溫濕度和干燥條件下白紋伊蚊卵孵化率的變化

溫濕度和干燥條件下白紋伊蚊卵孵化率的變化

白臉病毒是40多年來最具入侵性的疾病之一。它可以傳播各種疾病，如登格熱、基孔齊亞熱和寨卡病毒。1材料和方法1.1體白紋伊蚊hc蚊產(chǎn)卵雌蚊來自具有廣州本地遺傳背景的三重感染沃爾巴克氏體白紋伊蚊（簡稱HC蚊）。雌蚊交配后喂血，喂血3d后放產(chǎn)卵杯，產(chǎn)卵3d后收集產(chǎn)卵紙，挑出雜物，把產(chǎn)卵紙放入一次性杯子中。蚊卵由廣州威佰昆生物科技有限公司提供。1.3孵化液的制備稱酵母蛋白胨3g，加入500mL純水，溶解后放入4℃冰箱密封保存，使用前稀釋10倍。1.4不同濕度的測定將放有產(chǎn)卵紙的一次性杯子分別放入對應(yīng)溫度的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中，設(shè)置3種不同的溫度（21、27、33℃），每個溫度設(shè)置3個重復(fù)，培養(yǎng)箱相對濕度均為（75±5）%，產(chǎn)卵紙相對濕度為30%～35%。每天測量產(chǎn)卵紙的濕度，進(jìn)行開蓋通風(fēng)和加濕處理。在產(chǎn)卵后7和14d時，用毛筆從產(chǎn)卵紙上輕輕掃下約1000粒卵，在顯微鏡下統(tǒng)計卵數(shù)，然后加入30mL孵化液，在27℃條件下孵化，24h后統(tǒng)計和記錄幼蟲數(shù)，最后計算蚊卵孵化率。1.5不同濕度的復(fù)合測定將恒溫恒濕培養(yǎng)箱溫度設(shè)置為（27±1）℃，濕度設(shè)置為（75±5）%，產(chǎn)卵紙分別保持3種不同的濕度（0%～5%、15%～20%、30%～35%），在產(chǎn)卵紙達(dá)到相應(yīng)的濕度時，蓋上保鮮膜，放入培養(yǎng)箱中，每天測量產(chǎn)卵紙的濕度，進(jìn)行開蓋通風(fēng)。每個濕度設(shè)置3個重復(fù)，每個重復(fù)約1000粒卵。產(chǎn)卵后7和14d統(tǒng)計蚊卵孵化率，方法同1.4。1.6濕度的測量將恒溫恒濕培養(yǎng)箱溫度設(shè)置為（27±1）℃，濕度設(shè)置為（75±5）%，當(dāng)產(chǎn)卵紙濕度達(dá)到15%～20%時，蓋上保鮮膜，對照組為不蓋保鮮膜，把放有產(chǎn)卵紙的一次性杯子放入培養(yǎng)箱中，每2d測量產(chǎn)卵紙的濕度，進(jìn)行通風(fēng)處理。每周孵化蚊卵，共統(tǒng)計8周的孵化率，方法同1.4，每個實驗組和對照組均設(shè)置3個重復(fù)。1.7統(tǒng)計分析采用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料以%表示，符合正態(tài)分布的計量資料以2結(jié)果2.1不同溫度對白紋伊蚊產(chǎn)卵7、14d后不同溫度下平均孵化率的影響產(chǎn)卵紙相對濕度在30%～35%條件下，白紋伊蚊產(chǎn)卵7、14d后不同溫度（21、27、33℃）下平均孵化率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表1。2.2．20%、30%35%，平均孵化率溫度在27℃條件下，白紋伊蚊產(chǎn)卵7d后，不同濕度（0%～5%、15%～20%、30%～35%）下平均孵化率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；而在產(chǎn)卵14d后，0%～5%的相對濕度下的蚊卵孵化率高于15%～20%、30%～35%的相對濕度，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。2.3不同涂膜的平均孵化率隨著儲存時間的延長，蚊卵孵化率不斷下降，不蓋保鮮膜比蓋保鮮膜孵化率下降的更快。從產(chǎn)卵后28d開始，蓋保鮮膜與不蓋保鮮膜的平均孵化率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表3。蓋保鮮膜的平均孵化率在28d時維持在79.39%，到53d時下降到50%；而不蓋保險膜的平均孵化率從14d之后就開始下降，在28d時，已下降到50%。3蚊媒和蚊卵的保存方式及溫度對卵石等的影響在中國內(nèi)陸，白紋伊蚊是傳播登革熱的主要媒介。在2014年，廣東省暴發(fā)登革熱，實驗室確診共45224例登革熱病例沃爾巴克氏體屬于革蘭陰性胞內(nèi)共生菌，具有胞質(zhì)不相容和經(jīng)卵傳遞等特性。胞質(zhì)不相容（cytoplasmicincompatibility,CI）是指感染沃爾巴克氏體的雄蚊與不感染或感染不同類型的沃爾巴克氏體雌蚊交配后，雌蚊產(chǎn)卵不孵化，而感染沃爾巴克氏體的雌蚊不管與感染或不感染的雄蚊交配后，后代都攜帶沃爾巴克氏體的現(xiàn)象?；诎|(zhì)不相容這一特性，可建立兩種控制蟲媒病的策略。一種策略是種群替換（populationreplacement），這是一種類似于蚊媒接種疫苗的方法，此策略最早被用來控制埃及伊蚊。Hoffman等在大規(guī)模生產(chǎn)不育雄蚊的過程中，白紋伊蚊卵如何保存是目前亟待解決的問題之一。已有研究表明岡比亞按蚊卵在4℃和相對濕度為（48±2）%的條件下可以儲存5d,5d后孵化率有明顯的下降本研究的主要目的在于：(1)找到合適的溫濕度使得白紋伊蚊卵保存時間長，節(jié)約生產(chǎn)成本；(2)找到一種簡便有效的卵儲存方法。由于在白紋伊蚊大規(guī)模生產(chǎn)過程中，蚊卵是產(chǎn)在濾紙上，所以相比空氣的濕度，產(chǎn)卵紙的濕度對卵的發(fā)育影響更大。故本研究的主要關(guān)注點在溫度和產(chǎn)卵紙濕度上。本課題組首先研究了溫度對白紋伊蚊卵孵化率的影響，結(jié)果表明在產(chǎn)卵后14d內(nèi)溫度在21～33℃的范圍內(nèi)卵孵化率沒有明顯的變化。而濕度對卵孵化率的影響較大，濕度在4%～6%時，孵化率在28d時已下降到50%；而濕度15%～20%時，在28d的時候孵化率依然維持在79.39%。研究發(fā)現(xiàn)濕度在30%～35%時，盡管孵化率沒有下降，但會造成產(chǎn)卵紙發(fā)霉，卵提前破殼的現(xiàn)象，對后續(xù)生產(chǎn)造成很大的影響。綜合上述研究結(jié)果得出溫度27℃，產(chǎn)卵紙相對濕度15%～20%，卵在1個月的時間內(nèi)卵孵化率維持不變。本研究還使用一種簡便的方法保存卵，在一次性杯子上蓋保鮮膜，這樣可以保持產(chǎn)卵紙的濕度，不用擔(dān)心產(chǎn)卵紙水分蒸發(fā)，造成濕度降低，影響卵