保健食品安全性毒理

第六章 保健食品安全性毒理學(xué)與功能學(xué)評價爭論學(xué)習(xí)目的把握保食品安全評價根本方法:握保健食品功能評價方法及一盤要求;熱保使食晶安全性與功訴價的一般要求;了保食品安全性與功能評價的相技術(shù)規(guī)范。學(xué)習(xí)要點保健食品毒理學(xué)評價原則、試驗階段與試驗原、試內(nèi)容與結(jié)果判定原則;保食品功能評價方法的一般要求。第一節(jié)保健食品安全性毒理學(xué)與功能學(xué)評價一般要求功能.應(yīng)當(dāng)具有科學(xué)依據(jù)，不得對人體產(chǎn)生急性、亞急性或者慢性危害。這是對保健食品的方面考慮:D保健食品所使用的原料應(yīng)當(dāng)能夠保證對人體安康安全無害，符合國家標(biāo)準(zhǔn)和安全要求:②國家規(guī)定不行用于保鍵食品的原料和輔料、制止使用的物品等不得作為保健食品的原料和輔料③依法注冊的保健食品，注冊時應(yīng)當(dāng)提交保健食品的研發(fā)報告、安全性和保健功能評價等材料及樣品，并供給相關(guān)證明文件;依法備案的保健食品，備案時應(yīng)當(dāng)提交表明產(chǎn)品安全性和保健功能材料。在本章中將介紹與保健食品安全性相關(guān)的保健食品原料要求、保健食品安全性評價方法的成效評價原則及方法。保健食品的衛(wèi)生評價則與一般食品相像，這里不再贅述。全性和具備相應(yīng)保健功能應(yīng)當(dāng)?shù)竭_(dá)的最低和最高限量原料名目，保健食品原料名目中不僅規(guī)定了原料名稱，還規(guī)定了原料的用量和對應(yīng)的成效。其他食品生產(chǎn)。其次節(jié)保健食品安全性毒理學(xué)評價方法概述(一)保健食品毒理學(xué)評價原則(食品安全性毒理學(xué)評價程序和方法》進(jìn)展、主要評價食品生產(chǎn)、加工、貯藏、運輸和銷售過程中使用的化學(xué)和生物物質(zhì)以及在這些過程中產(chǎn)生和污染的有害物質(zhì)第一、三階段的理學(xué)試驗，必要時進(jìn)展三、四階段的毒理學(xué)試驗。(二)受試物要求以單一化學(xué)成分為原料的受試物、應(yīng)供給受試物(必要時包括其雜質(zhì))的物理、化學(xué)性質(zhì)(包括化學(xué)構(gòu)造、純度、穩(wěn)定性等)。含有多種原料的配方產(chǎn)品，應(yīng)供給受試物的配方，必要時應(yīng)供給受試物各組成成分，特別是成效成分或代表性成分的物理、化學(xué)性質(zhì)(包括化學(xué)名稱、構(gòu)造、純度、穩(wěn)定性、溶解度等)及檢測報告等有關(guān)資料。供給原料來源、生產(chǎn)工藝、人的可能攝入量、使用說明書等有關(guān)資料。受試物應(yīng)是符合既定配方和生產(chǎn)工藝的規(guī)格化產(chǎn)品，必需是在保健食品CMP認(rèn)證車間生產(chǎn)的中試規(guī)模以上的樣品，其組成成分、比例及純度應(yīng)與實際產(chǎn)品一樣。(三)受試物處理要求對保健食品檢驗進(jìn)展試驗時應(yīng)針對試驗特點和受試物的理化性質(zhì)進(jìn)展相應(yīng)的樣品處理。分之間不發(fā)生化學(xué)反響，且保持其穩(wěn)定性。一般可選用蒸餾水、食用植物油、淀粉、明膠、按甲基纖維素等材料。