TSSFS 0007-2023 豆制品中嘌呤的測定 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

本標準已于2023年07月25日在上海市市場監(jiān)督管理局登記，登記號T/31230725003276310104F32772023ICS號：67.060中國標準文獻分類號：X04團 體 標 準T/SSFS0007-2023ofpurinesinbeaproductsUltraperformancechromatography-tandemmassspectrometry2023-07-18 發(fā)布 2023-08-01 實施上海市食品學會 發(fā)布T/SSFS0007-2023T/SSFS0007-2023II前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件由上海市食品學會提出、歸口并組織實施。（集團（集團T/SSFS0007-2023T/SSFS0007-2023PAGEPAGE1豆制品中嘌呤的測定超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法范圍本文件規(guī)定了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定腺嘌呤、鳥嘌呤、黃嘌呤和次黃嘌呤的方法原理、試劑和材料、儀器設(shè)備、樣品制備與保存、測定、結(jié)果計算、檢出限、定量限和精密度。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和用水方法術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。方法原理用甲酸和三氟乙酸混合溶劑水解提取豆制品中的四種嘌呤，經(jīng)100℃水浴，冷卻，離心取上清液，旋蒸至干，乙腈水溶液復溶，經(jīng)高速離心后過濾膜，用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測定，外標法定量。試劑和材料水為GB/T6682規(guī)定的一級水。試劑乙腈（HN甲酸（C2（H2氨水（NHO標準品5.21 （CHN995.22 （CHN：純度≥995.23 （CHN2995.24 （HNO99%。材料聚四氟乙烯濾膜：孔徑0.22μm，直徑13mm，有機相。溶液的配制乙腈水溶液（900mL/L）量取900.0mL乙腈（5.1.1）和100.0mL水充分混勻。標準儲備溶液（200mg/L）準確稱取腺嘌呤（5.2.1）、鳥嘌呤（5.2.2）、黃嘌呤（5.2.3）、次黃嘌呤（5.2.4）各0.01g（精確至0.01mg），用20.0mL水初步溶解，于256.0mL氨水（5.1.4）助溶，腺嘌呤、黃嘌呤和次黃嘌呤溶液各加入200.0μL氨水（5.1.4）助溶，用水分別稀釋并用容量瓶定容至50.00～42混合標準工作溶液用移液槍分別移取0.5μL、2.5μL、5.0μL、12.5μL、25.0μL、40.0μL、50.0μL的腺嘌呤、鳥嘌呤、黃嘌呤和次黃嘌呤標準儲備溶液（5.4.2）于15mL離心管中，加入2.5mL甲酸（5.1.2）和5.0mL三氟乙酸（5.1.3），渦旋混勻后置入10015min，取出立即冰浴30min，12000r/min離心10min，取清液，于6010.0mL（5.4.1）復溶，超聲助r/min離心10（質(zhì)量濃度分別為10μg/L、50μg/L、100μg/L、250μg/L、500μg/L、800μg/L和1000μg/L），待測。儀器設(shè)備超高效液相色譜儀-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜儀：配備電噴霧離子源（ESI）。0.001g0.01mg。離心機：≥12000r/min。恒溫水浴鍋：控溫精度±2超聲波清洗器。粉碎機。渦旋混合器旋轉(zhuǎn)樣品制備與保存100.0g，用粉碎機粉碎均勻后充分混勻備用，粉碎過程中避免樣品過熱。分取兩份試樣，裝入清潔容器內(nèi)，密封并標記。一份為檢樣，一份為留樣，0～4℃保存。100.0g，用組織搗碎機充分搗碎，混勻備0～4100.0mL，充分混合0～4測定樣品前處理準確稱量0.5g～2g樣品（精確至0.001g）置于50mL離心管中，加入2.5mL甲酸（5.1.2）和5.0mL三氟乙酸（5.1.3），渦旋混勻后置入100℃水浴15min，取出立即冰浴30min，12000r/min離心10min。若無沉淀產(chǎn)生，取清液收集于250mL茄形瓶中，于60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至近干；若有沉淀產(chǎn)生，取清液收集于250mL茄形瓶中，在樣品殘渣中再加入2.5mL甲酸和5.0mL三氟乙酸，重復上述操作，合并酸水解提取液，于60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至近干。準確加入10.0mL乙腈水溶液（5.4.1）復溶，超聲助溶，12000r/min離心10min，取上清液1.0mL，準確加入9.0mL乙腈水溶液（5.4.1）混勻，經(jīng)聚四氟乙烯濾膜（5.3）過濾，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。根據(jù)需要可進行稀釋。色譜參考條件色譜參考條件如下：色譜柱：HILIC（2.1mm×100mm1.9μm），或相當者；流速：0.30mL/min；c) 流動相：乙腈：水=90：10（v/v）；d) 柱溫：30e) 進樣量：2μL。質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件如下：離子化模式：電噴霧電離（ESI）；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；分辨率：單位質(zhì)量分辨率；A。定性測定表1 定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度比（%）允許的最大偏差（%）＞50±2020～50±2510～50±30≤10±50定量測試采用外標校準曲線法定量測定，標準曲線應(yīng)至少保證5個濃度點?？