抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件

第一節(jié)抗原－抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可發(fā)生特異性結(jié)合，呈現(xiàn)的某種反應(yīng)現(xiàn)象。

第一節(jié)抗原－抗體反應(yīng)1抗原抗體反應(yīng)有以下幾個特點:1.抗原與抗體結(jié)合是特異性結(jié)合表位(抗原)——超變區(qū)(抗體)2.抗原抗體結(jié)合是分子表面的非共價鍵結(jié)合

氫鍵、疏水鍵、靜電引力和范德華力(Vanderwaal‘sforce)、電子云力的合力?？乖涂贵w可解離,性質(zhì)不變。

抗原抗體反應(yīng)有以下幾個特點:2抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件33.抗原抗體反應(yīng)可分為兩個階段（1）特異性結(jié)合階段此階段需時短,僅需幾秒到幾分鐘,無可見反應(yīng)出現(xiàn)（2）可見反應(yīng)階段需時較長,數(shù)分,數(shù)小時或數(shù)日出現(xiàn)可見現(xiàn)象,表現(xiàn)為沉淀,凝集,細(xì)胞溶解等4.抗原和抗體結(jié)合是否呈現(xiàn)明顯可見的反應(yīng)現(xiàn)象,與兩者的分子比例密切相關(guān)

抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件4抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件5抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件6抗原抗體反應(yīng)的主要影響因素：1.電解質(zhì):在中性或堿性條件下,抗原抗體均帶負(fù)電荷,適當(dāng)濃度的電解質(zhì)會使它們失去一部分負(fù)電荷而互相結(jié)合,出現(xiàn)明顯的沉淀或凝集現(xiàn)象。2.溫度:37℃3.酸堿度:pH6-8抗原抗體反應(yīng)的主要影響因素：7抗原抗體反應(yīng)包括：沉淀反應(yīng)凝集反應(yīng)溶解反應(yīng)補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)中和反應(yīng)已知抗體檢測未知抗原；已知抗原檢測未知抗體?？乖贵w反應(yīng)包括：8一、沉淀反應(yīng)(precipitation)

概念：可溶性抗原與相應(yīng)抗體在電解質(zhì)存在條件下結(jié)合，出現(xiàn)沉淀物的現(xiàn)象。

沉淀反應(yīng)的試驗方法：環(huán)狀法絮狀法瓊脂中沉淀法

一、沉淀反應(yīng)(precipitation)9環(huán)狀法——重層法靈敏度：0.5ug抗體/ml原理：環(huán)狀法——重層法10絮狀法——混合法靈敏度：1.5ug抗體/ml原理：絮狀法——混合法11瓊脂中沉淀反應(yīng)法：

雙向免疫擴(kuò)散(doubleimmunodiffusion)單向免疫擴(kuò)散(singleradialimmunodiffusion)對流免疫電泳(counterimmunoelectrophoresis)火箭電泳(rocketelectrophoresis)免疫電泳(immunoelectrophoresis)

抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件12抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件13

(一)雙向免疫擴(kuò)散(doubleimmunodiffusion)原理：在瓊脂板上按一定距離打孔，抗原和抗體分別加入相鄰孔中，使其向孔周圍擴(kuò)散，比例適宜相對應(yīng)的抗原抗體結(jié)合，在抗原抗體孔間出現(xiàn)白色的沉淀線(沉淀物)。靈敏度：1～20μg抗體/ml應(yīng)用：主要用于檢測體液中各種蛋白成分，如甲胎蛋白（AFP）、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）等。(一)雙向免疫擴(kuò)散(double14抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件15

(二)單向免疫擴(kuò)散(singleradialimmunodiffusion)

原理：抗體預(yù)先與瓊脂混勻制成凝膠板，打孔,將可溶性抗原加至孔中，向周圍擴(kuò)散，與抗體在比例適宜處形成白色沉淀環(huán)。沉淀環(huán)的直徑與抗原濃度呈正相關(guān)。根據(jù)沉淀環(huán)直徑大小從預(yù)先繪制成的標(biāo)準(zhǔn)曲線，查出待測標(biāo)本中抗原含量。優(yōu)點：定量測定抗原，方法簡便，易觀察結(jié)果。靈敏度：1～20μg／ml。缺點：需時長，1～2天觀察結(jié)果。應(yīng)用：常用于血清中IgG、IgM、IgA和C3的定量檢測。(二)單向免疫擴(kuò)散(singleradial16抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件17(三)對流免疫電泳(counterimmunoelectrophoresis)原理：在電場中進(jìn)行雙向免疫擴(kuò)散。加抗原孔靠近陰極，加抗體孔靠近陽極。通電(緩沖液pH8.6)后，抗原向陽極泳動，抗體向陰極泳動，二者在比例適宜處形成白色沉淀線。特點：出結(jié)果快于雙向免疫擴(kuò)散，約需1小時；靈敏度:10μg／ml。(三)對流免疫電泳(counter18抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件19(四)火箭電泳(rocketelectrophoresis,又稱電免疫擴(kuò)散)原理：在電場中進(jìn)行單向免疫擴(kuò)散?？乖诤贵w的瓊脂中泳動，二者于比例適宜處形成沉淀峰。沉淀峰的高度與抗原含量成正比。從參考曲線查出抗原含量。敏感度：1～20μg／ml

