血液學(xué)血細(xì)胞化學(xué)染色公開課一等獎(jiǎng)?wù)n件省賽課獲獎(jiǎng)?wù)n件

第三章

細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)

1精選ppt第1頁

學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握：細(xì)胞化學(xué)染色基本步驟；鐵染色、過氧化物酶染色、酯酶染色、過碘酸-希夫染色、堿性磷酸酶染色、酸性磷酸酶染色正常血細(xì)胞染色反應(yīng)和臨床意義。2.熟悉：細(xì)胞化學(xué)染色概念和臨床應(yīng)用。3.理解：細(xì)胞化學(xué)染色原理和影響原因。2精選ppt第2頁第一節(jié)概述

一、概念細(xì)胞化學(xué)染色是細(xì)胞學(xué)和化學(xué)相結(jié)合而形成一門科學(xué)。它以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合利用化學(xué)反應(yīng)原理對(duì)血細(xì)胞內(nèi)多種化學(xué)成份(酶類/脂類/糖類/鐵/蛋白質(zhì)/核酸等)作定性、定位、半定量分析辦法。3精選ppt第3頁要求：血細(xì)胞化學(xué)染色基本要求是在原位顯示細(xì)胞成份和構(gòu)造，反應(yīng)產(chǎn)物應(yīng)是有色沉淀物，具有一定穩(wěn)定性。血細(xì)胞化學(xué)染色可顯示糖原、脂類、酶、蛋白質(zhì)等。4精選ppt第4頁二、必要性從形態(tài)學(xué)觀測(cè)，存在較多主觀性；有些原始細(xì)胞形態(tài)較相同，難以鑒別；結(jié)合細(xì)胞化學(xué)染色，提升疾病診斷率。5精選ppt第5頁三、臨床應(yīng)用1.輔助判斷急性白血病細(xì)胞類型2.輔助血液系統(tǒng)疾病診斷和鑒別診斷3.觀測(cè)疾病療效和預(yù)后4.疾病發(fā)病機(jī)制探討6精選ppt第6頁白血病診斷：MICM分型

M：morphologyI：immunology

C：cytogeniticsM：molecularbiology形態(tài)學(xué)分型：進(jìn)行初步診斷免疫學(xué)分型：明確細(xì)胞種類細(xì)胞遺傳學(xué)分型：與疾病預(yù)后有關(guān)分子生物學(xué)分型：提升到分子水平7精選ppt第7頁四、基本步驟1.固定（1）物理法：干燥、火焰（2）化學(xué)法：A、蒸氣固定：甲醛B、液體固定：甲醛、乙醇、甲醇、丙酮。8精選ppt第8頁2.顯示：有色沉淀反應(yīng)（1）偶氮偶聯(lián)法：酯酶染色（2）聯(lián)苯胺法：POX（3）普魯士藍(lán)反應(yīng)：Fe（4）希夫反應(yīng)：PAS（5）金屬沉淀法：NAP（6）物理顯色法：SBB9精選ppt第9頁3.復(fù)染：使多種細(xì)胞能顯示出來鐵染色----中性紅、伊紅PAS-------甲基綠核：中性紅、甲基綠、沙黃等。漿：伊紅、剛果紅、光綠等。10精選ppt第10頁五、研究對(duì)象

外周血和骨髓新鮮涂片單個(gè)細(xì)胞中化學(xué)物質(zhì)：

酶類、脂類、糖類、鐵、蛋白質(zhì)、核酸等

11精選ppt第11頁

第二節(jié)常用細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)

鐵染色過氧化物酶染色蘇丹黑B染色酯酶染色過碘酸-希夫反應(yīng)中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色

12精選ppt第12頁一、鐵染色

（ferricstain）13精選ppt第13頁亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鐵(藍(lán)色沉淀在含F(xiàn)e部位)鐵＋酸性環(huán)境普魯士藍(lán)反應(yīng)骨髓小粒中含F(xiàn)e血黃素（細(xì)胞外鐵）骨髓中貯存鐵幼紅細(xì)胞內(nèi)Fe（細(xì)胞內(nèi)鐵）原理14精選ppt第14頁

