植物培養(yǎng)資料

植物組織培養(yǎng):指在無(wú)菌條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞或原生質(zhì)體，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，人為控制培養(yǎng)條件，使其生長(zhǎng)、分化、增殖，發(fā)育成完整植株或生產(chǎn)次生代謝物質(zhì)的過(guò)程和技術(shù)。也稱(chēng)為離體培養(yǎng)。外植體:凡是用于離體培養(yǎng)的細(xì)胞、組織或器官統(tǒng)稱(chēng)為外植體。?組織培養(yǎng)六要素：無(wú)菌條件外植體人工培養(yǎng)基人工條件:溫度、光強(qiáng)、光照時(shí)間細(xì)胞全能性:增殖、分化、發(fā)育成完整植株培養(yǎng)容器:能進(jìn)行氣體交換培養(yǎng)材料類(lèi)型：組織培養(yǎng):指以分離出植物各部位的組織（如分生組織、形成層、薄壁組織等）或已誘導(dǎo)的愈傷組織為外植體的離體無(wú)菌培養(yǎng)，是狹義的組織培養(yǎng)。器官培養(yǎng):植物的六大器官的無(wú)菌培養(yǎng)胚胎培養(yǎng):幼胚、成熟胚、胚乳、胚珠、子房的無(wú)菌培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng):指對(duì)單個(gè)細(xì)胞或較小細(xì)胞團(tuán)的離體無(wú)菌培養(yǎng)，獲得單細(xì)胞無(wú)性繁殖系。原生質(zhì)體培養(yǎng):指以除去細(xì)胞壁的細(xì)胞（原生質(zhì)體）為外植體的離體無(wú)菌培養(yǎng)。其他:次生代謝物生產(chǎn)、脫毒培養(yǎng)、人工種子等。按照培養(yǎng)過(guò)程分為:初代培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)按照培養(yǎng)基類(lèi)型分為:液體培養(yǎng)和固體培養(yǎng)按照培養(yǎng)目的分:愈傷組織培養(yǎng)、分化培養(yǎng)和生根培養(yǎng)主要研究任務(wù)：細(xì)胞、組織、器官等在離體培養(yǎng)下的：?營(yíng)養(yǎng)條件、激素、培養(yǎng)條件?形態(tài)發(fā)生?脫毒方法與機(jī)理?再生植株的遺傳穩(wěn)定性?種質(zhì)資源離體保存的機(jī)理與方法?細(xì)胞離體融合機(jī)理與方法細(xì)胞全能性:指植物體的任何一個(gè)有完整細(xì)胞核的活細(xì)胞都具有該種植物的全套遺傳信息和發(fā)育成完整植株的能力。植物細(xì)胞的全能性是潛在的，要實(shí)現(xiàn)植物細(xì)胞的全能性，必須具備一定的條件：細(xì)胞與植株分離，脫離植株的控制；創(chuàng)造適合于細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件；要有成功的再生體系，即獲得再生植株。植株再生的過(guò)程即為植物細(xì)胞全能性表達(dá)的過(guò)程，一般經(jīng)過(guò)脫分化和再分化兩個(gè)階段。細(xì)胞分化:指細(xì)胞在分裂過(guò)程中發(fā)生結(jié)構(gòu)和功能上的改變，逐漸失去分裂能力，而形成各類(lèi)植物組織和器官。由種子萌發(fā)到長(zhǎng)成完整植株，這是胚性細(xì)胞不斷分裂和分化的結(jié)果。細(xì)胞分化形成不同的器官和組織，即細(xì)胞分化導(dǎo)致形態(tài)發(fā)生組織培養(yǎng)的形態(tài)發(fā)生有兩種途徑:一種是器官發(fā)生，另一種是體細(xì)胞胚胎發(fā)生脫分化:指植物組織培養(yǎng)中離體植物器官和組織的成熟細(xì)胞或已分化的細(xì)胞回復(fù)到分生狀態(tài)的過(guò)程，即誘導(dǎo)成為愈傷組織的過(guò)程。