菌種繁育-母種制作（食用菌生產(chǎn)技術(shù)課件）

母種分離選育采集種源培養(yǎng)基配制瓊脂培養(yǎng)基分離與適溫培養(yǎng)一級(jí)種轉(zhuǎn)接注意事項(xiàng)目錄一、二、三、四、五、母種主要采用人工選擇、誘變育種、雜交育種和原生質(zhì)融合等手段獲得。作為一般制種專業(yè)戶，可以采用人工選擇方式分離培育母種。菌種擔(dān)孢子或子囊孢子或組織體野生擴(kuò)大繁殖后的純次生菌絲體栽培野生菌馴化

原菌株改良

生物技術(shù)創(chuàng)新優(yōu)良菌株擴(kuò)大繁殖用于生產(chǎn)實(shí)行純培養(yǎng)

不含任何雜菌基要本求一般操作流程從野生或人工栽培群體中，選擇有代表性的優(yōu)良菇體作為種源。在菇床、菌墻中選擇出菇早、無(wú)雜菌侵染、株型緊湊、圓整肉厚、色澤美觀、七八成熟的第一潮菇的肥壯菇體作種菇(茯苓類選擇菌核或菌索)；采集1-2朵符合上述標(biāo)準(zhǔn)的種菇編上號(hào)碼，作為分離母種的材料。從栽培室采集的應(yīng)標(biāo)有原菌株代號(hào)。一、采集種源PDA培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂15克，清水1000毫升。如將葡萄糖用蔗糖代替即為PSA培養(yǎng)基。配制：先將馬鈴薯洗凈，挖去芽眼，切成薄片，置于鍋內(nèi)加水煮沸30分鐘，撈起后用4層紗布過(guò)濾，取汁。然后將瓊脂加入汁內(nèi)，邊加熱邊攪拌，讓瓊脂充分溶化；再將葡萄糖等加入，稍煮幾分鐘后，同樣用4層紗布過(guò)濾，取其汁液。將汁液趁熱裝入玻璃試管內(nèi)。裝至管長(zhǎng)的1／5，管口用棉花塞緊。然后置于高壓鍋內(nèi)，在121℃下滅菌30分鐘左右。滅菌后及時(shí)取出，趁熱將試管斜排于桌面上，冷卻后即成為固體斜面培養(yǎng)基。二、培養(yǎng)基配制瓊脂培養(yǎng)基（PDA培養(yǎng)基）通過(guò)不同方式將菌種分離接種于試管后，要及時(shí)將試管移入已消毒的培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，溫度控制在25℃左右培養(yǎng)。常用的方法有組織分離、基內(nèi)菌絲分離、孢子分離等。三、分離與適溫培養(yǎng)（一）組織分離法使用組織分離復(fù)壯菌種，簡(jiǎn)便易行、效果明顯。幾種食用菌的組織分離法：其操作技術(shù)要點(diǎn)是：

①選擇種菇：前已述及。②種菇消毒：在種菇中部取最大的3-4張菇片，用70%的酒精輕擦表面后置于接種箱內(nèi)消毒；③菇肉接種：將菇片縱向撕開，在每個(gè)裂面靠近菇片邊緣處取一米粒大小的菇肉組織接于PDA培養(yǎng)基上。每張菇片共撕10個(gè)裂面，接10支試管，一次分離共接30～40支試管；④培養(yǎng)：將試管置于15～30℃下培養(yǎng)；⑤純化：培養(yǎng)期間每天都要檢查發(fā)菌情況，從中選擇菌絲濃白粗壯、邊緣整齊、長(zhǎng)速正常、無(wú)綠、黃及漿糊狀等雜菌斑點(diǎn)的，表現(xiàn)最好的分離種轉(zhuǎn)接于木屑麩皮培養(yǎng)基上，于15～30℃下培養(yǎng)；⑥保藏：菌絲發(fā)滿后，在接種箱內(nèi)去掉棉塞，用蠟封口，用黑膜包裹后于4～9℃的冰箱內(nèi)保藏；⑦出菇試驗(yàn)：在下一個(gè)生產(chǎn)季節(jié)與原始保藏種作對(duì)比試驗(yàn)，擇優(yōu)作為生產(chǎn)用種。每季都如此篩選，能逐步提高菌種各方面的性狀，使發(fā)菌加快，抗逆抗雜性增強(qiáng)，質(zhì)量明顯提高。（二）基內(nèi)菌絲分離法從食用菌生長(zhǎng)的基質(zhì)中分離純菌絲的方法稱基內(nèi)菌絲分離法。如以耳木、菇木、菌棒及土壤等作為分離材料進(jìn)行分離。如銀耳由混合型菌絲組成，若同時(shí)需獲得兩種菌絲也常采用這種分離方法。必須在子實(shí)體生長(zhǎng)盛期進(jìn)行。選擇菌絲生長(zhǎng)健壯且周圍無(wú)雜菌的部分進(jìn)行。方法如下圖。但教材中先將菇木或耳木通過(guò)酒精燈火焰，重復(fù)多次，通過(guò)灼燒消滅表面雜菌，應(yīng)為必要。（三）孢子分離法孢子分離法一般是指在無(wú)菌條件下，使食用菌的孢子在適宜培養(yǎng)基上萌發(fā)形成菌絲體，再經(jīng)過(guò)栽培試驗(yàn)篩選比較，獲得性狀優(yōu)良、能用于栽培的純菌種。孢子分離一般采用有性孢子，子代性狀分離較大，主要供雜交育種，一般生產(chǎn)者不建議采用。孢子

分離法難度較大單孢分離多孢分離較簡(jiǎn)易孢子的特點(diǎn)：菌齡小、生命力強(qiáng)、變異率高。

單孢分離概念使許多孢子在同一培養(yǎng)基上，

萌發(fā)后自由交配成次生菌絲的方法步驟種菇消毒采收孢子接種孢子整菇插種法

鉤懸法

孢子印法出菇試驗(yàn)

多孢分離（1）種菇消毒菌柄去2/3苞被有：75%酒精棉球擦試0.25%新潔爾滅浸2~3min

無(wú)菌紗布吸干表面水分無(wú)整菇

插種法種菇插在孢子收集器中

使孢子散落于培養(yǎng)皿內(nèi)的方法用

前

滅

菌25℃、24h現(xiàn)孢子粉

取出分離材料

培養(yǎng)皿蓋嚴(yán)（2）采收孢子鉤懸法25℃、24h現(xiàn)孢子粉

取出分離材料孢子印法用接種環(huán)

蘸孢子液或孢子粉

涂布于平板上（三）接種孢子四、一級(jí)種轉(zhuǎn)接五、注意事項(xiàng)（一）接種過(guò)程①保持接種室、接種箱的清潔衛(wèi)生。②接種前對(duì)接種室、操作臺(tái)面、接種用具、培養(yǎng)基容器表面進(jìn)行殺菌消毒，接種人員應(yīng)洗凈雙手及手腕部位。③選擇無(wú)雜菌污染及螨蟲為害、菌絲生長(zhǎng)健壯的菌種，剔除老菌皮，挑取菌絲旺盛、粗壯、濃密部位的菌種塊接種于培養(yǎng)料中。④接種后及時(shí)貼上標(biāo)簽，注明接種人、接種日期、菌種名稱或代號(hào)。⑤接種完畢要及時(shí)清潔