二、成果判斷

1.細(xì)胞外鐵(骨髓小粒－含鐵血黃素)鐵顆粒、鐵小珠、鐵團(tuán)塊15精選ppt第15頁細(xì)胞外鐵(低倍鏡觀測(cè))（－）：無顆粒（＋）：有少許鐵顆?；蚺家婅F小珠（＋＋）：有較多鐵顆?；蜩F小珠（＋＋＋）：有很多鐵顆粒、鐵小珠和少數(shù)鐵小塊（＋＋＋＋）：有極多鐵顆粒、小珠和很多鐵小塊，密集成堆。16精選ppt第16頁2.細(xì)胞內(nèi)鐵(中晚幼紅細(xì)胞，油鏡觀測(cè))（1）分級(jí)(按鐵顆粒數(shù)量多少及大小)

細(xì)小顆粒：細(xì)沙樣鐵小粒，不易看清。粗大顆粒：很容易看清顆粒。（2）陽性率

觀測(cè)100個(gè)中晚幼紅細(xì)胞，計(jì)算出鐵粒幼紅細(xì)胞百分比。17精選ppt第17頁【成果判斷】

幼紅細(xì)胞核染色為鮮紅色,鐵粒呈藍(lán)綠色。

18精選ppt第18頁細(xì)胞內(nèi)鐵(油鏡觀測(cè)幼紅細(xì)胞)

Ⅰ型：1～2個(gè)小鐵顆粒；

Ⅱ型：3～5個(gè)小鐵顆粒；

Ⅲ型：6～10個(gè)小鐵顆?；?～4個(gè)大顆粒；

Ⅳ型：

10個(gè)以上小鐵顆粒或5個(gè)以上大顆粒。19精選ppt第19頁

環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞(ringedsideroblast)

幼紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)鐵顆粒>6個(gè)，圍繞核周2/3以上者。鐵粒幼紅細(xì)胞(sideroblast)：

胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒幼紅細(xì)胞。鐵粒紅細(xì)胞(siderocyte)：

胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒成熟紅細(xì)胞。20精選ppt第20頁綠色箭頭示：環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞；藍(lán)色箭頭示：鐵粒紅細(xì)胞21精選ppt第21頁1.細(xì)胞外鐵：

（+）~（++）2.細(xì)胞內(nèi)鐵：鐵粒幼紅細(xì)胞陽性率大約12~44%，I~II型（I型為主），無Ⅲ型、Ⅳ型、環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞及鐵粒紅細(xì)胞。三、參照范圍22精選ppt第22頁四、臨床意義

鐵染色是評(píng)定鐵缺乏最實(shí)用辦法，是反應(yīng)儲(chǔ)存鐵金標(biāo)準(zhǔn)，是臨床應(yīng)用最廣泛細(xì)胞化學(xué)染色之一。23精選ppt第23頁

1.缺鐵性貧血：外鐵（－），內(nèi)鐵<10%；治療有效后，內(nèi)外鐵

。

2.鐵粒幼細(xì)胞性貧血：外鐵

；內(nèi)鐵陽性率

，環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞增多，可見粗顆粒Ⅲ、Ⅳ型鐵粒幼紅細(xì)胞。24精選ppt第24頁

3.MDS-RAS：內(nèi)外鐵增多，環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞>15%。

4.非缺鐵性貧血：溶貧、巨幼貧、再障、白血病等，內(nèi)外鐵正?；蛟龆?。

5.感染、肝硬化、慢性腎炎、血色病等：外鐵增多。25精選ppt第25頁五、應(yīng)用評(píng)價(jià)鐵染色是臨床常用一種細(xì)胞化學(xué)染色，雖不如血漿鐵蛋白敏感，不過反映機(jī)體儲(chǔ)存鐵金標(biāo)準(zhǔn)。

外鐵：反應(yīng)骨髓中鐵儲(chǔ)存量；

內(nèi)鐵：反應(yīng)骨髓中可利用鐵量。

26精選ppt第26頁二、過氧化物酶染色

（peroxidase,POX）

27精選ppt第27頁一、原理

粒細(xì)胞和部分單核細(xì)胞溶酶體顆粒中含有過氧化物酶(POX)，它可分解H2O2釋放出新生態(tài)氧，后者氧化二氨基聯(lián)苯胺，形成金黃色不溶性沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)酶所在活性部位。

二甲基聯(lián)苯胺法（DAB）原理28精選ppt第28頁P(yáng)OX

新生態(tài)氧[O]↑過氧化氫（基質(zhì)中）四甲基聯(lián)苯胺（無色）聯(lián)苯胺藍(lán)（藍(lán)色）亞硝基鐵氰化鈉藍(lán)色顆粒（漿內(nèi)酶部位）粒、單核細(xì)胞胞漿【原理】29精選ppt第29頁二、ICSH推薦三種辦法