愈傷組織:是指在人工培養(yǎng)基上經(jīng)誘導(dǎo)后外植體表面上長(zhǎng)出來(lái)的一團(tuán)無(wú)序生長(zhǎng)的薄壁細(xì)胞。脫分化的難易程度與植物的種類(lèi)、組織和細(xì)胞的狀態(tài)有關(guān)。一般單子葉植物比雙子葉植物難；成熟的植物細(xì)胞和組織比未成熟的植物細(xì)胞和組織難；單倍體細(xì)胞比二倍體細(xì)胞難。再分化:指離體的植物細(xì)胞或組織經(jīng)脫分化培養(yǎng)后再次進(jìn)行分化，形成新的細(xì)胞、組織、器官的過(guò)程。再分化有兩種方式：一種是器官發(fā)生，一種是胚胎發(fā)生形態(tài)建成（愈傷組織到再生植株）先芽后根，這是最普遍的發(fā)生方式；先根后芽，但芽的分化難度比較大；在愈傷組織塊的不同部位上分化出根或芽，再通過(guò)維管組織的聯(lián)系形成完整植株。通過(guò)在愈傷組織表面或內(nèi)部形成胚狀體，是愈傷組織形態(tài)發(fā)生的特殊方式。影響組培苗遺傳穩(wěn)定性的因素基因型繼代次數(shù)與繼代時(shí)間形態(tài)發(fā)生:以莖尖、莖段發(fā)生不定芽，變異率低以花器官誘導(dǎo)的植株，變異率高胚狀體發(fā)生途徑，變異率低愈傷組織懸浮培養(yǎng)分化不定芽，變異率較高外源激素:激素影響細(xì)胞有絲分裂，高濃度激素作用下，細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)激素加快，不正常分裂頻率增高，再生植株變異增多。減少變異，提高遺傳穩(wěn)定性的措施（1） 選取具有分生點(diǎn)的莖尖或幼嫩的器官為外植體（2） 縮短繼代時(shí)間，減少繼代次數(shù)（3） 采用胚狀體發(fā)生方式（4） 采用適當(dāng)?shù)募に胤N類(lèi)和濃度（5） 減少或不使用容易引起誘變的化學(xué)物質(zhì)植物離體快速繁殖特點(diǎn):繁殖系數(shù)大，周年生產(chǎn)，繁殖速度快，苗木整齊，可工廠化生產(chǎn)。次生代謝物:植物組織培養(yǎng)能產(chǎn)生很多種藥物，主要有苷類(lèi)、生物堿、固醇類(lèi)、醍類(lèi)、黃酮類(lèi)、蛋白質(zhì)及其它生理活性物質(zhì)。植物組織培養(yǎng)：（1） 是指分離單個(gè)或多個(gè)細(xì)胞或植物體的一部分，在人工配制的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，使之長(zhǎng)成一株完整植物體的過(guò)程。按照外植體的不同，組織培養(yǎng)可分為植株培養(yǎng)、胚胎培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)和原生質(zhì)體培養(yǎng)。（2） 理論依據(jù)---細(xì)胞全能性（3） 培養(yǎng)條件可以人為控制；生長(zhǎng)周期短，繁殖率高；管理方便，利于工廠化生產(chǎn)的突出特點(diǎn)，因而發(fā)展迅速。（4） 農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用主要體現(xiàn)于以下幾個(gè)方面:快速繁殖優(yōu)良苗木；獲得脫毒苗；育種上應(yīng)用；工廠化育苗。細(xì)胞分化:指細(xì)胞在分裂過(guò)程中發(fā)生結(jié)構(gòu)和功能上的改變，而形成各類(lèi)植物組織和器官。脫分化:也稱(chēng)去分化，一個(gè)已停止分裂的成熟細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚鸂顟B(tài)并形成未分化的愈傷組織的現(xiàn)象叫脫分化。