菊粉添加對克氏原螯蝦消化酶活性、腸道組織形態(tài)和非特異性免疫能力的影響

菊粉添加對克氏原螯蝦消化酶活性、腸道組織形態(tài)和非特異性免疫能力的影響

螃蟹通常被稱為元尾蝦。因為它豐富了肌肉和美麗的肉質(zhì)，深受消費者喜愛。1材料和方法1.1飼料組成及營養(yǎng)水平試驗共配制6種等氮等能的飼料，飼料中菊粉為市售品(純度>99%)，飼料中菊粉添加水平分別為0(基礎(chǔ)飼料，對照組)、0.20%、0.40%、0.60%、0.80%和1.00%。飼料組成及營養(yǎng)水平見表1。所有原料經(jīng)粉碎后，過80目篩網(wǎng)，按照配方要求準(zhǔn)確稱量，并逐級混勻后，加入魚油、豆油和適量水，再次混勻后，經(jīng)制粒機(NBS-150)擠壓為粒徑為2mm的顆粒飼料，60℃烘干，密封袋分裝，標(biāo)記，-20℃冰箱儲存?zhèn)溆?。飼料的粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分和水分含量的測定分別采用凱氏定氮法、索氏抽提法、灼燒法與105℃恒溫烘干法。1.2克氏原螯蝦養(yǎng)殖管理試驗用克氏原螯蝦購自湖北省公安縣某小龍蝦養(yǎng)殖基地，并通過濕法運至室內(nèi)的養(yǎng)殖系統(tǒng)。在2周的室內(nèi)暫養(yǎng)期間，每天飽食投喂基礎(chǔ)飼料。正式試驗開始前禁食24h，選用規(guī)格一致[(6.58±0.16)g]、附肢齊全和活力正常的克氏原螯蝦240尾，隨機分為6個組，每組4個重復(fù)，養(yǎng)殖密度為10尾/箱，放養(yǎng)于由24個容積為84L水族箱(0.6m×0.4m×0.35m)組成的室內(nèi)養(yǎng)殖系統(tǒng)中，水位10cm，分別投喂6種飼料。每日投喂2次(09:00和18:00)，投喂量為體重的3%。試驗期間養(yǎng)殖用水為充分曝氣的自來水，每天換水1/3～1/2，用虹吸法吸出殘餌和糞便。每天觀察克氏原螯蝦健康與攝食狀況，定期檢查水質(zhì)，試驗期間水溫保持在(23±2)℃，pH為7.0～8.5，不間斷增氧，溶解氧含量≥6mg/L，自然光照。試驗期7周。1.3腸道切片檢測養(yǎng)殖試驗結(jié)束后禁食24h，每組隨機抽取3尾蝦，冰上解剖并取后腸段的中間部分固定于4%多聚甲醛溶液，委托武漢塞維爾生物科技有限公司進行腸道切片;養(yǎng)殖試驗結(jié)束后禁食24h，每組隨機抽取6尾蝦，冰上解剖其胃和肝胰腺各0.10g，用濾紙擦干其表面水分后放入EP管中，加入0.9mL預(yù)冷生理鹽水，4℃勻漿，3000r/min離心15min，吸取上清液，制成10%勻漿液，分裝，-80℃保存?zhèn)溆谩?.4腸道組織形態(tài)測量用光學(xué)顯微鏡系統(tǒng)對后腸組織切片進行觀察和拍照。記錄每張切片中所有腸道黏膜皺襞的長度和寬度。測量標(biāo)準(zhǔn)以腸道黏膜皺襞頂端至基部中線為腸道黏膜皺襞長度;以長度的中點位置作垂線交于腸道黏膜皺襞2側(cè)，2交點之間的距離為腸道黏膜皺襞寬度。1.5肝胰腺組織勻漿acp和溶菌酶lmm活性的測定胃組織勻漿的上清液用于蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性的測定;肝胰腺組織勻漿的上清液用于酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)和溶菌酶(LZM)活性的測定。所有酶活性均采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測定。1.6單因素方差分析及dunpan氏法多重比較數(shù)據(jù)經(jīng)Excel2019初步處理，再使用SPSS26.0軟件進行單因素方差分析(one-wayANO-VA)及Duncan氏法多重比較，以P<0.05表示差異顯著，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。2結(jié)果與分析2.1克氏原螯蝦胃組織中各酶活性的變化由表2可知，飼料中添加不同水平菊粉顯著影響克氏原螯蝦胃組織中消化酶活性(P<0.05)。隨著飼料中菊粉添加水平的提高，克氏原螯蝦胃組織中蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性呈現(xiàn)先升后降的變化趨勢。其中，0.40%～1.00%菊粉添加組胃組織中蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性均顯著高于對照組(P<0.05);0.20%菊粉添加組胃組織中消化酶活性與對照組相比無顯著性差異(P>0.05);0.60%菊粉添加組胃組織中蛋白酶活性最高，而0.80%菊粉添加組胃組織中淀粉酶和脂肪酶活性最高。2.2不同菊粉添加量各組腸道組織形態(tài)的變化由圖1可知，飼料中添加不同水平菊粉可以改善克氏原螯蝦腸道組織形態(tài)。與對照組相比，隨著飼料中菊粉添加水平的提高，后腸整體輪廓更為清晰，腸道黏膜皺襞形成的縱嵴數(shù)量增加;各菊粉添加組腸壁內(nèi)的結(jié)締組織更為緊密，肌層更加明顯和完整。由表3可知，飼料中添加不同水平菊粉顯著影響克氏原螯蝦后腸黏膜皺襞長度和寬度(P<0.05)。0.40%～1.00%菊粉添加組后腸黏膜皺襞長度和寬度顯著高于對照組(P<0.05);0.20%菊粉添加組后腸黏膜皺襞長度和寬度與對照組相比無顯著性差異(P>0.05);0.40%菊粉添加組后腸黏膜皺襞長度和寬度最高。2.3肝胰腺akp、acp和lgm活性的變化由表4可知，飼料中添加不同水平菊粉顯著影響克氏原螯蝦肝胰腺免疫酶活性(P<0.05)。隨著飼料中菊粉添加不同水平的提高，克氏原螯蝦肝胰腺AKP、ACP和LZM活性呈現(xiàn)先升后降的變化趨勢。0.20%～1.00%菊粉添加組肝胰腺AKP和ACP活性顯著高于對照組(P<0.05);0.40%～1.00%菊粉添加組肝胰腺LZM活性顯著高于對照組(P<0.05);0.20%菊粉添加組肝胰腺LZM活性與對照組相比無顯著性差異(P>0.05);0.60%菊粉添加組肝胰腺AKP、ACP和LZM活性均為最高。3討論3.1菊粉對原頭蝦胃組織中消化酶活性的影響消化酶活性的高低反映動物最基礎(chǔ)的消化生理特征，以及其對飼料營養(yǎng)物質(zhì)的利用能力3.2影響蝦后腸形態(tài)的因素本試驗結(jié)果表明，飼料中添加0.40%～1.00%菊粉可以改善克氏原螯蝦后腸形態(tài)結(jié)構(gòu)，其原因可能是由于菊粉發(fā)酵產(chǎn)生的短鏈脂肪酸促進了腸上皮細胞的增殖、分化和遷移，并維持腸道的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)目前，一般認為十足目動物的肝胰腺發(fā)揮著最主要的消化和吸收功能，而后腸僅具滲透調(diào)節(jié)和排糞的功能3.3菊粉對原生殖民肝胰