二氨基聯(lián)苯胺法（DBA）二鹽酸聯(lián)苯胺法過氧化物酶氨基-甲基卡巴唑染色法

30精選ppt第30頁三、成果判斷

在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出鈔票黃色顆粒為陽性反應(yīng)。（二氨基聯(lián)苯胺法）31精選ppt第31頁二氨基聯(lián)苯胺法32精選ppt第32頁二鹽酸聯(lián)苯胺法33精選ppt第33頁二鹽酸聯(lián)苯胺法34精選ppt第34頁【成果判斷】

-、±、+、++、+++、++++弱陽性顆粒小，分布稀疏陽性顆粒稍粗，分布較密集強(qiáng)陽性顆粒粗大，密布于整個(gè)胞漿35精選ppt第35頁P(yáng)OX成果判斷細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有藍(lán)黑色顆粒者為陽性。（－）無顆粒沉著；（a）（±）顆粒細(xì)小，分布稀疏；（b）（+）顆粒較粗，局灶分布；（c）（++）顆粒粗大，分布較密，占胞質(zhì)1/2~2/3；（d）（+++）顆粒粗大，呈團(tuán)塊分布；（e）（++++）所有胞質(zhì)均部滿顆粒，可覆蓋胞核（f）。36精選ppt第36頁【正常血細(xì)胞染色反應(yīng)】1.粒細(xì)胞系統(tǒng)

POX主要存在于粒系細(xì)胞中。

分化差原粒細(xì)胞陰性;

分化好原粒細(xì)胞至中性成熟粒細(xì)胞各階段均呈陽性，陽性反應(yīng)程度隨細(xì)胞成熟逐漸增強(qiáng)。

中性分葉核粒細(xì)胞：強(qiáng)陽性嗜酸粒細(xì)胞：陽性最強(qiáng)嗜堿粒細(xì)胞：（－）37精選ppt第37頁

2.單核細(xì)胞系統(tǒng)陰性或弱陽性

3.淋巴細(xì)胞系統(tǒng)紅細(xì)胞系統(tǒng)巨核細(xì)胞系統(tǒng)陰性漿細(xì)胞組織細(xì)胞

38精選ppt第38頁39精選ppt第39頁40精選ppt第40頁41精選ppt第41頁42精選ppt第42頁四、臨床意義鑒別急性白血病類型首選（1）急淋和急性髓細(xì)胞系鑒別：急淋：（－），陽性率<3%；急單：弱陽性；急粒：陽性（+～+++）。

43精選ppt第43頁

2.單核細(xì)胞系統(tǒng)：（－）或弱（+），陽性顆粒少而細(xì)小。

3.其他系統(tǒng)細(xì)胞：淋巴細(xì)胞系統(tǒng)、紅細(xì)胞系統(tǒng)、巨核細(xì)胞系統(tǒng)、漿細(xì)胞、組織細(xì)胞（－）。

44精選ppt第44頁【臨床評(píng)價(jià)】

急性髓細(xì)胞白血病急性淋巴細(xì)胞白血病

鑒別45精選ppt第45頁

1.急性髓細(xì)胞白血病

（1）急性粒細(xì)胞白血病

陽性反應(yīng)

（2）急性單核細(xì)胞白血病

弱陽性反應(yīng)46精選ppt第46頁

2.急性淋巴細(xì)胞白血病

陰性反應(yīng)或陽性率<3%(殘留原粒細(xì)胞)47精選ppt第47頁ALL48精選ppt第48頁ALL49精選ppt第49頁原粒陰性50精選ppt第50頁原粒弱陽性51精選ppt第51頁原粒陽性52精選ppt第52頁早幼粒強(qiáng)陽性53精選ppt第53頁

一、原理

蘇丹黑B是一種脂溶性重氮染料，可溶解細(xì)胞內(nèi)含脂構(gòu)造(中性脂肪、磷脂、糖脂和類固醇)，而使脂類物質(zhì)顯示出來，呈棕黑色或深黑色(粒細(xì)胞：豐富；單核細(xì)胞：少許)。三、蘇丹黑B染色（SudanblackB，SBB）54精選ppt第54頁正常血細(xì)胞染色反應(yīng)與POX染色基本一致臨床意義與POX染色相同55精選ppt第55頁二、SBB與POX區(qū)分：

