血液檢測(cè)常見(jiàn)影響因素及處理方法

血液檢測(cè)常見(jiàn)影響因素及處理方法

在免疫室進(jìn)行肝酶、肝酶、抗毒酶和抗毒酶的特定檢測(cè)。最常用的檢測(cè)方法是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。該試驗(yàn)用已知抗原檢測(cè)未知抗體,或用已知抗體檢測(cè)未知抗原,雖然操作簡(jiǎn)便,但影響因素諸多,一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問(wèn)題,都可能會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)的失敗?，F(xiàn)將酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)常見(jiàn)影響因素及處理方法總結(jié)如下。1試劑的因素1.1試劑的選擇和使用對(duì)“證”證”的影響試劑的選擇是保證血液檢測(cè)質(zhì)量的關(guān)鍵因素,要選購(gòu)知名度高,質(zhì)量有保證,具有“三證”的試劑,最好選用配套試劑。也可以和同行交流,其他實(shí)驗(yàn)室對(duì)某種試劑盒的實(shí)際使用效果,往往具有很強(qiáng)的說(shuō)服力,因此應(yīng)使用檢測(cè)口碑好的試劑(可通過(guò)室間質(zhì)評(píng)組織獲得)。不使用過(guò)期試劑,不同批號(hào)試劑不能混用,同批號(hào)試劑盒的組分也不可混用。1.2試劑盒的質(zhì)量保障1.2.1試劑的儲(chǔ)存至關(guān)重要,試劑一到科室,即應(yīng)立即放入冷藏冰箱,必須注意不得靠近冰箱后壁,以防試劑凍結(jié),影響檢測(cè)結(jié)果。1.2.2試劑供應(yīng)商必須保障試劑在進(jìn)入科室前運(yùn)輸儲(chǔ)存的質(zhì)量,試劑盒從出廠到用戶手中,均要?dú)v經(jīng)運(yùn)輸(如送檢、檢定、發(fā)貨等)及運(yùn)輸中的儲(chǔ)存環(huán)節(jié),某一環(huán)節(jié)不當(dāng),均影響試劑盒的臨床使用質(zhì)量。去年我科有一段時(shí)間所做的表面抗原項(xiàng)目,今天陽(yáng)性,同一份標(biāo)本明天復(fù)檢有可能是弱陽(yáng)性甚至陰性,查找原因可能是這批試劑在進(jìn)入科室前儲(chǔ)存溫度出現(xiàn)了問(wèn)題,與試劑商聯(lián)系更換新的批號(hào)試劑后,此現(xiàn)象消失。1.3假陰性的檢測(cè)在臨床實(shí)驗(yàn)室,試劑的準(zhǔn)備一般不太注意,工作人員通常在試驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來(lái)就用,其直接后果是對(duì)一些弱陽(yáng)性標(biāo)本的檢測(cè)出現(xiàn)假陰性。因此酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中,試劑準(zhǔn)備最關(guān)鍵的是使試劑盒在使用前與室溫平衡,以滿足檢測(cè)要求,一般檢測(cè)前30min即應(yīng)將試劑盒從冰箱中取出,檢測(cè)時(shí)試劑盒可與室溫平衡。2樣品要素標(biāo)本因素包括標(biāo)本溶血、被污染、標(biāo)本保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)和標(biāo)本凝固不全等。2.1血清蛋白的檢測(cè)血紅蛋白中含鐵血紅素有類過(guò)氧化物酶活性,因此以辣根過(guò)氧化物酶為標(biāo)記的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定中,如血清中血紅蛋白濃度較高,很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相,從而與后面加入的辣根過(guò)氧化物酶反應(yīng)顯色,造成假陽(yáng)性。