劑量時，往往會超過動物的最大灌留劑量或超過攝入句料中的限量(10％w/w)，此時可允許去除既無成效又無安全間題的軸料局部(如淀粉、糊精等)后進(jìn)展試驗。。如產(chǎn)品無特別推舉飲用方法，可承受以下提取條件進(jìn)展:常壓度80-90℃，浸泡時間30分鐘，水量為受試物重量的10倍以上，提取2次，將提取液合并濃縮至所需濃度，并標(biāo)明該濃縮液與原料的比例關(guān)系。選擇適宜的受試物賜予方法(灌胃或摻入詞料。液體保健食品需要承受濃縮處理時，應(yīng)承受不破壞其中有效成分的方法，如使用溫度60-70℃，減壓或常壓蒸發(fā)濃縮、冷凍枯燥等方法。含乙醇保健食品處理當(dāng)保健食品的推舉量較大時，在按其推舉劑量設(shè)計試驗時，如該劑量15％(VV)恢復(fù)至受試物定型產(chǎn)品原來的濃度。乙醇濃度高于15％的受試物，濃縮后應(yīng)將乙醇濃度調(diào)整至151515Ames受試物的乙醇濃度時，原則上應(yīng)使用該保健食品的酒基。含有人體必需養(yǎng)分素等物質(zhì)保健食品處理如產(chǎn)品配方中含有某一具有明量毒性的人體必需養(yǎng)分素(維生素A、硒，等)，在按其推舉量設(shè)計試驗劑量時，如該物質(zhì)的劑量到達(dá)毒作用劑量，在原有劑量設(shè)計的根底上，應(yīng)考慮增設(shè)去除該物質(zhì)或降低該物質(zhì)劑量(如降至最大未觀看到有害作用劑量，NOAEL)的受試物劑量組，以便對保健食品中其他成分的毒性作用及該物質(zhì)與其他成分的聯(lián)合毒性作用做出評價。益生菌等微生物類保健食品處理益生菌類或其他微生物類等保健食品在進(jìn)展Ames試驗或體外細(xì)胞試驗時，應(yīng)將微生物滅活后進(jìn)展。以雞蛋等食物為載體的特別保健食品處理在進(jìn)展喂養(yǎng)試驗時，允許將其參與飼料，并按動物的養(yǎng)分需要調(diào)整飼料配方后進(jìn)展試驗。二，保健食品安全性毒理學(xué)評價試驗階段與試驗原則毒理學(xué)評價，是對保健食品進(jìn)展功能學(xué)評價的前提。保健食品或其成效成分，首先必需(或)藥食兩用品作原料的保健食品，可以不做毒理學(xué)試驗。(一)四個試驗階段第一階段:急性毒性試驗，包括經(jīng)口急性毒性(LD2)試驗，聯(lián)合急性毒性試驗次最大耐受量試驗。其次階段:遺傳毒性試驗、傳統(tǒng)致時試驗、短期喂養(yǎng)試驗。結(jié)合的原則。1./(Ames試驗)為首選，其次考慮選用V79/HGPRT基因突變試驗，必要時可另選其他試驗2.骨細(xì)胞微核試驗或乳動物骨細(xì)胞染色體變試驗TK基因突變試驗小鼠精子畸形分析或睪丸染色體畸形分析;其他備選遺傳試驗 顯性致死試驗，果蠅伴性隱性致死試驗，非程序性DNA合成試驗6.60天喂養(yǎng)試驗。第三階段:亞慢性毒性試驗(90天喂養(yǎng)試驗)生殖試驗和代謝試驗第四階段:慢性毒性試驗(包括致癌試驗(二)試驗原則保健食品特別是成效成分的毒理學(xué)評價可參照以下原則進(jìn)展:以一般食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源物質(zhì)以及允許用作保健食品的物質(zhì)以外的動植物或產(chǎn)的保健食品原則上須進(jìn)展第一、二階段的毒性試驗，必要時進(jìn)展下一階段的毒性試驗。(1)國內(nèi)外均無食用歷史的原料或成分作為保健食品原料時，應(yīng)對該原料或成分進(jìn)展四個階段的毒性試驗2)第一、三階段的毒性試驗，必要時進(jìn)展第四階段毒性試驗。