懷菊花總黃酮對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的降壓作用及其機(jī)制

懷菊花總黃酮對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠的降壓作用及其機(jī)制

高血壓是一種常見(jiàn)的心血管疾病。目前，中國(guó)約有2億高血壓患者。1材料和機(jī)器1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物國(guó)際專(zhuān)利雄性自發(fā)性高血壓大鼠(簡(jiǎn)稱(chēng)SHR)50只:SPF級(jí),12周齡,體重232~292g,購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,許可證號(hào):SCXK(京)20120001,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證:NO.11000500000131。雄性WKY大鼠12只,SPF級(jí),12周齡,體重272~302g,購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,許可證號(hào):SCXK(京)2012-0001,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證:NO.11000500000132。飼養(yǎng)室溫25℃,空氣濕度50%~70%,每3~5只大鼠一籠,大鼠可自由走動(dòng)并攝取標(biāo)準(zhǔn)飼料與自來(lái)水,光線暴露:自然長(zhǎng)度的晝夜循環(huán)。1.2總黃酮含量測(cè)定藥材為河南焦作產(chǎn)懷菊花,經(jīng)河南省中醫(yī)藥研究院中藥室張留記研究員鑒定均為菊科植物菊(ChrysanthemummorifoliumRamat.)的干燥頭狀花序。取懷菊花藥材置于圓底燒瓶中,加入80%乙醇加熱回流提取兩次,每次1h,合并濾液,回收乙醇,濃縮,加乙酸調(diào)至pH2左右,用乙酸乙酯1∶1萃取兩次,合并乙酸乙酯提取液,用40%氫氧化鈉溶液調(diào)至pH7左右,回收乙酸乙酯,濃縮,減壓干燥。紫外分光光度法測(cè)定提取物中總黃酮含量為41.35%。提取物用0.5%羧甲基纖維素鈉(0.5%CMC-Na)水溶液溶解,配成質(zhì)量濃度為0.0205、0.041、0.082g/mL的混懸液。馬來(lái)酸依那普利片(揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)江蘇制藥股份有限公司,批號(hào)12112402,規(guī)格10mg,用0.5%羧甲基纖維素鈉(0.5%CMC-Na)水溶液溶解,配成質(zhì)量濃度為2mg/mL的混懸液);ET放射免疫試劑盒、AngⅡ放射免疫試劑盒、ALD放射免疫試劑盒、PRA放射免疫試劑盒(試劑盒均購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司)。1.3血壓儀u3000t超聲波提取器(濟(jì)寧科技超聲電子有限公司GT-350W);萬(wàn)分之一天平(日本島津LIBROR160DPT);十萬(wàn)分之一天平(瑞士METTLER);Acs-6型電子秤(永康市杰力衡器有限公司);紫外分光光度計(jì)(日本島津);智能無(wú)創(chuàng)血壓計(jì)—鼠儀BP2010A(日本Softron柱式會(huì)社);ELx808型酶標(biāo)儀(美國(guó)伯騰儀器有限公司);GC-300型γ放射免疫計(jì)數(shù)器(天津匯科儀器設(shè)備有限公司)。2實(shí)驗(yàn)方法2.1大鼠單次用藥,多次給藥將周齡為12周的50只SHR大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,連續(xù)2d測(cè)量大鼠血壓,將2d的血壓取均值,然后按照大鼠血壓值均衡隨機(jī)分5組,分別為:模型組(0.5%CMC-Na10mL/kg)、依那普利組(20mg/kg)、懷菊花總黃酮高劑量組(0.82g/kg)、懷菊花總黃酮中劑量組(0.41g/kg)、懷菊花總黃酮低劑量組(0.205g/kg)每組10只。另取10只WKY大鼠為正常對(duì)照組(0.5%CMC-Na10mL/kg)。各組喂食普通飼料,自由進(jìn)水。各組大鼠每天灌胃給藥1次,劑量為10mL/kg,連續(xù)給藥4周。每周測(cè)量體質(zhì)量1次,并根據(jù)體質(zhì)量的變化調(diào)整給藥量。2.2保溫套和保溫套的制備灌胃給藥后,每周采用BP-2010A型智能無(wú)創(chuàng)血壓計(jì)測(cè)定SHR大鼠尾動(dòng)脈血壓以及心率(測(cè)定血壓前各組大鼠喂食標(biāo)準(zhǔn)飼料,自由進(jìn)水)。測(cè)定血壓時(shí)先將實(shí)驗(yàn)大鼠放入血壓計(jì)配套的保溫套中,并根據(jù)每只大鼠體型的不同調(diào)整鼠袋大小和形狀,將大鼠穩(wěn)穩(wěn)固定。血壓計(jì)需在40℃恒溫下進(jìn)行預(yù)熱10~15min,然后將大鼠加壓感應(yīng)器從大鼠尾尖部穿入直至尾根部,用于感應(yīng)和測(cè)定尾動(dòng)脈血壓值,連續(xù)測(cè)3次,記錄大鼠收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)和心率(HR)值,取尾動(dòng)脈收縮壓(SBP)平均值為該大鼠的血壓值。