HIV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)課件

HIV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)實(shí)習(xí)生：葉貝2017/4/28HIV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)實(shí)習(xí)生：葉貝1HIV病原學(xué)及流行病學(xué)特點(diǎn)HIV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法羅氏第四代HIV檢測(cè)試劑特點(diǎn)目錄HIV病原學(xué)及流行病學(xué)特點(diǎn)HIV實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法羅氏第四代HI2HIV病原學(xué)HIV人類免疫缺陷病毒，由包膜及核心組成，為RNA病毒HIV核心部分包括兩條單股RNA鏈，核心結(jié)構(gòu)蛋白及復(fù)制所需酶類（蛋白酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶）HIV病毒逆轉(zhuǎn)錄酶無校對(duì)功能，故病毒變異性強(qiáng)，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果假陰性HIV病原學(xué)HIV人類免疫缺陷病毒，由包膜及核心組成，為RN3HIV病原學(xué)病毒識(shí)別易感細(xì)胞膜表面受體，在逆轉(zhuǎn)錄酶作用下由RNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA經(jīng)DNA轉(zhuǎn)錄及翻譯后形成蛋白外殼，將病毒RNA包裹其中，生成新的HIV主要侵入T淋巴細(xì)胞及神經(jīng)細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞免疫功能缺陷，增加機(jī)會(huì)性感染HIV病原學(xué)病毒識(shí)別易感細(xì)胞膜表面受體，在逆轉(zhuǎn)錄酶作用下由R4HIV流行病學(xué)全國呈低流行態(tài)勢(shì)，部分地區(qū)疫情嚴(yán)重HIV主要分為兩種HIV-1和HIV-2兩型；HIV-1類為全球主要流行類型，分為M、

O、N三個(gè)亞型組HIV流行病學(xué)全國呈低流行態(tài)勢(shì)，部分地區(qū)疫情嚴(yán)重HIV主要分5HIV傳播途徑1、傳染源：病人及無癥狀攜帶者血液、精子、子宮和陰道分泌物、唾液、眼淚和乳汁等傳播2、傳播途徑性傳播：同行、異性、雙性性接觸母嬰傳播：經(jīng)胎盤、分娩及哺乳時(shí)傳播血液制品傳播：共用針具靜脈注射毒品，介入性醫(yī)療操作，紋身，耳洞等

HIV傳播途徑1、傳染源：病人及無癥狀攜帶者2、傳播途徑6HIV感染自然史急性期艾滋病期無癥狀期初次感染HIV2-4周，傳染性最強(qiáng)主要以發(fā)熱、關(guān)節(jié)痛、淋巴結(jié)腫大為特征可檢出HIV及p24抗原，CD4+/CD8+倒置可持續(xù)6-8年，HIV在感染者體內(nèi)不斷復(fù)制，具有傳染性可檢測(cè)HIV及抗體，CD4+T淋巴續(xù)保逐漸下降HIV感染最終階段，HIV血漿病毒載量明顯升高，CD4+T淋巴細(xì)胞<200個(gè)/ul主要表現(xiàn)為各種機(jī)會(huì)性感染及腫瘤HIV感染自然史急性期艾滋病期無癥狀期初次感染HIV2-47血清學(xué)檢測(cè)備注HIV抗體篩查試驗(yàn)：ELISA,CIA,ECLIA確證試驗(yàn)：WB,RIBA僅測(cè)抗體HIVp24抗原早期靈敏度更高HIV抗原+抗體HIVAg/AbcombiPT:ELISA,ECLIA,CIA核酸檢測(cè)備注HIVRNA定性輔助確證試驗(yàn)Taqman熒光實(shí)時(shí)PCR試劑HIVRNA定量輔助確證試驗(yàn)，監(jiān)測(cè)治療效果與疾病進(jìn)展靶核酸擴(kuò)增試劑淋巴細(xì)胞檢測(cè)備注CD4+和CD8+

HIV感染分期，抗病毒治療指針CD4+/CD8+比值下降HIV實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)初篩試驗(yàn)+確證試驗(yàn)血清學(xué)檢測(cè)備注HIV抗體篩查試驗(yàn)：ELISA,CIA,E8HIV檢測(cè)流程全國艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范-2015年修訂版檢測(cè)流程初篩試驗(yàn)篩查復(fù)檢HIV檢測(cè)流程全國艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范-2015年修訂版檢測(cè)流9HIV檢測(cè)流程全國艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范-2015年修訂版檢測(cè)流程確證試驗(yàn)確證僅能檢測(cè)HIV-1，不能檢測(cè)HIV-2和HIVAg，靈敏度有限，窗口期長，易錯(cuò)過早期感染樣本