優(yōu)點：需時較短。應(yīng)用：測定抗原含量。(四)火箭電泳(rocketelectrophoresis20抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件21(五)免疫電泳(immunoelectrophoresis)

原理：將抗原在瓊脂平板上進(jìn)行電泳，然后沿電泳方向挖一與抗原平行槽，加入抗體，進(jìn)行雙向免疫擴(kuò)散?？乖c抗體在比例適宜處形成沉淀弧。根據(jù)沉淀弧的數(shù)量、位置和形狀，與已知標(biāo)準(zhǔn)抗原比較，即可分析抗原的成分及性質(zhì)。應(yīng)用：血清蛋白組分分析；抗原成分分析。(五)免疫電泳(immunoelectrophoresis)22抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件23二、凝集反應(yīng)(agglutination)

概念：顆粒性抗原或吸附于顆粒上的可溶性抗原(或抗體)于相應(yīng)抗體(或抗原)，在電解質(zhì)存在下出現(xiàn)凝集物的現(xiàn)象?？乖?抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件24凝集反應(yīng)包括：

◆直接凝集反應(yīng)(directagglutination)

◆間接(被動)凝集反應(yīng)(indirect/passiveagglutination)◆間接凝集抑制試驗(indirectagglutinationinhibitiontest)◆協(xié)同凝集試驗(coagglutinationtest)

◆抗球蛋白試驗(antiglobulintest，Coomb’stest)凝集反應(yīng)包括：25(一)直接凝集反應(yīng)(directagglutination)

原理：顆粒性抗原(本身)+抗體凝集包括：玻片法：定性，用于：菌種鑒定人ABO血型鑒定試管法：半定量，用于：傷寒或副傷寒診斷肥達(dá)氏反應(yīng)(Widaltest),布氏菌病診斷瑞特氏反應(yīng)(Wrighttest)(一)直接凝集反應(yīng)(directagglutination26抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件27直接凝集反應(yīng)（玻片法）直接凝集反應(yīng)（玻片法）28抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件29抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件30抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件31抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件32

(二)間接(被動)凝集反應(yīng)(indirect/passiveagglutination)

原理：可溶性抗原(或抗體)，吸附顆粒載體＋抗體(或抗原)凝集

間接凝集反應(yīng)種類及所用載體間接凝集反應(yīng)載體間接血凝實驗紅細(xì)胞間接乳膠凝集實驗聚苯乙烯膠乳顆粒間接炭凝實驗活性炭(二)間接(被動)凝集反應(yīng)(indirect/passiv33抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件34(三)間接凝集抑制試驗

(indirectagglu-tinationinhibitiontest)原理：抗體 ＋反應(yīng)＋抗原致敏載體顆?？扇苄钥乖?/p>

(三)間接凝集抑制試驗(indirectagglu-t35抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件36抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件37

(四)協(xié)同凝集試驗(coagglutinationtest)

原理：

IgG結(jié)合于SPA

(金黃色葡萄球菌)

＋凝集抗原(可溶性）應(yīng)用：檢測微量抗原(存在于血液、腦脊液和其他分泌液)。用于流腦、傷寒、布氏菌病等的早期診斷。(四)協(xié)同凝集試驗(coagglutinationte38抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件39(五)抗球蛋白試驗(antiglobulintest，Coomb’stest)原理：紅細(xì)胞(Rh+) ＋凝集(不可見)＋抗人球蛋抗Rh抗體(IgG)白抗體凝集(可見)靈敏度：3X10-2ug/ml二種方法：A.直接抗球蛋白實驗B.間接抗球蛋白實驗(五)抗球蛋白試驗(antiglobulintest，Co40抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件41抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件42三.免疫標(biāo)記技術(shù)用熒光素、同位素或酶等示蹤物質(zhì)標(biāo)記抗體(或抗原)，與抗原(或抗體)進(jìn)行反應(yīng)，通過檢測示蹤物質(zhì)，分析被檢抗原(或抗體)的存在或含量的方法。靈敏度：高，1X10-4～1X10-5ug抗體/ml應(yīng)用：微量物質(zhì)的定性、定量或定位。三.免疫標(biāo)記技術(shù)43免疫標(biāo)記技術(shù)的基本類型：（一）免疫熒光技術(shù)(immunofluorescencetechnique)（二）免疫酶技術(shù)(immunoenzymatictechnique)