2.3去血大鼠血樣的制備在給藥第4周末,將大鼠禁食不禁水12h后,以10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠,待動(dòng)物麻醉后剖開(kāi)腹腔經(jīng)腹主動(dòng)脈取血。血樣經(jīng)3000rpm離心15min,分離的血漿存放于-80℃冰箱備用。采用放射免疫法測(cè)定大鼠血漿中ET、AngⅡ、ALD和PRA的含量。2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用ue02b±s表示,組間差異采用方差分析,兩兩比較采用t檢驗(yàn),所有數(shù)據(jù)均用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理,以P<0.05和P<0.01表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3結(jié)果3.1單次給藥后24小時(shí)的血壓和心率的比較3.1.1sbp的降低與給藥前比較,給予懷菊花總黃酮高劑量、中劑量和低劑量后1hSBP即有降低,至4h達(dá)到峰值(P<0.01),三組降壓最明顯的為中劑量組,與依那普利組的SBP降低趨勢(shì)接近。至24h各給藥組大鼠SBP逐漸恢復(fù)至給藥后2h的水平(P>0.05)。見(jiàn)表1。3.1.2單次降壓初始血壓與給藥前比較,給予懷菊花總黃酮高劑量、中劑量和低劑量后1hDBP即有降低,至4h達(dá)到峰值(P<0.05),三組降壓最明顯的為中劑量組,與依那普利組的DBP降低趨勢(shì)接近。至24h各給藥組大鼠DBP逐漸恢復(fù)至給藥后2h的水平(P>0.05)。見(jiàn)表2。3.1.3h對(duì)大鼠hr的影響與單次給藥前比較,給予懷菊花總黃酮高劑量和中劑量后2hHR即有降低趨勢(shì),至4h有顯著差異(P<0.05),至24h各給藥組大鼠HR逐漸恢復(fù)至給藥后2h的水平(P>0.05)。見(jiàn)表3。3.2連續(xù)使用4周高血壓和心率的比較3.2.1連續(xù)給藥1周后血壓sbp的比較給藥前,與模型組比較,正常組SBP有極顯著差異(P<0.01),其他各組大鼠SBP均無(wú)顯著差異。給藥1周后,與模型組比較,各給藥組大鼠SBP均有極顯著降低(P<0.01)。結(jié)果顯示懷菊花總黃酮中劑量組降壓效果優(yōu)于高劑量組和低劑量組,與依那普利組降壓效果接近。與給藥前比較,各給藥組大鼠SBP變化趨勢(shì)與和模型組比較的變化趨勢(shì)相一致。在實(shí)驗(yàn)期間,模型組大鼠SBP持續(xù)穩(wěn)定在一定水平。見(jiàn)表4。3.2.2連續(xù)給藥4周舒張壓dbp的比較給藥前,與模型組比較,正常組大鼠DBP有極顯著差異(P<0.01),其他各組大鼠DBP均無(wú)顯著差異。給藥1周后,與模型組比較,依那普利組、懷菊花總黃酮高劑量、中劑量組大鼠DBP有極顯著降低(P<0.01),懷菊花總黃酮低劑量組大鼠DBP有顯著降低(P<0.05)。給藥3周后,各給藥組大鼠DBP較模型組有極顯著降低(P<0.01),懷菊花總黃酮中劑量組降壓效果優(yōu)于高劑量組和低劑量組,與依那普利組接近。與給藥前比較,各給藥組大鼠DBP變化趨勢(shì)與和模型組比較的變化趨勢(shì)相一致。在實(shí)驗(yàn)期間,模型組大鼠DBP持續(xù)穩(wěn)定在一定水平。見(jiàn)表5。3.2.3連續(xù)給藥對(duì)大鼠心率的影響給藥前,與模型組比較,正常組大鼠心率有顯著差異(P<0.05);而其他各組大鼠心率均無(wú)顯著差異。給藥后第1周以及第2周,與模型組比較,各給藥組大鼠心率無(wú)顯著性降低(P>0.05)。給藥3周后,與模型組比較,依那普利組和懷菊花總黃酮中劑量組大鼠心率有顯著降低(P<0.05);高劑量和低劑量組大鼠心率有降低趨勢(shì),但無(wú)顯著性(P>0.05)。給藥4周后,與模型組比較,依那普利組和懷菊花總黃酮高、中劑量組大鼠心率有顯著降低(P<0.05),低劑量組大鼠心率無(wú)顯著性降低(P>0.05);與給藥前比較,依那普利組和懷菊花總黃酮中劑量組大鼠心率在第3周后開(kāi)始有顯著差異(P<0.05);懷菊花總黃酮高劑量組和低劑量組大鼠心率在第4周后開(kāi)始有顯著差異(P<0.05)。在實(shí)驗(yàn)期間,模型組大鼠心率持續(xù)穩(wěn)定在一定水平。見(jiàn)表6。3.3血漿et、ald和pra水平給藥4周后,與模型組比較,正常組大鼠血漿中ET、AngⅡ、ALD和PRA極顯著降低(P<0.01);依那普利組和懷菊花總黃酮中劑量組大鼠血漿中ET、ALD和PRA極顯著降低(P<0.01);懷菊花總黃酮高劑量和低劑量組大鼠血漿中ET顯著降低(P<0.05),血漿中AngⅡ、ALD和PRA極顯著降低(P<0.01)。見(jiàn)表7。4連續(xù)給藥對(duì)shr心率的影響本實(shí)驗(yàn)采用SHR作為動(dòng)物模型研究了懷菊花總黃酮的降壓作用及其機(jī)制。結(jié)果無(wú)論是單次給藥24h內(nèi)還是連續(xù)給藥4周內(nèi),懷菊花總黃酮對(duì)SHR均有良好的降壓效應(yīng),呈明顯的時(shí)效和量效關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)懷菊花總黃酮對(duì)SHR的心率也有一定作用,可以降低SHR的心率。內(nèi)皮功能損傷是高血壓的發(fā)病原因之