試劑成本高，操作繁瑣，結(jié)果判定主觀HIV檢測(cè)流程全國艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范-2015年修訂版檢測(cè)流10HIV檢測(cè)流程初始反應(yīng)必須使用抗原和抗體聯(lián)合檢測(cè)的第四代免疫學(xué)方法，這類方法可以同時(shí)檢測(cè)HIV-1抗體、HIV-2抗體和HIVp24抗原，檢測(cè)出HIV-1、HIV-2感染和急性HIV-1感染，初始檢測(cè)無反應(yīng)性則無需進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)初始反應(yīng)陽性標(biāo)本需經(jīng)過FDA批準(zhǔn)的抗體鑒別試劑進(jìn)行HIV-1和HIV-2抗體鑒別試驗(yàn)，結(jié)果以HIV-1抗體陽性、HIV-2抗體陽性、HIV抗體陽性或無法鑒別來解釋初始檢測(cè)有反應(yīng)，抗體鑒別檢測(cè)無反應(yīng)性或不明確標(biāo)本須經(jīng)HIV-1核酸檢測(cè)，HIV-1NAT有反應(yīng)性而抗體鑒別無反應(yīng)性為急性HIV-1感染；HIV-1NAT有反應(yīng)性而抗體鑒別試驗(yàn)不明確為HIV-1感染；HIV-1NAT無反應(yīng)性而抗體鑒別不明確為假陽性結(jié)果聯(lián)合試驗(yàn)鑒別試驗(yàn)核酸試驗(yàn)美國CDC推薦HIV檢測(cè)流程2014修訂版HIV檢測(cè)流程初始反應(yīng)必須使用抗原和抗體聯(lián)合檢測(cè)的第四代免疫11HIV檢測(cè)HIV感染后首先檢測(cè)到HIVRNA第四代HIV檢測(cè)試劑檢測(cè)到HIVp24抗原，為抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)第三代及其以前的試劑均為只檢測(cè)HIV抗體HIV-1/2/O抗體HIV-1/2/O抗體+HIVp24抗原HIV檢測(cè)HIV感染后首先檢測(cè)到HIVRNA第四代HIV檢123rd

代抗體檢測(cè)核酸檢測(cè)方法4th

代抗原抗體檢測(cè)周年243567891012435601789p24抗原檢測(cè)p24抗原檢測(cè)從初始感染后的時(shí)間無癥狀期急性期第一個(gè)血清轉(zhuǎn)換窗口期核酸檢測(cè)方法第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)法Elecsys

?HIVcombiPT羅氏HIV試劑艾滋病期縮短檢測(cè)窗口期，早期診斷2nd

代抗體檢測(cè)3rd代抗體檢測(cè)核酸檢測(cè)方法4th代抗原抗體檢測(cè)周年2413SeroconversionpanelElecsysHIVcombiPTElecsysHIVcombiADVIACentaurHIVAg/AbcomboARCHITECTHIVAg/AbcomboVIRONOSTIKA?HIVUniv-FormIIplusOZhuhaiLivzonanti-HIVSerodia?HIV1/2PRB9300440888PRB9588NANA8NANANANabi07590000NA48Nabi143600NA0999Nabi40090NA003NANANabi900366NA610610Nabi251650000NA44第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)法Elecsys

?HIVcombiPT羅氏HIV試劑縮短檢測(cè)窗口期，早期診斷ElecsysHIVCombiPT陽轉(zhuǎn)時(shí)間較PCR方法平均晚2天，早于或等于其它方法與三種第三代檢測(cè)方法相比，ElecsysCombiPT是1.2days，優(yōu)于ElecsysHIVcombi(2.0days),ZhuhaiLivzonanti-HIV(6.2days)andSerodia?

