開題報(bào)告正式

葫蘆素B通過抑制NF-KB信號(hào)通路誘導(dǎo)Ramos細(xì)胞外源性凋亡(CucurbitacinBinducesRamoscellexogenousapoptosisthroughinhibitingNF-KBsignalpathway)

姓名：丁秀麗導(dǎo)師：吳雄志單位：天津醫(yī)科大學(xué)從屬腫瘤醫(yī)院1/14主要內(nèi)容研究背景1研究思緒2研究?jī)?nèi)容3研究流程4創(chuàng)新性與可行性52/14研究背景葫蘆素是從葫蘆科植物中提取一類四環(huán)三萜類化合物，其強(qiáng)大抗腫瘤作用尤其令人矚目，有望成為一種新有效抗腫瘤藥品。JianChaoChenetal.,Cucurbitacinsandcucurbitaneglycosides:structuresand

biological

activities,Nat.Prod.Rep,2023,2023,386–3963/14葫蘆素發(fā)覺于1960s，因具有廣泛抗腫瘤活性而備受關(guān)注，但由于其較窄治療指數(shù)和非特異毒副作用，其研究在隨后幾十年里被停滯。隨后，基于美國(guó)NCI60抗腫瘤篩選平臺(tái)建立，葫蘆素又重新吸引了研究者目光。它抗腫瘤活性幾乎能夠與紫杉類，長(zhǎng)春新堿和鬼臼素類等植物起源抗腫瘤藥品相睥睨，是一種極具前景新型抗腫瘤藥。DhongHyunLeeetal.,Cucurbitacin:AncientCompoundSheddingNewLightonCancerTreatment,TheScientificWorldJOURNAL(2023)10,413–4184/14葫蘆素抗腫瘤活性葫蘆素B乳腺癌肺癌白血病，淋巴瘤。。。結(jié)直腸癌前列腺癌喉癌腦膠質(zhì)瘤骨肉瘤5/14有關(guān)機(jī)制XiupingChenetal.,Biologicalactivitiesandpotentialmoleculartargets

of

cucurbitacins:afocusoncancer,Anti-CancerDrugs2023,23:777–7876/14研究思緒

研究證明CuB能夠通過調(diào)整STAT3,NF-KB信號(hào)通路及其下游信號(hào)分子Bcl-2,Bcl-xl,Bax,mcl-l等誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生內(nèi)源性凋亡。但有關(guān)CuB對(duì)淋巴瘤細(xì)胞外源性凋亡通路影響研究尚未見報(bào)道。葫蘆素B

本研究通過觀測(cè)CuB作用后人淋巴瘤Ramos細(xì)胞形態(tài)、增殖、凋亡、周期、外源性凋亡有關(guān)分子變化情況，探討其對(duì)Ramos細(xì)胞外源性凋亡影響及其也許作用機(jī)制。7/14理論根據(jù)1我們研究發(fā)覺葫蘆素B對(duì)Burkitt淋巴瘤Ramos細(xì)胞有顯著凋亡誘導(dǎo)作用。2通過初步試驗(yàn)證明其能上調(diào)NF-KB抑制蛋白IkBa蛋白體現(xiàn)。3我們又通過westernblot試驗(yàn)檢測(cè)，發(fā)覺其主要影響外源性凋亡蛋白caspase8。8/14通過查閱文獻(xiàn)…caspase8c-FLIPNF-KB葫蘆素能夠抑制泛素蛋白酶體系統(tǒng)對(duì)IkBa降解，從而抑制NF-KB信號(hào)通路。NF-KB又正好能上調(diào)外源性凋亡調(diào)控分子c-FLIP體現(xiàn)。c-FLIP是目前發(fā)覺唯一在DISC水平參與調(diào)整受體調(diào)亡通路分子，它能抑制caspase8激活，從而抑制外源性凋亡。

由此將NF-KB與外源性凋亡聯(lián)系起來(lái)NingDingetal.,ApoptosisInductionThroughProteasome

InhibitoryActivityofCucurbitacinDin

HumanT-CellLeukemia,Cancer2023;117:2735–46WangQetal.PKCdelta-mediatedregulationofFLIPexpressioninhumancoloncancercells.IntJCancer,2023Jan15;118(2):326-34.MaHM,ZhouKY,ProgressinBiochemistryandBiophysics,2023,33(10):932~9399/14信號(hào)通路如下：-a10/14研究?jī)?nèi)容細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)分子生物學(xué)試驗(yàn)

動(dòng)物試驗(yàn)

1.CuB對(duì)Ramos增殖抑制作用。

2.CuB對(duì)Ramos凋亡誘導(dǎo)作用。

3.CuB對(duì)Ramos細(xì)胞周期阻滯作用。

Text裸鼠移植移植瘤免疫組化

4.CuB對(duì)IkBa，p-IkBa蛋白體現(xiàn)影響。5.CuB對(duì)c-FLIP蛋白體現(xiàn)影響。6.CuB對(duì)caspase8凋亡酶活性影響。7.CuB對(duì)P65mRNA片段,c-flip轉(zhuǎn)錄水平影響。11/14研究流程Western檢測(cè)IkBa,NF-KB,c-FLIP蛋白體現(xiàn)

RT-PCR檢測(cè)p65C-flip,mRNA轉(zhuǎn)錄

Western檢測(cè)caspas8蛋白含量變化Hochest染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡CuB通過抑制NF-KB信號(hào)通路誘導(dǎo)Ramos細(xì)胞外源性凋亡細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)分子生物學(xué)試驗(yàn)

臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)增殖

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期動(dòng)物試驗(yàn)裸鼠淋巴瘤移植瘤模型建立免疫組化檢測(cè)NF-KB,C-FLIP水平12/14創(chuàng)新性從NF-KB信號(hào)通路說明了CuB誘導(dǎo)