主要包括以下兩種狀況及較大數(shù)量人群有長期食用歷史而未覺察有害作用的動植物及生物等第一、二階段的毒性試驗，經(jīng)初步評價后，打算是否需要進(jìn)展下一階段的毒性試驗。單位又有資料證明我國產(chǎn)品的質(zhì)量規(guī)格與國外產(chǎn)品的結(jié)果全都性試驗，否則應(yīng)進(jìn)展第三階段毒性試驗。(3)在國外多個國家廣泛食用的原料，在供給安全性評價資料的根底上，進(jìn)展第一，二階段毒性試驗，依據(jù)試驗結(jié)果打算是否進(jìn)展下一階段毒性試驗。以衛(wèi)生部規(guī)定允許用于保健食品的動植物或動植物提取物或微生物(一般食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源物質(zhì)除外)(Ame試驗或V79HGPT基因突變試驗，骨髓細(xì)胞微核試驗或哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗，TK基因突變試驗或小鼠精子形分析或丸染色體時變試驗中選擇)和30天喂養(yǎng)試驗，必要時進(jìn)展傳統(tǒng)致畸試驗和第三階段毒性試驗。試驗內(nèi)容:(1)以傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)且使用方式與傳統(tǒng)使用方式一樣的保健食品，一般不要求進(jìn)展毒性試驗。(2)以水提取配制生產(chǎn)的保健食品，如服用量為原料的常規(guī)用量.且有關(guān)資料未提示其具有不安全性的.一般不要求進(jìn)展毒性試驗。如服用量大于常規(guī)用量時，需進(jìn)展急性毒性試驗、三30天喂養(yǎng)試驗，必要時進(jìn)展傳統(tǒng)致試驗。(3)用水提以外的其他常用工藝生產(chǎn)的保健食品，如服用量為原料的常規(guī)用量時，應(yīng)進(jìn)展急性毒性試驗、三項致突變試驗。如服用量大于原料的常規(guī)用量時，需增加30天製養(yǎng)試驗，必要時進(jìn)展傳統(tǒng)致試驗和第三階段毒性試驗。料來源、生產(chǎn)工藝和產(chǎn)品質(zhì)量均符合國家有關(guān)要求，一般不要求進(jìn)展毒性試驗。針對不同食用人群和(或)不同功能的保健食品，必要時應(yīng)針對性地增加敏感指標(biāo)及敏感試驗。三，保健食品安全性毒理學(xué)評價試驗?zāi)康呐c試驗內(nèi)容毒理學(xué)爭論需要試驗動物來進(jìn)展各種實臉-反響關(guān)系、毒作用機(jī)制等方面的資料，有關(guān)試驗內(nèi)容見文所述。1.急性毒性試驗通過測定獲得1D(半致死劑量)，了解受試物的毒性強(qiáng)度、性質(zhì)和可能的鈀器官.LD50進(jìn)展毒性分級。試驗內(nèi)容:口急性毒性(LD50)試驗、聯(lián)合急性毒性試驗。遺傳毒性試驗、傳統(tǒng)致畸試驗、短期喂養(yǎng)試驗(1)遺傳毒性試驗:對受試物的遺傳毒性以及是否具有潛在致癌作用進(jìn)展篩選。(2)傳致畸試驗:了解受試物對胎仔是否其有致畸作用。(3)短期喂養(yǎng)試驗:對只需進(jìn)展第一、二階段毒性試驗的受試物，在急性毒性試驗的根底上，通過短期(30天眼養(yǎng)試驗)進(jìn)一步了解其毒性作用，并可初步估量最大無作用劑量。試驗內(nèi)容:(1)細(xì)菌致突變試驗:鼠傷寒沙門菌哺乳動物微粒體酶試驗(Ames試驗)為首選工程，必要時可另選和加選其他試驗。