1.POX特異性高于SBB，而敏感性低于SBB；2.POX染色要求涂片新鮮，保持酶活性，SBB染色可用陳舊涂片。56精選ppt第56頁57精選ppt第57頁58精選ppt第58頁

1.特異性酯酶（specificesterase）

主要存在于粒細(xì)胞，又稱“粒細(xì)胞酯酶”

－氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）。

一、分類四、酯酶染色59精選ppt第59頁

2.非特異性酯酶(nonspecificesterase)單核、組織細(xì)胞中含量較多，粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞中含量少，且氟化鈉抑制單核細(xì)胞中非特異性酯酶，而不抑制粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及其他細(xì)胞。60精選ppt第60頁

醋酸AS-D奈酚酯酶：NAS-DAE

α-醋酸奈酚酯酶：α-NAE

α-丁酸奈酚酯酶：α-NBE酸性α-醋酸奈酚酯酶：ANAE

(α-NBE敏感性不如NAS-DAE但特異性較之強(qiáng))

61精選ppt第61頁（

一）特異性脂酶染色1.氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色

NaphtholAS-Dchloroacetateesterase62精選ppt第62頁

1.原理氯乙酸AS-D萘酚AS-D萘酚

不溶性有色(紅)沉淀。NAS-DCE幾乎僅出目前粒細(xì)胞，其特異性高，因此又稱為“粒細(xì)胞酯酶”NAS-DCE

重氮鹽(堅(jiān)牢藍(lán)紫醬)63精選ppt第63頁氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色64精選ppt第64頁

2.正常血細(xì)胞染色反應(yīng)

①粒系(酶活性不隨細(xì)胞成熟而增強(qiáng))原粒（－）或（+）早幼粒~成熟中性粒細(xì)胞（+）嗜酸性粒細(xì)胞（－）或弱（+）嗜堿性粒細(xì)胞（+）65精選ppt第65頁

②單核細(xì)胞系統(tǒng)：（－）③肥大細(xì)胞：（+）

④淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、幼紅細(xì)胞、

巨核細(xì)胞、血小板：（－）66精選ppt第66頁

3.臨床意義

主要用于輔助鑒別急性白血病細(xì)胞類型：

①急性粒細(xì)胞白血?。海?）

②急性早幼粒細(xì)胞白血病：強(qiáng)（+）

③急性單核細(xì)胞白血?。海ǎ?/p>

④急粒-單：粒細(xì)胞（+）單核細(xì)胞（－）

⑤急性巨核細(xì)胞性白血?。海ǎ?/p>

⑥急性淋巴細(xì)胞白血病：（－）67精選ppt第67頁

原理

：

非特異性脂酶在對(duì)應(yīng)pH環(huán)境中，

將基質(zhì)液中對(duì)應(yīng)底物水解，產(chǎn)生含萘酚

物質(zhì)，后者與重氮鹽發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)，

形成不溶性有色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)

內(nèi)酶所在部位。（二）非特異性脂酶染色68精選ppt第68頁根據(jù)pH值不一樣分為：酸性：酸性α-醋酸萘酚酯酶染色(ANAE)中性：α-醋酸萘酚酯酶染色(α-NAE)

醋酸AS-D萘酚酯酶染色(NAS-DAE)堿性：α-丁酸萘酚酯酶染色(α-NBE)69精選ppt第69頁

名稱pH底物生成物重氮鹽(產(chǎn)物顏色)α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)中α-醋酸萘酚α-萘酚堅(jiān)牢藍(lán)B棕黑,灰黑醋酸AS-D萘酚酯酶(AS-DNAE)中醋酸AS-D萘酚AS-D萘酚堅(jiān)牢藍(lán)BB藍(lán)α-丁酸萘酚酯酶(α-NBE)堿α-丁酸萘酚α-萘酚堅(jiān)牢紫醬GBC紅酸性α-醋酸萘酚酯酶(ANAE)酸α-醋酸萘酚α-萘酚六偶氮付品紅紅70精選ppt第70頁

1.α-醋酸萘酚酯酶染色

（α-naphtholacetateesterase，α-NAE）71精選ppt第71頁α-醋酸萘酚酯酶（細(xì)胞內(nèi)）α-醋酸萘酚（基質(zhì)液中）α-萘酚