脫分化的機(jī)理:脫分化誘導(dǎo)期間會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜透性改變，細(xì)胞核增大，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)范圍擴(kuò)大，多核糖體形成，過(guò)氧化物酶增加，蛋白質(zhì)和酚類(lèi)物質(zhì)合成活躍等。影響脫分化的主要因素：損傷。切割損傷的刺激，促使細(xì)胞增殖。在誘導(dǎo)愈傷組織時(shí)常加入生長(zhǎng)素，但配合細(xì)胞分裂素的效果更好。弱光或黑暗條件有利于脫分化中的細(xì)胞分裂。外植體的狀態(tài)。不同生理年齡和不同季節(jié)都會(huì)有不同的培養(yǎng)反應(yīng)。植物種類(lèi)的差異。一般雙子葉植物比單子葉植物及裸子植物容易。誘導(dǎo)期:是細(xì)胞分裂的準(zhǔn)備時(shí)期，是愈傷組織形成的起點(diǎn)。特點(diǎn)：處在靜止?fàn)顟B(tài)的成熟細(xì)胞通過(guò)一些刺激因素和激素的誘導(dǎo)作用，使其細(xì)胞內(nèi)合成代謝活動(dòng)加強(qiáng)，迅速進(jìn)行蛋白質(zhì)和核酸物質(zhì)的合成，RNA含量迅速增加，細(xì)胞核體積明顯增大，細(xì)胞大小變化不大。分裂期:指細(xì)胞通過(guò)一分為二的分裂，不斷增生子細(xì)胞，即發(fā)生脫分化的過(guò)程。特征：細(xì)胞分裂快，結(jié)構(gòu)疏松，缺少結(jié)構(gòu)，淺而透明。細(xì)胞體積迅速變小。當(dāng)細(xì)胞體積最小，細(xì)胞核和核仁最大，細(xì)胞內(nèi)無(wú)大液泡，RNA含量最高時(shí)，標(biāo)志細(xì)胞分裂進(jìn)入了高峰期。形成期：是指外植體細(xì)胞經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)期和分裂期后形成無(wú)序結(jié)構(gòu)的愈傷組織。特征：細(xì)胞的平均大小相對(duì)穩(wěn)定，不再減小。形成瘤狀結(jié)構(gòu)的外表和內(nèi)部分化；出現(xiàn)多種類(lèi)型的細(xì)胞。MS培養(yǎng)基：無(wú)機(jī)鹽和例子濃度較高，為較穩(wěn)定的平衡溶液。起養(yǎng)分的數(shù)量和比例較合適，可滿(mǎn)足植物的營(yíng)養(yǎng)和生理需要。硝酸鹽含量較其他培養(yǎng)基為高，廣泛地運(yùn)用于植物的器官、花藥、細(xì)胞和原生質(zhì)體培養(yǎng)。B5培養(yǎng)基：含有較低的銨，適于雙子葉植物，特別是木本植物。White培養(yǎng)基：無(wú)機(jī)鹽數(shù)量較低，適于生根培養(yǎng)。N6培養(yǎng)基：KNO3和(NH4)2SO4含量高。常用于禾谷類(lèi)植物的花藥培養(yǎng)。細(xì)胞及原生質(zhì)體培養(yǎng)。植物的離體器官發(fā)生:指從植物葉片、子房、花藥、胚珠、葉柄等，誘導(dǎo)出愈傷組織，由愈傷組織上誘導(dǎo)不定芽，進(jìn)一步發(fā)育，形成完整植株。特點(diǎn)：這種方法從原來(lái)成熟組織上重新誘導(dǎo)出分生組織，發(fā)生單芽或叢生芽。器官發(fā)生再生植株的方式：A先形成芽，芽的基部后產(chǎn)生后根；B先形成根，根上再出芽；C愈傷組織的不同部位形成芽和根，然后形成微管束組織把兩者結(jié)合起來(lái)植物體細(xì)胞胚胎發(fā)生:植物離體培養(yǎng)的細(xì)胞誘導(dǎo)分化出類(lèi)似胚的結(jié)構(gòu)，進(jìn)而長(zhǎng)出完整植株的過(guò)程稱(chēng)為植物體細(xì)胞胚胎發(fā)生，形成的類(lèi)似胚的結(jié)構(gòu)稱(chēng)為體細(xì)胞胚或胚狀體。