乙醇回流法提取姜香臍貼中木香藥材的工藝研究

乙醇回流法提取姜香臍貼中木香藥材的工藝研究

姜香肚臍貼是一種經(jīng)典的方形“平安丹”制成的抗頭暈運(yùn)動(dòng)處方。木香是姜香臍貼中重要組分,善行脾胃之氣滯,“治心腹一切氣,嘔逆反胃”(《日華子本草》)。本實(shí)驗(yàn)以木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量為指標(biāo),運(yùn)用正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行木香醇提工藝的優(yōu)化研究,以縮小劑量、提高質(zhì)量,為經(jīng)皮控釋給藥系統(tǒng)的制備提供質(zhì)量保證。1實(shí)驗(yàn)材料1.1藥品、制劑及儀器木香藥材取于本院中藥房;木香烴內(nèi)酯(CT)和去氫木香內(nèi)酯(DL)化學(xué)對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,木香烴內(nèi)酯批號(hào):111524-200503;去氫木香內(nèi)酯批號(hào):111525-200706)純度>98%;乙醇(本院制劑中心);甲醇(美國(guó)fisher公司,色譜純);重蒸水。1.2儀器和檢測(cè)方法1050series高效液相色譜儀(美國(guó)惠普公司),包括Agilent1050四元泵,G79853A紫外檢測(cè)器,Agilent1050色譜工作站;UV2100紫外檢測(cè)器(日本島津公司);真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申生科技有限公司);SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司);BS-110S型電子天平(北京賽多利斯天平有限公司);BHS-A006超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)。2方法和結(jié)果2.1hplc-pgi-u高效液相色譜法中香烴酯和脫羥基棕櫚樹酯的測(cè)定hplc2.1.1色譜柱及流動(dòng)相采用HPLC法測(cè)定。色譜柱:AgilentZORBAXEclipseDBC18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm),柱溫35℃;流動(dòng)相:甲醇-水(68∶32);流速:1.0ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):225nm;進(jìn)樣量10μl。2.1.2對(duì)照溶液的制備精密稱取木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品分別為3.8mg和4.8mg,置于10ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻備用。2.1.3微孔濾膜的制備分別精密量取1.0ml木香醇提濃縮液,置50ml容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,超聲30min,甲醇補(bǔ)足至刻度,過(guò)0.45μm微孔濾膜,待測(cè)。2.1.4回歸方程的測(cè)定精密移取上述對(duì)照品溶液各4、2、1、0.4、0.2ml,分別置于10ml容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,進(jìn)樣10μl,木香烴內(nèi)酯(1)和去氫木香內(nèi)酯(2)的回歸方程分別為:(1)A1=1.1308C1-1.7289(2)A2=0.9849C2-1.9114木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯分別在7.6~380μg/ml;9.6~480μg/ml范圍內(nèi)線性良好。2.1.5方法的精密度試驗(yàn)分別取木香烴內(nèi)酯152、76、38μg/ml去氫木香內(nèi)酯192、96、48μg/ml低、中、高3個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,每天分別測(cè)定5次,連續(xù)5天,計(jì)算日內(nèi)精密度及日間精密度。結(jié)果表明相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)<5%。2.1.6外標(biāo)法計(jì)算含量及回收率取已知含量的木香醇提濃縮樣品溶液1ml9份,按上述“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定其含量作為“原有量”,分別加入木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品各4mg、5mg、6mg,各劑量平行3份,利用外標(biāo)法計(jì)算含量及回收率,回收率在96.86%~103.11%。2.1.7樣品溶液的穩(wěn)定性樣品溶液8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好,RSD<5%。2.2醇提取工藝的優(yōu)化2.2.1正交設(shè)計(jì)對(duì)乙醇濃度、料液比(質(zhì)量:體積)、提取時(shí)間和提取次數(shù)進(jìn)行了4因素3水平的正交實(shí)驗(yàn),見(jiàn)表1。2.2.2提取實(shí)驗(yàn)方法分別稱取粉碎后的木香藥材18g,按L9(34)正交設(shè)計(jì)表?xiàng)l件分別進(jìn)行9次提取。本實(shí)驗(yàn)采用水浴回流,溫度控制在85℃。過(guò)濾后分別收集1~9號(hào)提取液,減壓回收至近干,1~3號(hào)、4~6號(hào)、7~9號(hào)分別用60%的乙醇、40%的乙醇、80%的乙醇復(fù)溶至24ml,待測(cè)。2.2.3提取工藝的確定直觀分析表明因素A對(duì)結(jié)果有極顯著影響,因素D有顯著影響,其水平優(yōu)勢(shì)為A3>A1>A2,D2>D1>D3,即最佳乙醇濃度為80%,最佳提取次數(shù)為3次;為節(jié)省溶劑用量,選擇溶劑體積的倍數(shù)為6倍;為提高提取效率,選擇提取時(shí)間為1h/次。故最后確定回流提取最佳工藝為:6倍量80%乙醇,回流提取3次,1h/次。按最佳工藝重復(fù)提取,每克木香藥材提取木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量總和為27.224mg,工藝穩(wěn)定,結(jié)果可靠,參見(jiàn)表2。3評(píng)價(jià)指標(biāo)的確定木香始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,列為上品,主要成分為揮發(fā)油、木香堿、菊糖三類物質(zhì)。揮發(fā)油是木香的主要有效部位,芳香祛穢、疏通氣機(jī),能有效發(fā)揮抗暈動(dòng)作用,以木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量最高,為木香的主要活性成分,也是木香質(zhì)量控制的主要指標(biāo)。因此本實(shí)驗(yàn)選用木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)較合理。目前中藥新藥