2)小鼠骨髓微核率測定或骨髓細(xì)胞染色體畸變分析。(3)小鼠精子畸形分析和丸染色體畸變分析。亞設(shè)性毒性試驗(90天喂養(yǎng)試驗、生殖試驗和代謝試驗觀看受試物以不同劑量水平經(jīng)較長期喂養(yǎng)后對動物的毒性作用性質(zhì)和把器官，并初步確定最大作用劑量:了解受試物對動物繁以了解受試物在體內(nèi)的吸取、分布和排泄連度以及蓄積性，查找可能的器官;為選擇慢性毒性試驗的適宜動物種系供給依據(jù);了解有無毒性代謝產(chǎn)物的形成。慢性毒性試驗(包括致癌試驗)了解經(jīng)長期接觸受試物后消滅的毒性作用尤其是進(jìn)展性或不行逆的毒性作用以及致癌作用:最終確定最大無作用劑量和致癌的可能性，為受試物能否應(yīng)用于保健食品的最終評價供給依據(jù)。四、保健食品安全性毒理學(xué)試驗結(jié)果判定(一)急性毒性試驗如LD50100倍，則放棄該受試物用于保健食品，不再繼其他毒理學(xué)試驗。如LD。大于或等于100倍者，可考慮進(jìn)入下一階段毒理學(xué)試驗。如動物未消滅死亡的劑量大于或等于10g/kgBW(蓋人體推舉量的100倍).則可進(jìn)人下一階段毒理學(xué)動物末消滅死亡、也可進(jìn)入下一階段毒理學(xué)試驗(二)遺傳毒性試驗及體細(xì)胞和生殖細(xì)胞的原則，在鼠傷寒沙門菌/乳動物磁粒體酶試驗(Ame試驗)、小鼠骨髓擇四項試驗，依據(jù)以下原則對結(jié)果進(jìn)展推斷。如其中三項致突変試驗(Ames試驗或V79GPRT基因突變試驗，骨髓細(xì)胞微核試驗或哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變試驗，TK基因突變試驗或小鼠精子畸形分析或察丸染色體畸變試驗中選擇)試驗為陽性，則表示該受試物很可能具有遺傳毒性作用和致癌作用，一般應(yīng)放連續(xù)進(jìn)展下一步的毒性試驗。棄該受試物用于食品;如短期喂養(yǎng)試驗顯示有可疑的毒性作用，則經(jīng)初步評價后，依據(jù)受試物的重要性和可能振入量等，綜合權(quán)衡利弊再作出打算。V79HGPRT基因突變試驗、顯性致死試驗果蠅伴性隱性致死試驗，程序外DNA修復(fù)合成(UDS)試驗中的兩項遺傳毒性試驗。如再選的兩項試驗物用于食品;如有一項為陽性，而在短期喂養(yǎng)試驗和傳統(tǒng)致府試驗中未見有明顯毒性與致畸(三)短期養(yǎng)試驗對只要求進(jìn)展第一、二階段証理學(xué)試驗的受試物，假設(shè)30天喂養(yǎng)試驗的最大未觀看到有害作用劑量大于或等于人的可能攝入量的100價?？沙醪阶龀霭踩栽u價。假設(shè)最小觀看到有害作用劑量小于或等于人的可能攝入量的100小劑量組其受試物在飼料中的比例小于或等于10％，且劑量又小于或等于人的可能攝入量的100100合分析后，打算受試物可否用于保健食品或進(jìn)入下一階段毒性試驗(四)傳統(tǒng)致時試驗、90天喂養(yǎng)試驗、生殖試驗1.LDs或30天喂養(yǎng)試驗的最大未觀看到有害作用劑量設(shè)計的受試物各劑量觀看到有胚胎毒性作用，則應(yīng)進(jìn)展進(jìn)一步的生殖試驗2.90觀看到有害作用劑量大于人的可能攝入量的100作用劑量小于或等于人的可能攝人量的100料中的比例小于或等于10100倍，原則上應(yīng)放棄該受試物用于保健食品。