HIV1/2(7.8days).與ADVIACentaur相比,theElecsysHIVcombiPT’s的檢出時(shí)間是0days，ADVIACentarur’s(1.0days).與VIRONOSTIKA?HIVUniv-FormIIplusO相比，ElecsysHIVcombiPT’s是1.5days，VIRONOSTIKA?HIVUniv-FormIIplusO’s(7.5days).SeroconversionElecsysHIVElec14羅氏HIV試劑第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)法Elecsys

?HIVcombiPT縮短檢測(cè)窗口期，早期診斷5.478days(Roche,dataonfile)羅氏HIV試劑第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)法Elecs15羅氏HIV試劑第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)法Elecsys

?HIVcombiPT=診斷相關(guān)蛋白p24gp120gp41/gp36p17（基質(zhì)蛋白）RT(逆轉(zhuǎn)錄酶)RNAP24抗原是HIV病毒的核心蛋白HIV-Ag的檢測(cè)HIV-Ab的檢測(cè)膜蛋白羅氏HIV試劑第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)法Elecs16羅氏HIV試劑第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)法Elecsys

?HIVcombiPT包含檢測(cè)物功能抗原檢測(cè)p24module1p24Ag早期檢測(cè)HIV感染及終末期感染p24module2p24Ag檢測(cè)O亞型以及HIV-2抗體檢測(cè)gp41module1HIV-1IgMandIgG

確保HIV-1的檢測(cè)高靈敏gp36module1HIV-2IgMandIgG確保HIV-2的檢測(cè)高靈敏HIV-1RTHIV-1IgG確保檢測(cè)所有HIV亞型的安全性HIV-2RTHIV-2IgG檢測(cè)所有HIV亞型的安全性gp41module2HIV-1subtypeO確保檢測(cè)O亞型的靈敏度gp36module2HIV-2IgG

確保檢測(cè)HIV-2的備份緩沖液添加抗干擾物質(zhì)避免干擾可識(shí)別所有亞型羅氏HIV試劑第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)法Elecs17羅氏HIV試劑可識(shí)別所有亞型第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)法Elecsys

?HIVcombiPT6198472羅氏HIV試劑可識(shí)別第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)法El18羅氏HIV試劑第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)法Elecsys

?HIVcombiPT9min9min9min預(yù)處理裂解出p24抗原Ag-Ab復(fù)合物磁珠加入共27min孵育,測(cè)量池檢測(cè)夾心法形成免疫復(fù)合物羅氏HIV試劑第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)法Elecs19羅氏HIV試劑第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)法Elecsys

?HIVcombiPT早期感染血清轉(zhuǎn)換期的檢測(cè)不同時(shí)期HIV感染病人的檢測(cè)高靈敏度不同亞型的檢測(cè)羅氏HIV試劑第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)法Elecs20Elecsys?HIVcombiPTARCHITECT?HIVAg/AbcomboADVIACentaur?HIVAg/AbcomboElecsys?HIVcombiZhuhaiLizhuanti-HIVEIAVIRONOSTIKA?HIVUniv-FormIIplusOTotalnumber4,4652,7511,039675675703IR(≥1s/co)51505102Confirmedpositive45440002Numberoffalsepositives*665100Specificity(IR,≥1s/co)99.86%99.78%99.52%99.85%100.00%100.00%95%confidencelimit(IR,≥1s/co)99.71–99.9599.52–99.9298.88–99.8499.18–100.0099.45–100.0099.48–100.00羅氏HIV試劑第四代HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)法Elecsys

?HIVcombiPT高特異性Elecsys?HIVcombiPTARCHITECT21羅氏HIV試劑排除類風(fēng)濕因子、自身抗體、單克隆丙種球蛋白、EB病毒抗體、巨細(xì)胞病毒抗體、單純皰疹病毒抗體、流感疫苗等非特異性干擾、抗干擾能力強(qiáng)高特異性羅氏HIV試劑排除類風(fēng)濕因子、自身抗體、單克隆丙種球蛋白、E22Case分享RENXXMen29YDayssincefirstbleedHIVCombiPT(COI)HIVCombi(COI)ELISA(S/CO)HIVRNA（高精分析）WB0102011/08/01/4.41/4.05(POS)0.04(NEG)/P24(不確定)021342011/12/12/4.49(POS)0.01(NEG)HIVRNA(NEG)P24(不確定)羅氏HIVCombi試劑2次均出現(xiàn)陽性結(jié)果，P24抗原也均出現(xiàn)條帶，但HIV-RNA分析病毒為陰性，最終報(bào)告為陰性，該患者實(shí)為淋巴瘤，分析時(shí)注意干擾因素淋巴瘤患者、孕婦、腫