重氮鹽（堅(jiān)牢藍(lán)B）胞漿不溶性灰黑色或棕黑色沉淀水解【原理】72精選ppt第72頁【成果判斷】

胞漿內(nèi)有灰黑色或棕黑色彌散性顆粒狀沉淀為陽性。73精選ppt第73頁α-醋酸萘酚酯酶染色(灰黑色、棕黑色)74精選ppt第74頁α-醋酸萘酚酯酶染色a:單核b:BPCc:巨核d:LC(+)e:幼紅(-)75精選ppt第75頁

氟化鈉抑制試驗(yàn)

在基質(zhì)液中加入適量NaF,其他染色辦法同上。兩種辦法染色后用油鏡計(jì)數(shù)100或200個(gè)被檢細(xì)胞，分別計(jì)算出抑制前和抑制后陽性率或陽性積分。76精選ppt第76頁

氟化鈉抑制率=抑制前陽性率或陽性積分-抑制后陽性率或陽性積分抑制前陽性率或陽性積分100%77精選ppt第77頁78精選ppt第78頁

A圖：急性單核細(xì)胞白血病α-NAE染色

原始、幼稚單核細(xì)胞多呈強(qiáng)陽性

B圖：急性單核細(xì)胞白血病

α-NAE氟化鈉抑制染色原始、幼稚單核細(xì)胞陽性反應(yīng)被氟化鈉抑制（與A圖為同一標(biāo)本）

A

B79精選ppt第79頁【臨床評(píng)價(jià)】急單急粒急性早幼粒急粒單急淋α-NAE+++或-或++陽性-++++弱+NaF被抑制不被不被抑制部分被抑制抑制部分未被抑制主要用于鑒別急性白血病類型80精選ppt第80頁

2.臨床意義

輔助鑒別急性白血病細(xì)胞類型

急單：?jiǎn)魏思?xì)胞陽性，能被NaF抑制。

急粒：粒細(xì)胞弱陽性，不被NaF抑制。81精選ppt第81頁

M3：強(qiáng)陽性，不能被NaF抑制。

M4：部分陽性細(xì)胞能被NaF抑制，

部分陽性細(xì)胞不能被NaF抑制。

ALL：原幼淋陰性或陽性，不能被NaF抑制。82精選ppt第82頁【正常血細(xì)胞染色反應(yīng)】1.單核細(xì)胞系統(tǒng)

原始單核細(xì)胞分化差陰性分化好陽性

幼稚及成熟單核細(xì)胞陽性被氟化鈉抑制83精選ppt第83頁

2.粒細(xì)胞系統(tǒng)

原粒細(xì)胞陰性或弱陽性下列階段為弱陽性

3.淋巴細(xì)胞系統(tǒng)

多數(shù)陰性，少數(shù)弱陽性

不被氟化鈉抑制84精選ppt第84頁2.α-丁酸奈酚酯酶染色α-NBE

原理：

血細(xì)胞中α-NBE在堿性條件下，基質(zhì)液中α-丁酸奈酚水解，產(chǎn)生α-奈酚，后者與堅(jiān)牢醬紫GBC偶聯(lián)，形成不溶性紅色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)。85精選ppt第85頁α-NBE染色反應(yīng)1.粒系：各期（-）2.單核系：分化差原單（-）；分化好原單（+）幼單~成熟單核（+），可被NaF抑制3.淋巴系：TC、非T非B（+）BC（+）

4.其他細(xì)胞：巨核、有核紅細(xì)胞、漿細(xì)胞（-）或弱（+）

組織細(xì)胞(+),不被NaF抑制86精選ppt第86頁3.酸性α-醋酸奈酚酯酶染色ANAE

原理：

血細(xì)胞中酸性α-醋酸奈酚酯酶（ANAE）在pH弱酸性（pH5.8）條件下，可水解基質(zhì)液中α-醋酸奈酚，產(chǎn)生α-奈酚，進(jìn)而與重氮鹽六偶氮付品紅形成不溶性紅色沉淀，定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所在部位。87精選ppt第87頁酸性α-醋酸萘酚酯酶染色（彌漫性棕紅色）---M588精選ppt第88頁ANAE染色反應(yīng)1.單核系：強(qiáng)（+）可被NaF抑制2.淋巴系：TC（+）BC（-）3.其他細(xì)胞：粒系（-）或弱（+）不被NaF抑制