用劑量進(jìn)展評價的原則是:最大未觀看到有害作用劑量小于或等于人的可能攝入量的100倍者表示毒性較強(qiáng)，應(yīng)放棄該受試物用于保健食品。100300倍者，應(yīng)進(jìn)展慢性毒性試驗。(3)大于300倍者則不必進(jìn)展慢性毒性試驗，可進(jìn)展安全性評價。(五)慢性毒性(包括致)試驗依據(jù)慢性毒性試驗所得的最大無作用劑量進(jìn)展評價，其原則是:最大末觀看到有害作用劑量小于或等于人的可能攝入量的50倍者，表示毒性較強(qiáng)，應(yīng)放棄該受試物用于保健食品。50倍而小于100倍者，經(jīng)安全性評價后，打算該受試物可否用于保健食品。最大未觀看到有害作用劑量大于或等于100倍者，則可考慮允許使用于保健食品。依據(jù)致癌試驗所得的腫瘤發(fā)生率、埋伏期和多發(fā)性等進(jìn)展致癌試驗判定的原則是:凡符合以下狀況之一，并經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有顯著性差異者，可認(rèn)為致癌試驗結(jié)果陽性。假設(shè)存在劑量反響關(guān)系，則推斷陽性更牢靠腫瘤只發(fā)生在試驗組動物，比照組中無腫瘤發(fā)生。試驗組與比照組動物均發(fā)生腫瘤，但試驗組發(fā)生率高。試驗組動物中多發(fā)性腫瘤明顯，比照組中無多發(fā)性腫瘤，或只是少數(shù)動物有多發(fā)性腫試驗組與比照組動物腳瘤發(fā)生率雖無明顯差異，但試驗組中發(fā)生時間較早。(六)受試物添加劑劑量假設(shè)受試物接入飼料的最大量或液體受試物經(jīng)濃縮后仍達(dá)不到最大未觀看到有害作用劑量為價。五、保健食品安全性毒理學(xué)評價需考點因素型、時間-毒性效應(yīng)、安全系數(shù)、動物等因素。試驗指標(biāo)的統(tǒng)計學(xué)意義和生物學(xué)意義在分析試驗組與比照組指標(biāo)統(tǒng)計學(xué)上差異的顯著的原則等來綜合考慮指標(biāo)差異有無生物學(xué)意義高，即使在統(tǒng)計學(xué)上與比照組比較差異無顯著性，仍要給以關(guān)注生理作用與毒性作用對試驗中某些指標(biāo)的特別轉(zhuǎn)變，在結(jié)果分析評價時要留意區(qū)分是生理學(xué)表現(xiàn)還是受試物的毒性作用。時間-毒性效應(yīng)關(guān)系對由受試物引起的毒性效應(yīng)進(jìn)展分析評價時，要考慮在同一劑量水平下毒性效應(yīng)隨時間的變化狀況。特別人群和敏感人群對孕婦、乳母或兒童食用的保健食品，應(yīng)特別留意其胚胎毒性或生殖發(fā)育毒性、神經(jīng)毒性和免疫毒性。生物利用率，從而導(dǎo)致某些毒理學(xué)表現(xiàn)，而非受試物的毒性作用所致。分是乙醇本身還是其他成分的作用。動物年齡對試驗結(jié)果的影響對某些功能類型的保健食品進(jìn)展安全性評價時，對試驗中消滅的某些指標(biāo)的特別轉(zhuǎn)變，要考慮是否由于動物年齡選擇不當(dāng)所致而非受試物的毒性作用，由于幼年動物和老年動物可能對受試物更為敏感。安全系數(shù) 將動物毒性試驗結(jié)果外推到人時，鑒于動物、人的種屬和個體之間的生物學(xué)差異安全系數(shù)通常為100，但可依據(jù)受試物的原料來源理化性質(zhì)菲性大小代謝特點、蓄積性接觸的人群范圍食品中的使用量和人的可能攝入量使用范圍及功能等因素來綜合考其安全系數(shù)的大小。