），在回收率測定的滾動計劃中，每種農(nóng)藥都應(yīng)進行一次回收率測定。當一種農(nóng)藥殘留包含幾種成分且都有MRL規(guī)定時，只要可能，所有殘留成分都應(yīng)作常規(guī)回收率測定。但當這些成分是相同的分子時，常規(guī)回收可以只測定主要殘留成分或只測回收率最低的成分。.回收率的添加量應(yīng)在LCL或MRL1-10倍的范圍，也可以針對相應(yīng)分析樣品的殘留濃度為添加量。添加濃度可以有規(guī)律地間歇性地變化，以了解整個添加濃度范圍內(nèi)的分析效率。在LCL或MRL水平的回收率特別重要。添加空白測定時，如果得不到完全空白的試樣，則添加濃度應(yīng)是空白試樣所存在的本底濃度≥5倍，此本底濃度應(yīng)從多個樣份中重復(fù)測定確定。⑶.回收效率的可接受性①.常規(guī)回收率在60%~140%范圍內(nèi)都是可以接受的，當常規(guī)回收率不可接受地低時，該批樣品要重新分析；但是當回收率雖低，但精確度很好，低于60%的回收率也可接受，但應(yīng)盡可能改用更準確的方法。當回收率不可接受地高，樣品中又未測出殘留時，就不必對該批樣品重新分析來確證有無殘留存在。但要研究過高回收率的原因。如果回收率略微超過60%~140%的范圍，該批樣品的測定結(jié)果可以考慮為半定量的。但如果回收率顯著超出這個范圍，則該批殘留數(shù)據(jù)沒有價值。②.超過MRL的殘留數(shù)據(jù)回收率必須在70%~110%范圍內(nèi)，如果達不到這一范圍的回收率，執(zhí)法行動不受影響，但要考慮準確性較差的因素。③.回收率測定并不證明分析結(jié)果的所有準確性和精確性。殘留分析實驗室必須定期參加有關(guān)的熟練性測試，測試中準確性有問題或不可接受時，應(yīng)研究問題的原因并作糾正后，才可以作進一步的分析工作。2.校準⑴.每一批殘留分析樣品都必須進行校準，但如果多殘留分析時校準測定數(shù)量太大，可以選擇代表性的農(nóng)藥（也稱做參照農(nóng)藥）在每一批分析時校準，但被代表的所有其他農(nóng)藥至少每6個月都應(yīng)該在滾動計劃中分析一次，每次校準要求≥2個濃度水平（包括LCL）。必須小心地選擇代表性的農(nóng)藥，選擇應(yīng)按照所有分析農(nóng)藥能從分析的樣品中檢出的原則；這些農(nóng)藥可能有最差、最多變化的響應(yīng)和/或回收率。當樣品中檢測到一種農(nóng)藥殘留時，必須對該樣品再進行一次分析，同時進行檢出農(nóng)藥的校準和回收，在該農(nóng)藥殘留量接近或超出MRL時更必須如此。如果被代表的農(nóng)藥在滾動計劃的回收或校準分析中產(chǎn)生不可接受的結(jié)果，則該農(nóng)藥此前成功回收或校準之后產(chǎn)生的所有結(jié)果都必須作為假陰性處理。⑵.在最低校準水平（LCL,Lowestcalibratedlevel）之下的殘留報告時表示為＜LCL，如果必須對此殘留定量，則必須確定更低的LCL并對樣品重新測定。當校準測定應(yīng)用3個以上濃度水平時，可以計算合適的校準函數(shù)繪成校準曲線，但如果個別點偏離校準曲線大于±20%（在接近或超過MRL值時大于±10%）則需要用更好的校準函數(shù)，或者重新進行測定。在2個濃度水平進行內(nèi)插法校準也是可以接受的，但每個濃度水平重復(fù)之間的較高響應(yīng)因子不可大于較低響應(yīng)因子的120%（在MRL左右時為110%）。如果檢測器響應(yīng)隨時間變化，用單濃度水平校準比多濃度水平校準更準確時，如果大于MRL值，樣品響應(yīng)應(yīng)在校準標準響應(yīng)的±10%以內(nèi)，如未超過MRL，樣品響應(yīng)則應(yīng)在校準標準響應(yīng)的±50%以內(nèi)。當提取液中含高濃度水平的殘留時，應(yīng)稀釋至校準范圍內(nèi)測定。⑶.一批測定的樣品數(shù)量調(diào)節(jié)，按照在線性范圍內(nèi)校準標準溶液的檢測器響應(yīng)漂移，在≥2倍LCL時不大于30%；在接近或超過MRL值時，則分別為不大于10%和15%。當漂移超過這些值時，如果樣品中明顯不含有殘留，且整批樣品測定LCL響應(yīng)均保持可以測定狀態(tài)，則樣品不必重復(fù)測定。但是當結(jié)果為陽性或測定回收率時，則必須在可接受的漂移范圍內(nèi)設(shè)置重復(fù)數(shù)來進行定量測定。7.5殘留分析結(jié)果的表達與數(shù)據(jù)處理7.5.1殘留分析結(jié)果的記錄和取舍1.有效數(shù)字為了得到準確的測定結(jié)果，不僅要確切地反映測量的精確程度，而且要準確記錄和計算。記錄的數(shù)字不僅表示數(shù)量的大小，而且還反映測量的精確程度。例如，在配制殘留分析標準溶液時，用感量為萬分之一克的分析天平稱取某農(nóng)藥的質(zhì)量為0.5180克，它不僅表明該農(nóng)藥標準品的具體質(zhì)量，也表示最后一位數(shù)字“0”是可疑的，即其實際質(zhì)量在0.5180±0.0001克范圍內(nèi)的某一數(shù)值，此時稱量的絕對誤差為±0.0001克，相對誤差為：如果將稱量結(jié)果寫成0.518克，則該農(nóng)藥標準品的實際質(zhì)量將為0.518±0.001克范圍內(nèi)的某一數(shù)值，其絕對誤差為±0.001克，相當于感量為千分之一的工業(yè)天平的精度，而相對誤差為：可見，記錄時多寫一位或少寫一位數(shù)字，從數(shù)學角度看關(guān)系不大，而從分析化學角度看，記錄所反映的測量精確度無形中被夸大或縮小了10倍。