紅系、巨核系（-）

89精選ppt第89頁

4.酯酶雙染色

在同一張涂片上進(jìn)行兩種酯酶染色特異性酯酶+非特異性酯酶對(duì)診斷急性粒-單細(xì)胞白血病有獨(dú)特價(jià)值

α-NAE與NAS-DCE紅色(單)

α-NBE與NAS-DCE蘭色(粒)

90精選ppt第90頁骨髓涂片特異性酯酶（CE）和非特異性酯酶（NAE）雙酯酶染色顯示，原始粒細(xì)胞胞漿呈藍(lán)色CE陽性反應(yīng)；而原始單核細(xì)胞胞漿呈棕色NAE陽性反應(yīng)。91精選ppt第91頁

NAS-DCE：

M1弱(+)/M2(+)/M3強(qiáng)(+)，M5/ALL(－)；

α-NBE：

M5(+)NaF抑制，M1/M2/M3/ALL(－)；

α-NAE/NAS-DAE：

M5強(qiáng)(+)NaF抑制

M3強(qiáng)(+)/M1M2a/ALL(+)NaF不抑制。

92精選ppt第92頁五、過碘酸-希夫反應(yīng)

(糖原染色)

（periodicacid-Schiffreaction，PAS）93精選ppt第93頁雙醛基過碘酸希夫試劑中無色品紅

紫紅色化合物(附于含多糖類胞漿內(nèi))乙二醇基(多糖類物質(zhì)具有)氧化【原理】94精選ppt第94頁

過碘酸是氧化劑，使具有乙二醇基多糖類物質(zhì)(糖原、糖蛋白、糖脂、粘多糖等)氧化，形成雙醛基。醛基與Schiff’s液中無色品紅結(jié)合，使無色品紅變成紫紅色化合物，定位于含多糖類細(xì)胞內(nèi)。

一、原理95精選ppt第95頁【成果判斷】陽性胞漿內(nèi)紅色陽性物呈彌散狀、顆粒狀或塊狀。陰性胞漿內(nèi)無色或無顆粒,核淡綠。

96精選ppt第96頁97精選ppt第97頁98精選ppt第98頁

1.粒細(xì)胞系統(tǒng)：（陽性逐漸增強(qiáng)）

原始粒C（－）或（+）早幼粒C~成熟中性粒C（+）：

細(xì)顆粒均勻紅色嗜酸粒C：顆粒不著色，胞質(zhì)呈紅色。嗜堿粒C：顆粒陽性，胞質(zhì)不著色。

二、正常血細(xì)胞染色反應(yīng)99精選ppt第99頁

2.單核細(xì)胞系統(tǒng)：分化差（－）其他（+），

粗顆粒狀。3.淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：多數(shù)（－）少數(shù)（+），粗顆?；驂K狀。

4.紅細(xì)胞系統(tǒng)：（－），病理情況可（+）。

5.巨核細(xì)胞系統(tǒng)：（+），顆粒狀或塊狀。

6.其他細(xì)胞：漿細(xì)胞（－），巨噬細(xì)胞（+）100精選ppt第100頁a粒細(xì)胞、b巨核細(xì)胞、c單核細(xì)胞、d幼紅細(xì)胞101精選ppt第101頁三、成果判斷

1.粒細(xì)胞系統(tǒng)：

紅色、彌散狀。多種細(xì)胞陽性反應(yīng)強(qiáng)弱不一樣

2.淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：

粗顆粒狀、小塊狀、大塊狀紅色。102精選ppt第102頁1、+2、++3、+++4、++++5、－103精選ppt第103頁

3.紅細(xì)胞系統(tǒng)：

均勻紅色或塊狀

4.單核細(xì)胞系統(tǒng)：

粗顆粒狀

5.巨核細(xì)胞和血小板：

顆粒狀、塊狀。104精選ppt第104頁1.巨核細(xì)胞和血小板陽性105精選ppt第105頁

1.幫助鑒別巨幼細(xì)胞性貧血和骨

髓增生異常綜合征、紅白血病:

前者（－），后二者（+）。四、臨床意義106精選ppt第106頁107精選ppt第107頁急性淋巴細(xì)胞白血病PAS染色原始、幼稚淋巴細(xì)胞均陽性，呈粗顆粒狀陽性108精選ppt第108頁109急淋PAS陽性細(xì)胞109精選ppt第109頁110PAS陽性幼紅細(xì)胞110精選ppt第110頁