人體資料 由于存在著動物與人之間的種屬差異，在評價保健食品的安全經(jīng)時，應(yīng)盡可能收集人群食用受試物后反響的資料;必要時在確保安全的前提下，可遵照有關(guān)規(guī)定進(jìn)展人體試食試驗志愿受試者體內(nèi)的代謝資料對于將動物試驗結(jié)果推論到人具有重要意義在確保安全的條件下，可以考慮依據(jù)有關(guān)規(guī)定進(jìn)展必要的人體試食試驗。綜合評價 在對保健食品進(jìn)展最終評價時，必需綜合考慮受試物的原料來源、理化性質(zhì)、毒性大小、代謝特點、蓄積性接觸的人群范、食品中的使用量與使用范圍、人的可能攝入量及保健功能等因素確保其對人體安康的安全性對于已在食品中應(yīng)用了相當(dāng)長時間的物質(zhì)對接觸人群進(jìn)展流行病學(xué)調(diào)查具有重大意義但往往難以獲得劑量一反響關(guān)系方面的牢靠資料;對于的受試物質(zhì)，則只能依靠動物試驗和其他試驗爭論資料。然而，即使有了完整和詳盡的動物試驗資料和一局部人類接者的流行病學(xué)爭論資料由于人類的種族和個體差異也很難做出保證每個人都安全的評價即確定的安全實際上是不存在的依據(jù)試驗資料，進(jìn)展最終評價時，應(yīng)全面權(quán)衡做出結(jié)論。1.食品安全性毒理學(xué)評價應(yīng)由國家認(rèn)定的保健食品安全性毒理學(xué)檢驗機(jī)構(gòu)擔(dān)當(dāng)安全性評價的依據(jù)不僅是科學(xué)試驗的結(jié)果，與當(dāng)時的科學(xué)水平、技術(shù)條件以及社會因素均親熱有關(guān)。因此，隨著時間的推移，很可能結(jié)論也不同。隨著狀況的不斷轉(zhuǎn)變，科學(xué)技術(shù)第三節(jié)保健食品功能學(xué)評價的根本要求對保健食品進(jìn)展功能學(xué)評價是保健食品科學(xué)爭論的核心內(nèi)容理成效進(jìn)展動物學(xué)甚至是人體試驗。本節(jié)中述評價保健食品的統(tǒng)一程序和試規(guī)程一，保健食品功能學(xué)評價的動物試驗規(guī)程一)對受試樣品要求〔穩(wěn)定性等)有關(guān)資料。受試樣品必需是規(guī)格化的定型產(chǎn)品，必需是在保健食品GMP認(rèn)證車間生產(chǎn)的中試規(guī)以上的樣品，符合既定的配方、生產(chǎn)工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。的樣品必需為同一批次(安全性毒理學(xué)評價和功能學(xué)評價試驗周期超過受試樣品保質(zhì)期的除外)。就供給成效成分或特征成分、養(yǎng)分成分的名稱及含量。測報告。(二)對試驗動物要求1.依據(jù)各項試驗的具體要求，合理選擇試驗動物。常用大鼠和小鼠，品系不限，推舉使用近交系動物。2，動物的性別、年依試驗需要進(jìn)展選擇。試驗動物的數(shù)量要求為小鼠每組10-15只(單一性別)8-12只(單一性別)3.動物應(yīng)符合國家對試驗動物的有關(guān)規(guī)定。(三)對給受試樣品劑量準(zhǔn)時間要求3個劑量組，另設(shè)陰性比照組，必要時可設(shè)陽性比照組或空白比照3個劑量組中，其中一個劑量應(yīng)相當(dāng)于人體推舉攝入量(折算為每公斤體重的劑量)5倍(大鼠)10倍(體推舉攝入量的30倍(特別狀況除外)，受試樣品的功能試驗劑量必需在毒理學(xué)評價確定的安全劑量范圍之內(nèi)。給受試樣品的時間應(yīng)依據(jù)具體試驗而定，