所以在數(shù)據(jù)中代表一定量的每一個數(shù)字都是重要的，這種數(shù)字稱為“有效數(shù)字”。在殘留量測定過程中，往往要經(jīng)過幾個不同的測量環(huán)節(jié)。如樣品的稱量、溶液的定容、待測溶液的量取和測定結(jié)果的報出等，由于各個操作環(huán)節(jié)的測量工具各異，精度也不甚一致，這些數(shù)據(jù)的準確程度不一定完全相等，確定該用幾位數(shù)字來表達測量或計算的結(jié)果非常重要。有人認為在一個數(shù)值中小數(shù)點后面的位數(shù)愈多，這個數(shù)字愈準確，或在計算結(jié)果中，保留的位數(shù)愈多，準確度便大，這兩種理解都是片面的。第一種理解的缺陷，在于沒有弄清小數(shù)點的位置不是決定準確度的標準，小數(shù)點的位置僅與所用的計量單位有關(guān)。例如，記某殘留分析試液體積為21.3，與0.0213mL的準確度完全相同；記質(zhì)量0.0025mg與2.5g的準確度亦相同。第二種理解的缺陷，在于不了解所有測量值，由于儀器和感官的局限性，只能作到一定的準確度。這個準確度一方面決定于所用儀器刻度的精密程度或靈敏程度，另一方面也與分析者所用的方法有關(guān)。因此，在計算結(jié)果中，無論寫多少位數(shù)，絕不能把準確度增加到超過測量能力所及的允許范圍。反之，表示一個數(shù)字時，書寫位數(shù)過少，低于測量所能達到的精度，同樣是不合理的。正確的寫法，所給出的數(shù)字的位數(shù)，除末位數(shù)字為可疑或不確定外，其余各位數(shù)都應(yīng)該是確切知道的。在運算精度不相等的數(shù)值時，首先應(yīng)確定有效數(shù)的位數(shù)。其中數(shù)字“0”，它可以是有效數(shù)，也可以不是有效數(shù)。數(shù)字前的“0”不是有效位數(shù)，數(shù)字后的“0”表示有效數(shù)位數(shù)。例如，從微量注射器上讀取25.03和感量為萬分之一的天平稱量1.2004g這二個數(shù)據(jù)中，所有的“0”均為有效數(shù)；而在殘留量0.0032mg/kg中的“0”則為非有效數(shù)字，它只與所用單位有關(guān)，而與測量精度無關(guān)，若改用g/kg，則原數(shù)中兩個“0”全消失，變成3.2g/kg，所以0.0032mg/kg有效數(shù)只有二位，其中“0”是無效數(shù)。3.4×102，2.15×103，這類數(shù)據(jù)寫法所表示的有效數(shù)位數(shù)，可按10n以前的數(shù)字確定，則應(yīng)分別為二、三位。3.4×102是二位有效數(shù)字，表示340中的“4”是可變動的，其可能范圍在330-350之間，若把3.4×102改寫成340，則為三位有效數(shù)，表示數(shù)值在339-341之間變動的可能。在數(shù)據(jù)處理中還經(jīng)常遇到一些乘子（如倍數(shù)或分數(shù)關(guān)系等）。例如，將含農(nóng)藥殘留的50.0g土壤樣品，經(jīng)處理后得定容試液5.00mL，從中吸取20.00，即吸出20/5000，相當于樣品量的1/250，這里的1、20、250、5000表示自然數(shù)，并非測得值，沒有不定數(shù)字，屬于無限多位有效數(shù)字，需要幾位就可以幾位。常數(shù)π、e等數(shù)值的有效數(shù)位數(shù)，亦可認為是無限制的。2.有效數(shù)字運算法則在農(nóng)藥殘留量的測定中，由各操作環(huán)節(jié)得到的測量值，其有效數(shù)字的位數(shù)通常不相等，必須按一定規(guī)則進行計算，否則，任意取舍有效數(shù)字，會影響計算的準確性。有效數(shù)字的計算通常遵循以下原則：⑴.記錄測量數(shù)值時，只保留一位可疑數(shù)字，除非另有規(guī)定外，可疑數(shù)字表示末位上有±1個單位或其下一位有±5個單位的誤差。如感量為萬分之一克的分析天平，感量為百分之一克的扭力天平和感量為十分之一克的臺式天平，稱量時必須分別記錄到小數(shù)點以后四位、二位和一位；滴定管、移液管、刻度定容試管、微量注射器等，可以記讀到小數(shù)以后第二位。例如，微量注射器中面正好在15刻度線上，則應(yīng)記錄為15.00。⑵.當有效數(shù)位數(shù)確定后，其余數(shù)字應(yīng)一律棄去。整數(shù)中多余數(shù)字舍去后用0代替，其它各數(shù)舍棄的辦法，一般按四舍五入或四舍六入五留雙的方法。前者是當尾數(shù)≤4時棄去，≥5時進位；后者是當尾數(shù)≤4時棄去，≥6時進位，當尾數(shù)為5時，如進位后得偶數(shù)則進位，棄去后得偶數(shù)則棄去。例如，將2.604、2.605、2.615分別處理成三位有效數(shù)字，用四舍五入方法分別得2.60、2.61、2.