2.幫助鑒別急性白血病細(xì)胞類型：

急淋：（+）呈粗顆粒狀或塊狀。

急粒：（+）細(xì)顆粒狀或均勻紅色。

急單：（+）細(xì)顆粒狀，均勻分布，有時(shí)胞質(zhì)邊緣顆粒較粗大。

111精選ppt第111頁

3.其他細(xì)胞：

骨髓轉(zhuǎn)移性腺癌細(xì)胞細(xì)胞呈強(qiáng)陽性

霍奇金淋巴瘤RS細(xì)胞多呈陰性或弱陽性

戈謝細(xì)胞呈強(qiáng)陽性尼曼-皮克細(xì)胞多呈陰性或弱陽性112精選ppt第112頁CLLALL113精選ppt第113頁

六、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色

（neutrophilicalkaline

phosphatase，NAP）114精選ppt第114頁磷酸萘酚鈉（基質(zhì)中）中性粒細(xì)胞胞漿中NAP磷酸鈉α-萘酚

重氮鹽（堅(jiān)牢藍(lán)鹽RR）＋紫黑色偶氮染料

（胞漿中）水解【原理】Kaplow偶氮偶聯(lián)法115精選ppt第115頁【成果判斷】

胞漿中有紫黑色顆粒為陽性(+~++++）116精選ppt第116頁【正常血細(xì)胞染色反應(yīng)】中性成熟粒細(xì)胞陽性反應(yīng)NAP主要存在于成熟中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中。嚴(yán)重化膿性感染時(shí)，晚幼階段粒細(xì)胞也可見有陽性反應(yīng)。2.其他細(xì)胞基本呈陰性反應(yīng)

117精選ppt第117頁118精選ppt第118頁

NAP染色反應(yīng)強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)：

（－）：胞質(zhì)中無顆粒；（＋）：胞質(zhì)含少許顆粒，約占1/4；（＋＋）：胞質(zhì)含中等量顆粒，約占1/2；（＋＋＋）

：胞質(zhì)含較多顆粒，約占3/4；

（＋＋＋＋）：胞質(zhì)充滿顆粒，無空隙。119精選ppt第119頁

2.NAP積分值計(jì)數(shù)100個(gè)成熟中性粒細(xì)胞（桿狀和分葉）,分別統(tǒng)計(jì)其分級(jí)情況：

120精選ppt第120頁(-)0分(+)1分(++)2分(+++)3分(++++)4分

陽性率所有陽性反應(yīng)細(xì)胞之和

積分值多種陽性程度細(xì)胞分值之和121精選ppt第121頁

NAP染色成果報(bào)告包括陽性率和積分值。陽性率：指計(jì)數(shù)100個(gè)中性成熟粒細(xì)胞，其陽性細(xì)胞數(shù)量即為陽性率；積分值：指計(jì)數(shù)100個(gè)中性成熟粒細(xì)胞，不一樣陽性程度細(xì)胞數(shù)量乘以其陽性程度之和即為積分值，其計(jì)算公式為：積分值=(＋)數(shù)量×1+(＋＋)數(shù)量×2+(＋＋＋)數(shù)量×3+(＋＋＋＋)數(shù)量×4。

2.NAP染色成果報(bào)告：122精選ppt第122頁例：4分占20%

4×20=80分3分占40%

3×40=120分2分占18%

2×18=36分1分占10%

1×10=10分0分占12%

0×12=0分陽性率88%積分=246分123精選ppt第123頁124精選ppt第124頁0級(jí)0胞漿呈原色，無顆粒。Ⅰ級(jí)+胞漿呈淺灰色，細(xì)小藍(lán)黑色顆粒占胞漿面積25%～50%。

Ⅱ級(jí)++胞漿呈棕色片狀沉淀，小到中等顆粒約占胞漿面積50%～75%。125精選ppt第125頁Ⅲ級(jí)+++胞漿充滿棕黑色沉淀，分布均勻，中到大顆粒占胞漿面積75%－100%。