過(guò)程：愈傷組織形成/胚性愈傷組織形成/胚狀體形成/胚萌發(fā)和成苗影響植物離體形態(tài)發(fā)生的因素：植物種類(lèi)和基因型培養(yǎng)材料的生理狀態(tài)二徑美苴一三 培養(yǎng)基四 培養(yǎng)條件＞在植物組織培養(yǎng)中，主要目標(biāo)是誘導(dǎo)愈傷組織形成和形態(tài)發(fā)生，使一個(gè)離體的細(xì)胞、一塊組織或一個(gè)器官的細(xì)胞，通過(guò)脫分化形成愈傷組織，并由愈傷組織再分化形成植物體。＞胚狀體發(fā)生途徑與器官發(fā)生途徑形成植株的區(qū)別：最根本的特征是具有兩極性，即在發(fā)育的早期階段，從其方向相反的兩端分化出莖端和根端；而不定芽和不定根都為單向極性。胚狀體的維管組織與外植體的維管組織無(wú)解剖結(jié)構(gòu)上的聯(lián)系，而不定芽或不定根往往總是與愈傷組織的維管組織相聯(lián)系。胚狀體的維管組織的分布是獨(dú)立的“Y”字形，而不定芽的維管組織無(wú)此現(xiàn)象。＞影響植物離體形態(tài)發(fā)生的因素有不同品種的基因型、外植體的選擇狀態(tài)、培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。植物組織培養(yǎng)的完整過(guò)程一般分為：■培養(yǎng)基的選擇和培養(yǎng)條件的確定■外植體選擇與處理■接種、初代培養(yǎng)■繼代培養(yǎng)■生根培養(yǎng)■試管苗的馴化移栽成活培養(yǎng)基的成分包括■水■無(wú)機(jī)鹽■有機(jī)物■植物激素■培養(yǎng)物的支持材料無(wú)機(jī)鹽：大量元素：主要有N、P、K、Ca、Mg、S等。微量元素：主要有Fe、Mn、Cu、Mo、Zn、Co、B等。缺素癥：?氮：不能形成導(dǎo)管，表現(xiàn)花色素苷的顏色?鉀和磷：細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)?硫：明顯腿綠?鐵：細(xì)胞分裂停止，失綠癥狀?硼：細(xì)胞分裂停滯，細(xì)胞伸長(zhǎng)?錳和鉬：影響細(xì)胞伸長(zhǎng)有機(jī)物：?糖：提供碳源、能量?維生素：VB1對(duì)愈傷組織的產(chǎn)生和生活力有重要作用；在低濃度的細(xì)胞分裂素下，特別需要添加VB1、VB6才能促進(jìn)根的生長(zhǎng)；VB5與植物代謝和胚的發(fā)育有一定關(guān)系；VC有防止組織褐變的作用。?肌醇：促進(jìn)愈傷組織的生長(zhǎng)、胚狀體和芽的形成，對(duì)組織和細(xì)胞的繁殖、分化也有促進(jìn)作用。對(duì)細(xì)胞壁的形成也有作用。?氨基酸：有機(jī)氮源?天然有機(jī)復(fù)合物植物激素：?生長(zhǎng)素：主要用于誘導(dǎo)愈傷組織形成，促進(jìn)根的生長(zhǎng)。協(xié)助細(xì)胞分裂素促進(jìn)細(xì)胞分裂和伸長(zhǎng)。?細(xì)胞分裂素：誘導(dǎo)不定芽的分化和莖、苗的增殖。?赤霉素：刺激在培養(yǎng)中形成的不定胚發(fā)育成小植株，促進(jìn)幼苗莖的伸長(zhǎng)生長(zhǎng)。外植體的選擇：植物基因型：雙子葉植物易于單子葉植物生理狀態(tài)：幼嫩、年限越短的組織取材季節(jié)：在其生長(zhǎng)開(kāi)始的季節(jié)選取植物的長(zhǎng)勢(shì)：生長(zhǎng)健壯的器官或組織取材部位：取易出愈傷組織的部位外植體大?。涸?.5?1.0cm為宜無(wú)菌概念：無(wú)菌的范疇是指經(jīng)高溫灼燒或一定時(shí)間蒸煮過(guò)后的物體，或經(jīng)其他理化滅菌方法處理后的物體等都是無(wú)菌的。