（三）同位素標(biāo)記技術(shù)(isotopelabellingtechnique)免疫標(biāo)記技術(shù)的基本類型：44（一）免疫熒光技術(shù)(又稱熒光抗體技術(shù))

原理：用熒光素(如異硫氰酸熒光素、羅丹明B200等)標(biāo)記抗體(熒光抗體)，用熒光抗體浸染細(xì)胞或組織切片，抗原與熒光抗體結(jié)合，于熒光顯微鏡下觀察熒光，確定被檢抗原的存在。免疫熒光技術(shù)包括：

直接法間接法間接補(bǔ)體增強(qiáng)法

（一）免疫熒光技術(shù)(又稱熒光抗體技術(shù))451．直接法

優(yōu)點：特異性強(qiáng)缺點：必須制備針對每一種抗原的熒光抗體。應(yīng)用：用于抗原鑒定、定位和分布。1．直接法462．間接法用熒光素標(biāo)記抗球蛋白抗體(熒光抗抗體)優(yōu)點：只制備一種熒素光標(biāo)記的抗體，可檢測多種抗原或抗體缺點：易產(chǎn)生非特異性熒光

2．間接法47應(yīng)用：（1）檢測抗原：如T細(xì)胞亞群檢測【抗體(第一抗體，已知)＋抗原】＋熒光抗抗體(第二抗體)熒光顯微鏡下觀察熒光（2）檢測抗體：如抗核抗體檢測【抗原(已知)＋抗體(未知抗體)】＋熒光抗抗體(第二抗體)熒光顯微鏡下觀察熒光應(yīng)用：483．間接補(bǔ)體增強(qiáng)法原理：{【抗體(或抗原，已知)＋抗原(或抗體，未知)】＋補(bǔ)體}＋熒光標(biāo)記抗補(bǔ)體C3的抗體顯微鏡下觀察熒光優(yōu)點：敏感性高缺點：易產(chǎn)生非特異性熒光應(yīng)用：檢測抗原或抗體3．間接補(bǔ)體增強(qiáng)法49抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件50（二）免疫酶技術(shù)(immunoenzymatictechniques)是將抗原抗體反應(yīng)與酶催化底物的作用相結(jié)合的一種方法。主要有兩種類型：1.免疫酶染色2.酶免疫測定（enzymeimmunoassay,EIA）（二）免疫酶技術(shù)(immunoenzymatic511.免疫酶染色(又稱免疫組化技術(shù),immunohistochemistrytechnique)原理：用酶(如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等)標(biāo)記抗體(酶標(biāo)抗體)，將酶標(biāo)抗體與抗原(細(xì)胞或組織切片)作用，抗原與酶標(biāo)記抗體結(jié)合，加底物，酶催化底物產(chǎn)生有色物質(zhì)，觀察結(jié)果。應(yīng)用：細(xì)胞內(nèi)、組織內(nèi)抗原的定性、定量和定位檢測。1.免疫酶染色(又稱免疫組化技術(shù),522.酶免疫測定

酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)原理：①將抗原(或抗體)結(jié)合于固相載體；②與抗體(或抗原)反應(yīng)；③加酶底物，酶促反應(yīng)。靈敏度：2X10-520μg／ml應(yīng)用：廣泛，可檢測微量抗體和抗原(如微生物成分、激素、細(xì)胞因子、粘附分子等）。2.酶免疫測定53ELISA法：直接法間接法雙抗體夾心法(雙位點法)競爭法抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件54抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件55抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件56抗原-抗體反應(yīng)抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)或體外相遇可課件57(三)同位素標(biāo)記技術(shù)(isotope-labellingtechnique)放射免疫分析(radioimmunoassay,RIA)

是一種放射性同位素分析與抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合方法。

優(yōu)點：靈敏度高,可檢測0.001pg／mL特異性強(qiáng)應(yīng)用：微量抗原和抗體檢測。缺點：不穩(wěn)定，廢物處理麻煩等。(三)同位素標(biāo)記技術(shù)(isotope-labelling581.檢測抗原抗原競爭法【Ab(有限量)+Ag(待測）】+Ag*(已定量)↓Ag-Ab復(fù)合物或Ag*-Ab↓分離Ag*-Ab和游離Ag*↓測定Ag*-Ab和游離Ag*放射性