大豆苷元及其衍生物對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響

大豆苷元及其衍生物對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響

這是大豆生長(zhǎng)過程中形成的第二層代謝產(chǎn)物。這是大豆的一個(gè)重要生理活性物質(zhì)。大豆苷元具有抗腫瘤、抗氧化、抗炎等多項(xiàng)功能雖然大豆苷元具有諸多生物學(xué)功效,但是大豆苷元水溶性差,生物利用度低,難以達(dá)到理想的效果。因此,以大豆苷元為先導(dǎo)化合物,利用藥動(dòng)團(tuán)變換原理對(duì)其進(jìn)行修飾,能夠從根本上改善其溶解性和代謝穩(wěn)定性,對(duì)于增強(qiáng)其活性具有重要的意義近年來(lái),大豆苷元的抗腫瘤效應(yīng)受到廣泛關(guān)注本研究探索大豆苷元及其3種苯磺酸酯衍生物的抗腫瘤作用效應(yīng),通過分析大豆苷元及其3種衍生物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡的效用,初步確定大豆苷元及其3種苯磺酸酯衍生物的作用濃度和作用時(shí)間,探索大豆苷元及苯磺酸酯類衍生物抗腫瘤作用與常見的凋亡通路基因的表達(dá)差異,為進(jìn)一步深入探索大豆苷元抗腫瘤的具體作用機(jī)制提供理論參考。1材料和方法1.1材料表面1.1.1胎牛血清及胰酶-edta消化液大豆苷元(陜西慧科植物開發(fā)有限公司,純度>98%);DMEM高糖培養(yǎng)基(美國(guó)Hyclone公司);胎牛血清(天津?yàn)笊镏破房萍加邢薰?;0.25%胰酶-EDTA消化液(北京索萊寶科技有限公司);CCK-8試劑盒(江蘇凱基生物技術(shù)有限公司);紅色熒光Tunel細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(江蘇凱基生物技術(shù)有限公司);PCR試劑盒(北京全式金生物)。1.1.2細(xì)胞培養(yǎng)和對(duì)接人非小細(xì)胞肺癌A549、H1299細(xì)胞和肺正常細(xì)胞HELF細(xì)胞株由武漢大學(xué)提供,培養(yǎng)液選擇含10%胎牛血清、1%青鏈霉素的DMEM高糖培養(yǎng)基,培養(yǎng)于含5%CO1.1.3儀器CO1.2方法1.2.1大豆苷元苯磺酸酯衍生物b大豆苷元苯磺酸酯衍生物由本實(shí)驗(yàn)室合成本研究利用大豆苷元和3種苯磺酸酯衍生物作為處理因素,分別為大豆苷元苯磺酸酯衍生物A(大豆苷元-4′,7-二苯磺酸酯)、大豆苷元苯磺酸酯衍生物B(大豆苷元-4′-羥基-7-苯磺酸酯)、大豆苷元苯磺酸酯衍生物C(大豆苷元-4′-乙酰氧基-7-苯磺酸酯)(圖1)。以下簡(jiǎn)稱為衍生物A(DDA)、衍生物B(DDB)和衍生物C(DDC)。1.2.2細(xì)胞培養(yǎng)用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化A549、H1299、HELF細(xì)胞,用DMEM高糖培養(yǎng)基制備單細(xì)胞懸液,以1×101.3測(cè)量設(shè)計(jì)和方法1.3.1細(xì)胞活力的測(cè)定分別以101.3.2大豆苷元對(duì)細(xì)胞死亡的影響收集對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的1.3.3細(xì)胞培養(yǎng)的養(yǎng)成劑將3種細(xì)胞培養(yǎng)于含10μ1.3.4肺癌中的幾種利用1.4生存分析方法應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果以均數(shù)[95%CI]表示,多組間比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析、單因素方差分析和q檢驗(yàn),與對(duì)照組比較采用Dunnett檢驗(yàn),生存分析采用Kaplan-Meier和Log-rank檢驗(yàn)法。以2結(jié)果與分析2.1科學(xué)家和衍生物對(duì)細(xì)胞活力的影響2.1.1不同濃度的大豆苷元濃度和時(shí)間處理對(duì)三種細(xì)胞的活力有影響在1×102.1.2不同濃度的誘導(dǎo)和時(shí)間處理對(duì)三種細(xì)胞的活力的影響衍生物A對(duì)HELF的活力促進(jìn)較強(qiáng),平均每增加10倍濃度時(shí),活力增強(qiáng)9.15%[4.65,13.65](2.1.3不同濃度的誘導(dǎo)b濃度和時(shí)間處理對(duì)三種細(xì)胞的活力的影響每增加10倍濃度的衍生物B,HELF細(xì)胞的活力增強(qiáng)9.92%[7.49,12.35](2.1.4衍生物b對(duì)a549和s1299細(xì)胞增力抑制作用的影響衍生物C濃度平均每增加10倍,HELF細(xì)胞活力增強(qiáng)4.82%[4.46,5.19](由以上試驗(yàn)結(jié)果顯示,相比大豆苷元,衍生物B對(duì)A549和H1299細(xì)胞增力抑制作用更明顯。合成的大豆苷元苯磺酸酯衍生物B的水溶性改變后,其仍對(duì)肺正常細(xì)胞有增殖促進(jìn)作用、對(duì)肺癌細(xì)胞有增殖抑制作用。2.2大豆苷元苯磺酸酯b活性對(duì)三種細(xì)胞的克隆和死亡的影響加入10μ2.3酶b至p53死亡在衍生物和3衍生物b對(duì)細(xì)胞凋亡作用的影響相關(guān)研究表明:大豆異黃酮的攝入能夠預(yù)防乳腺癌、胃癌、結(jié)直腸癌的發(fā)病大豆異黃酮能夠抑制乳腺癌和結(jié)直腸癌的增殖并促進(jìn)其凋亡P53凋亡通路與大豆苷元對(duì)非小型肺癌細(xì)胞和正常肺細(xì)胞的抑制增殖活性和促進(jìn)凋亡作用有關(guān)聯(lián),其中綜上所述,本項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)大豆苷元及其3種衍生物能夠降低非小型細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549和H1299細(xì)胞的增殖活性,并促進(jìn)肺正常細(xì)胞HELF細(xì)胞的增殖活性,衍生物B能夠促進(jìn)肺癌細(xì)胞的凋亡和抑制肺正常細(xì)胞凋亡。結(jié)合TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析,對(duì)可能涉及的基因表達(dá)進(jìn)行研究,將為進(jìn)一步的研究提供理論依據(jù)。此項(xiàng)研究中大豆苷元苯磺酸酯衍生物對(duì)肺癌細(xì)胞的作用雖未達(dá)到成藥濃度,但是該研究可以對(duì)肺癌人群膳食指導(dǎo)以及后期針對(duì)大豆苷元的苯磺酸衍生物的保健品開發(fā)提供理論基礎(chǔ)。后續(xù)將結(jié)合動(dòng)物試驗(yàn)和人群流行病學(xué)的數(shù)據(jù)進(jìn)一步驗(yàn)證其作用效應(yīng),同時(shí)探討其效應(yīng)的分子學(xué)機(jī)制。4大豆苷元衍生物b對(duì)不同病理細(xì)胞增殖的影響(1)大豆苷元及其3種衍生物能夠促進(jìn)肺正常HELF細(xì)胞的增殖,抑制非小細(xì)胞肺癌A549和H1299細(xì)胞的增殖,