Ⅳ級(jí)++++胞漿充滿深黑色致密團(tuán)塊狀沉淀，甚至遮蓋胞核，中到大顆粒占胞漿面積l00%。

126精選ppt第126頁127精選ppt第127頁

3.參照范圍：

中性粒細(xì)胞NAP陽性率：＜40%

NAP積分為：30~130分128精選ppt第128頁【臨床評(píng)價(jià)】（1）細(xì)菌性感染與病毒性感染

（尤其是化膿性感染）

顯著增加無顯著變化129精選ppt第129頁

四、臨床意義

1.生理性變化：應(yīng)激狀態(tài)、妊娠、新生兒等。

2.病理性變化：

(1)NAP

：細(xì)菌性感染、慢粒(加、急)、急

淋、慢淋、惡性淋巴瘤、轉(zhuǎn)移癌、

骨纖、真紅、再障、原發(fā)性血小

板增多癥、使用糖皮質(zhì)激素等。130精選ppt第130頁

3.疾病鑒別：

(1)類白與慢粒:前者

后者

(2)慢粒慢性期與慢性中性粒細(xì)胞白血病：

前者

后者

(3)細(xì)菌性感染與病毒性感染/寄生蟲感染：前者

后二者正?；?/p>

(2)NAP：慢粒(慢)、PNH、MDS、惡組等。131精選ppt第131頁

(6)惡組與反應(yīng)性組織細(xì)胞增多癥：前者

后者常

(7)急性白血病類型：

急性髓細(xì)胞

急淋

(4)慢粒病情觀測(cè)：

(5)再障與陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿：

前者

后者

132精選ppt第132頁CML類白133精選ppt第133頁(2）類白血病反應(yīng)與慢性粒細(xì)胞白血病顯著增加顯著下降且常為零分，緩和時(shí)又上升到正常134精選ppt第134頁五、應(yīng)用評(píng)價(jià)NAP染色有多種檢測(cè)辦法，國際標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)推薦Kaplow萘酚AS-BI磷酸鈉法和Tomonaga萘酚AS-MX磷酸鈉法。鈣-鈷法試劑成本低廉，操作繁瑣，反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，臨床上逐漸被偶氮偶聯(lián)法取代，陽性產(chǎn)物色澤鮮明、定位精確，尤其以萘酚AS-BI磷酸鈉法最為廣泛使用，利于評(píng)定NAP活性強(qiáng)度分級(jí)。常用重氮鹽有堅(jiān)牢藍(lán)RR、堅(jiān)牢藍(lán)BB、堅(jiān)牢紫醬等，不一樣偶聯(lián)有不一樣敏捷度。

135精選ppt第135頁七、酸性磷酸酶染色(acidphosphatase，ACP)一、原理1.Gomori硫化鉛法136精選ppt第136頁棕黑色pH5.0137精選ppt第137頁

2.偶氮偶聯(lián)法(常用)六偶氮付品紅——棕紅色沉淀磷酸萘酚AS-BI

萘酚AS-BI棕紅色沉淀

ACPPh5.0重氮鹽138精選ppt第138頁139精選ppt第139頁

3.抗酒石酸酸性磷酸酶染色（一組同工酶）兩張相同標(biāo)本涂片+兩份基質(zhì)液(加L-酒石酸，不加L-酒石酸)ACP染色耐L-酒石酸兩份（+）不耐L-酒石酸不加L-酒石酸（+）加L-酒石酸（－）140精選ppt第140頁

二、正常血細(xì)胞染色反應(yīng)粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨核細(xì)胞、血小板、漿細(xì)胞、巨噬細(xì)胞均呈陽性反應(yīng)。141精選ppt第141頁

三、臨床評(píng)價(jià)

1.診斷多毛細(xì)胞白血病多毛細(xì)胞白血?。海?），不被L-酒石酸抑制。慢淋和惡性淋巴瘤細(xì)胞:

（+），被L-酒石酸抑制。142精選ppt第142頁多毛細(xì)胞白血病慢性淋巴細(xì)胞白血病143精選ppt第143頁抗酒石酸酸性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色多毛細(xì)胞白血病144精選ppt第144頁多毛細(xì)胞白血病抗L-酒石酸ACP陽性145精選ppt第145頁

2.鑒別戈謝(Gaucher)細(xì)胞和尼曼-匹

克(Niemann-Picks)細(xì)胞：

前者（+）后者（－）

3.鑒別T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞：

前者（+）后者（－）

146精選ppt第146頁Gaucher’scell147精選ppt第147頁八.細(xì)胞化學(xué)染色綜合分析148精選ppt第148頁四種常見急性白血病細(xì)胞化學(xué)染色成果項(xiàng)目M3M1/M2M5ALLPOX強(qiáng)陽性陽性/陰性弱陽性/陰性陰性