黃藥子醇提物對小鼠急性毒性試驗(yàn)

黃藥子醇提物對小鼠急性毒性試驗(yàn)

黃藥子是甘薯科的一個(gè)單帶。它的味道又苦又冷。它具有解粘液、軟化、固體結(jié)、清熱解毒、冷血止血的作用?？诜胱繛?0.15克。11.1黃藥子醇提物昆明種小鼠,雌雄各半,體質(zhì)量(20±2)g,SPF級,共94只。購于河南省實(shí)驗(yàn)動物中心,生產(chǎn)許可證號SCXK(豫)2010-0002。于鄭州大學(xué)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物房適應(yīng)1周后開始試驗(yàn),實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號SYXK(豫)2010-0002。黃藥子飲片購自河南省老百姓大藥房,經(jīng)鄭州大學(xué)藥學(xué)院劉若庸教授鑒定認(rèn)為來源于黃獨(dú)(DioscoreabulbiferaL.)的塊莖。黃藥子醇提物由鄭州大學(xué)新藥研發(fā)中心制備,方法為:黃藥子飲片打碎成粗粉,加10倍量75%乙醇浸泡30min后,加熱回流提取2h,傾出藥液,殘?jiān)偌?0倍量75%乙醇重復(fù)回流提取3次。合并4次提取液,減壓濃縮至浸膏,-80℃冷凍干燥至黃色粉末,1g黃藥子醇提物相當(dāng)于飲片6.31g。臨用前采用0.6%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)溶液配成所需濃度。DJ-5000C電子天平,中外合資亞太電子天平廠。1.2方法1.2.1給藥后觀察結(jié)果①首次預(yù)試取小鼠12只,按體質(zhì)量、性別分層隨機(jī)法分為3組,每組4只,雌雄各半。以1∶0.5作為黃藥子醇提物劑量等比級數(shù),預(yù)試1、2、3組劑量依次為:20.00,10.00,5.00g/kg。給藥容量為40mL/kg。禁食(不禁水)12h后1次性ig,給藥后記錄動物的即時(shí)反應(yīng)并連續(xù)觀察7d。結(jié)果見表1。從表1可見,小鼠死亡率(P)為100%的劑量(Dm)為20.00g/kg;10.00g/kg劑量組動物1只死亡,2只動物觀察期內(nèi)活動少、精神萎靡、毛色無華,至觀察期末均呈瀕死狀。5.00g/kg劑量組動物在給藥后至觀察期末均未見明顯異常癥狀出現(xiàn),P=0%。為進(jìn)一步收集小鼠對黃藥子醇提物10.00g/kg劑量的耐受性信息,同時(shí)對P=0%的劑量(Dn)作進(jìn)一步確證,故進(jìn)行了二次預(yù)試驗(yàn)。②末次預(yù)試取12只小鼠按體質(zhì)量、性別分層隨機(jī)法分為3組,每組4只,雌雄各半;黃藥子醇提物劑量等比級數(shù)1∶0.65。預(yù)試1、2、3組的劑量依次為:10.00,6.50,4.26g/kg。禁食(不禁水)12h后,各組仍按40mL/kg1次性灌胃,給藥后記錄動物的即時(shí)反應(yīng)并連續(xù)觀察7d。結(jié)果可見,以10.00g/kg的劑量灌胃后,1.2.2單次給藥劑量根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,按Bliss法設(shè)計(jì),在Dm和Dn的劑量范圍內(nèi)(含Dm和Dn)設(shè)6個(gè)劑量,即20.00、16.00、12.80、10.24、8.19、6.55g/kg,分別依次作為給藥1、2、3、4、5、6組的黃藥子醇提物的劑量。通過計(jì)算22.1u3000活化小鼠單次灌胃黃藥子醇提物不同劑量后,多數(shù)動物出現(xiàn)消瘦,豎毛,呼吸急促,精神萎靡等異常反應(yīng)。隨時(shí)間推移,給藥3、4組存活小鼠在7d后,給藥5、6組存活小鼠在3d后異常體征趨向恢復(fù)。小鼠死亡時(shí)間集中在1～3d。其中,0～1d死亡1只,1～3d死亡23只,3～7d死亡8只,7～14d死亡1只。剖檢結(jié)果顯示,0～3d死亡小鼠胃內(nèi)見藥物結(jié)塊,肝臟呈不同程度的淺黃色,余未見明顯異常;3～7d死亡小鼠肝臟腫大,呈不同程度的淺黃色,紋理粗糙;14d時(shí)各給藥組存活小鼠剖檢各臟器未見明顯異常。陰性對照小鼠體征和剖檢均未見異常。2.2體重體量給藥前(0d)各組小鼠體質(zhì)量比較均無顯著性差異(2.3量-毒關(guān)系檢測試驗(yàn)結(jié)束后,統(tǒng)計(jì)各組動物死亡率(P),根據(jù)表3中的數(shù)據(jù)可看出,給藥1、2組的P值均為100%,給藥6組的P值為10%,呈現(xiàn)一定的量-毒關(guān)系。用Bliss軟件計(jì)算黃藥子醇提物L(fēng)D回歸方程y(Probit)=-3.2306+8.4889Log(D)LDLDLDLD3動物異常體征恢復(fù)的時(shí)間本實(shí)驗(yàn)按Bliss法設(shè)計(jì),測得黃藥子醇提物L(fēng)D單次灌胃黃藥子醇提物不同劑量后,多數(shù)動物出現(xiàn)消瘦,豎毛,呼吸急促,精神萎靡等異常反應(yīng)。隨時(shí)間推移,動物異常體征恢復(fù)的時(shí)間各給藥組有所差異:給藥3,4組存活小鼠在7d后,給藥5,6組存活小鼠在3d后異常體征趨向恢復(fù)。試驗(yàn)同時(shí)發(fā)現(xiàn),各給藥組存活小鼠在給藥后體質(zhì)量總體較陰性對照組增長緩慢;經(jīng)14d的恢復(fù),存活