瞻自囼灣患釉嚇油猓瓷鲜霾襟E進行。結(jié)果計算樣品中各嘌呤含量以質(zhì)量分數(shù)表示，按式（1）計算：?=??×?×10?4····················································(1)?式中：?——樣品中某嘌呤的含量，單位為毫克每100克（mg/100g）；?——樣品的質(zhì)量，單位為克（g）；?——樣品溶液最終定容體積，單位為毫升（mL）；??——從標準曲線得到的待測組分溶液中某嘌呤的濃度，單位為微克每升（μg/L）；10?4——單位轉(zhuǎn)換系數(shù)。樣品中的嘌呤含量以四種嘌呤含量的算術(shù)加和計。計算結(jié)果保留到小數(shù)點后兩位。檢出限、定量限和精密度檢出限與定量限精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測試結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測試結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。圖1 四種嘌呤的檢出限及定量限參數(shù)參數(shù)腺嘌呤（Adenine）鳥嘌呤（Guanine）黃嘌呤（Xanthine）次黃嘌呤（Hypoxanthine）檢出限mg/100g0.0020.0200.0100.001定量限mg/100g0.0500.0500.0300.050質(zhì)譜儀器參數(shù)參考條件如下a) 源溫：150℃；氣簾氣流量：150L/Hr；脫溶劑氣溫度：150脫溶劑氣流量：800L/Hr；碰撞氣流量：0.15霧化氣體：氮氣。A.1。

附 錄 A（資料性）質(zhì)譜儀器參數(shù)參考條件表A.1四種嘌呤的主要參考質(zhì)譜參數(shù)化合物保留時間（min）電離方式定性離子對（m/z）定量離子對（m/z）錐孔電壓毛細管電壓（V）碰撞能量（eV）腺嘌呤（Adenine）2.24ESI+136.1＞109.2136.1＞119.295.5300015136.1＞119.215鳥嘌呤（Guanine）2.59ESI-150.0＞108.2150.0＞133.195.5250015150.0＞133.115黃嘌呤（Xanthine）1.61ESI-151.0＞80.3151.0＞108.295.5250015151.0＞108.215次黃嘌呤1.74ESI+137.1＞110.2137.1＞119.295.5300015137.1＞119.215注：對于不同質(zhì)譜儀器，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。附 錄 B（資料性）總離子流圖100μg/L四種嘌呤混合標準品的總離子流圖見圖B.1。圖B.1四種嘌呤混合標準品的總離子流圖參 考 文 獻T/CASME226—2022中國常見植物性食品中嘌呤的含量[JQuantitationofPurineinUrinebyUltra-PerformanceLiquidChromatography-TandemMassSpectrometry[J].SunQin.MethodsinMolecularBiology.2022.2546Simultaneousquantificationofpurineandpyrimidinebases,nucleosidesandtheirdegradationproductsinbovinebloodplasmabyhighperformanceliquidchromatographytandemmassspectrometry[J].CharlotteStentoft,MogensVestergaard,PeterL?vendahl,NielsBastianKristensen,JonMMoorby,S?renKroghJensen.JournalofChromatographyA.2014.1356Simultaneousanalysisofthemainmarkersofnitrogenstatusindairycow'surineusinghydrophilicinteractionchromatographyandtandemmassspectrometrydetection[J].HBoudra,MDoreau,PNoziere,EPujos-Guillot,DPMorgavi.JournalofChromatographyA.2012.1256Analysisofsevenpurinesandpyrimidinesinporkmeatproductsbyultrahighperformanceliquidchromatography-tandemmassspectrometry[J].ClarianaM,Gratacós-CubarsíM,HortósM,García-RegueiroJA,CastellariM.JournalofChromatographyA.2010.1217(26)DeterminationandprofilingofpurinesinfoodsbyusingHPLCandLC-MS[J].InazawaK,SatoA,KatoY,YamaokaN,FukuuchiT,YasudaM,MawatariK,NakagomiK,KanekoK.NucleosidesNucleotidesNucleicAcids.2014.33(4-6)SimultaneousdeterminationofpurinesanduricacidinChinesechickenbrothusingTFA/FAhydrolysiscoupledwithHPLC-VWD[J].ManliWu,WangangZhang,XixiShen,WeiWang.Foods.2021.10(11)Simultaneousdeterminationofnucleosidesandnucleotidesindietaryfoodsandbeverages using ion-pairing liquid chromatography-ele