滅菌與消毒的含義及其差異：■所謂滅菌是指用物理或化學(xué)的方法，殺死物體表面和孔隙內(nèi)的一切微生物或生物體，即把所有有生命的物質(zhì)全部殺死；■而消毒是指殺死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再發(fā)生危害作用?！鰷缇c消毒的主要區(qū)別在于前者殺菌強(qiáng)烈，能殺死所有活細(xì)胞；后者作用緩和，主要?dú)⑺阑蛞种聘皆谥参锊牧媳砻娴奈⑸?，但芽胞、厚垣孢子一般不?huì)死亡。但是，滅菌與消毒是相對(duì)的，如果消毒時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或消毒劑濃度過(guò)高，也可殺死全部活的細(xì)胞，消毒就成為滅菌了。反之，滅菌劑只能起到消毒作用。滅菌方法：壓力蒸汽滅菌、灼燒滅菌、過(guò)濾滅菌、紫外線(xiàn)滅菌植物組織培養(yǎng)過(guò)程：離體的植物器官、組織、細(xì)胞(脫分化)，愈傷組織(再分化)，根芽，再生苗。植物組織培養(yǎng)條件：溫度、光照、濕度、滲透壓、pH值、培養(yǎng)基、無(wú)菌條件。提高試管苗馴化移栽成活率的措施：提高組培苗質(zhì)量。及時(shí)出瓶馴化，避免組培苗老化。選擇適當(dāng)?shù)囊圃曰|(zhì)，要求疏松、保水和保肥，易滅菌，常用的基質(zhì)有蛭石、珍珠巖、營(yíng)養(yǎng)土等。移栽前根系處理，根部培養(yǎng)基清理掉，不能傷根和葉。移栽后的溫度和濕度控制，注意溫度和保濕。適當(dāng)采取遮陰措施，可降低蒸騰失水，也可避免強(qiáng)日照對(duì)葉片的灼傷。加強(qiáng)肥水管理和病蟲(chóng)害防治。植物組織培養(yǎng)基本技術(shù)流程包括培養(yǎng)基的配制、外植體的選擇與處理、接種和繼代培養(yǎng)、試管苗的移栽以及培養(yǎng)環(huán)境條件控制等。培養(yǎng)基的成分有水、無(wú)機(jī)鹽、有機(jī)化合物、激素、凝固劑等。一般多選擇莖段、莖尖、葉片、花藥等幼嫩的組織作為組培的外植體滅菌的方法有壓力蒸汽滅菌、過(guò)濾、灼燒和紫外滅菌。培養(yǎng)條件：溫度23-27濕度70-80%PH值5.5-6.0創(chuàng)設(shè)從試管苗生境逐漸向室外環(huán)境轉(zhuǎn)化的過(guò)渡條件，以確保試管苗的移栽成活率。外植體：>一般來(lái)自無(wú)菌種子發(fā)芽產(chǎn)生的幼根>植株根系經(jīng)消毒處理后的切段普通莖尖培養(yǎng)：取材：挑選雜菌污染少，生長(zhǎng)不久的莖尖。木本植物可在取材前對(duì)莖尖噴幾次滅菌藥劑。以保證材料不帶或少帶雜菌。用于普通莖尖培養(yǎng)，可先從植物的莖、藤或匍匐枝上切取2cm以上的頂梢。滅菌：將采到的莖尖切成0.5-1.0cm，并將大葉除去，休眠芽預(yù)先剝除鱗片。將莖尖置于流水沖洗2?4小時(shí)(視干凈程度)，再在70%的酒精中處理10-30秒，然后30%的次氯酸鈉中浸10-15分鐘，最后用無(wú)菌水沖洗3-4次，或者用0.1-0.2%的氯化汞滅菌5-10分鐘，無(wú)菌水沖洗5次以上。接種：為了減少污染，可在接種前再剝掉一些葉片，使莖尖為0.5cm左右。有些植物的莖尖由于多酚氧化酶的氧化作用而發(fā)生褐化，使培養(yǎng)基變褐，影響材料的成活。所以在接種時(shí)，不能用生銹的解剖刀，動(dòng)作要敏捷，隨切隨接，減少傷口在空氣中暴露的時(shí)間。培養(yǎng)：初代培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)，誘導(dǎo)生根，馴化移栽。脫毒培養(yǎng)：取材，滅菌，接種，培養(yǎng)葉的培養(yǎng)：取材與滅菌，接種，培養(yǎng)(光培養(yǎng))■植物器官培養(yǎng)主要是指離體的根、莖、葉、花器和果實(shí)、種子的無(wú)菌培養(yǎng)，是植物組織培養(yǎng)中最主要的一個(gè)方面?！鲋参锲鞴倥囵B(yǎng)不僅是研究器官生長(zhǎng)、營(yíng)養(yǎng)代謝、生理生化、組織分化和形態(tài)建成的最好材料和方法，而且具有重要的應(yīng)用價(jià)值。植物細(xì)胞培養(yǎng)：指對(duì)植物器官或愈傷組織上分離出來(lái)的單細(xì)胞(或小細(xì)胞團(tuán))進(jìn)行培養(yǎng)，形成單細(xì)無(wú)性系或再生植株的技術(shù)。單細(xì)胞分離：1.機(jī)械法：葉片研碎、過(guò)濾、離心2.酶解法：酶降解膠層，獲得游離的細(xì)胞團(tuán)單細(xì)胞培養(yǎng)方法：平板培養(yǎng)法:分散的植物細(xì)胞接種于含薄層固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)的培養(yǎng)過(guò)程稱(chēng)為平板培養(yǎng)法?？醋o(hù)培養(yǎng)法:從懸浮培養(yǎng)物或脆弱愈傷組織上分離單細(xì)胞，濾紙置于活躍生長(zhǎng)的愈傷組織上，分離的單細(xì)胞放在濾紙表面，進(jìn)行培細(xì)胞養(yǎng)的方法。微室培養(yǎng)法:懸浮單細(xì)胞接種于凹玻片或玻璃環(huán)與蓋玻片組成的微室內(nèi)的固體培養(yǎng)基中的培養(yǎng)方法。條件培養(yǎng)基培養(yǎng)：條件培養(yǎng)基是在培養(yǎng)基中加入高密度的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的建立：愈傷組織的誘導(dǎo)，懸浮系的建立與繼代培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)，影響懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)的因素，懸浮細(xì)胞同步化饑餓法：饑餓導(dǎo)致的細(xì)胞分裂受阻常常是使細(xì)胞不能合成DNA，即不能進(jìn)入S期，或細(xì)胞分裂不能進(jìn)行，即不能進(jìn)入M期。因此，通過(guò)饑餓法可以獲得處于G1和G2期的同步化細(xì)胞。抑制劑法：通過(guò)一些DNA合成抑制劑處理細(xì)胞，使細(xì)胞滯留在DNA合成前期，可獲得處于同一細(xì)胞周期(G1)的同步化細(xì)胞。原生質(zhì)體：脫去細(xì)胞壁的細(xì)胞叫原生質(zhì)體。原生質(zhì)體融合意義：可實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交，獲得種間雜種，克服有性雜交配子不親合性；可獲得含另一親本非整倍體雜種或胞質(zhì)雜種，且獲得的遺傳變異范圍極廣；一次操作可實(shí)現(xiàn)兩個(gè)以上親本的融合作用可獲得呈現(xiàn)雙親個(gè)體基因型總和的雜種；可形成有性生殖障礙植物的種間雜種；■細(xì)胞分離的方法有機(jī)械法和酶解法■單細(xì)胞培養(yǎng)方法有平板、看護(hù)、微室、條件培養(yǎng)基等培養(yǎng)法■細(xì)胞懸浮培養(yǎng)過(guò)程：愈傷組織誘導(dǎo)，懸浮系的建立和培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)，懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的同步化等■原生質(zhì)體培養(yǎng)過(guò)程：原生質(zhì)體分離及純化，活力測(cè)定，細(xì)胞壁再生及細(xì)胞分裂，愈傷組織和胚狀體形成，植株再生?！鲈w質(zhì)融合的影響因素：PEG