因此在采血過(guò)程中應(yīng)注意,采集血液標(biāo)本時(shí)應(yīng)緩慢抽動(dòng),注射器插入生化管應(yīng)讓血液自動(dòng)靠負(fù)壓注入生化管,不能用手推注射器栓塞,以防標(biāo)本溶血。處理方法:若輕微溶血影響還不大,若為中度或重度溶血,則必須與臨床聯(lián)系,重新抽取標(biāo)本,并講清楚正確采集血標(biāo)本的重要性。并由有關(guān)部門定期培訓(xùn)臨床護(hù)士怎樣正確采集血液標(biāo)本。2.2新鮮標(biāo)本的保存菌體可能含有內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,可出現(xiàn)非特異性顯色,因此宜用新鮮標(biāo)本,如有特殊情況,應(yīng)冰箱保存或冰凍保存,并應(yīng)加蓋保存。陽(yáng)性結(jié)果應(yīng)重抽血雙孔復(fù)檢。2.3新鮮標(biāo)本的選擇標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng),可能造成污染或效價(jià)降低,可引起假陰性,因此應(yīng)盡量用新鮮標(biāo)本。冰凍標(biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融,因冰凍標(biāo)本的反復(fù)凍融產(chǎn)生的機(jī)械力對(duì)標(biāo)本中的蛋白分子有破壞作用,可引起假陰性。2.4樣品的離心標(biāo)本凝固不全的血清中有部分纖維蛋白原,影響結(jié)果。有的工作人員著急趕時(shí)間,剛采集的標(biāo)本就離心(雖然現(xiàn)在都采用促凝生化管),結(jié)果剛離心完血清還可以,但是在洗滌時(shí),此孔血清呈果凍狀,顯然反應(yīng)不完全。處理方法:標(biāo)本采集后在37℃水浴30min后再離心,以3500轉(zhuǎn)/min離心5min可獲得滿意標(biāo)本。3操作因素3.1注意不可分批操作孵育前加樣時(shí)間過(guò)長(zhǎng),漏加樣本,酶試劑加入孔外,用滴瓶滴加試劑時(shí)加量不準(zhǔn)等都可使試驗(yàn)結(jié)果不可靠。處理方法:(1)標(biāo)本過(guò)多時(shí),可分批操作,標(biāo)本要輕拿輕放,防止標(biāo)本濺出交叉感染;(2)加完樣品封板前要仔細(xì)觀察反應(yīng)板,看是否有樣品漏加,以便及時(shí)發(fā)現(xiàn);(3)加酶試劑后可用吸水紙吸干孔外試劑;(4)使用滴瓶加試劑時(shí),應(yīng)垂直滴加,勻速滴加,以免速度過(guò)快有的孔中多加1滴試劑,建議采用微量加樣器加試驗(yàn)中的所有組分;(5)加樣器應(yīng)定期校準(zhǔn),消毒,吸頭要一次性使用,以免交叉污染。3.2孔內(nèi)溫度增加的影響及處理溫育是最為關(guān)鍵、最容易出現(xiàn)問(wèn)題的步驟;溫育的時(shí)間、溫度選擇一般按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行,加完樣本和試劑后微孔板放入水浴箱或溫箱中,孔內(nèi)溫度從室溫升至攝氏37℃需一定時(shí)間,若一放入就計(jì)時(shí),就容易造成孵育時(shí)間不夠,易致弱陽(yáng)性標(biāo)本檢測(cè)不出。處理方法:(1)可采用適當(dāng)延長(zhǎng)幾分鐘時(shí)間(大約2min);(2)可把反應(yīng)板封板后直接放入37℃水浴箱水中;(3)用37℃孵育箱將是不錯(cuò)的選擇。3.3ph值的調(diào)節(jié)3.3.1洗滌液的配制,按照說(shuō)明書(shū)要求1∶20稀釋,看似很簡(jiǎn)單,但必須注意一些細(xì)節(jié)問(wèn)題:(1)注意洗滌液是否有結(jié)晶析出,冬天洗滌液易結(jié)晶,如不注意很容易堵塞洗板機(jī)管路。處理方法:事先將洗滌液置37℃水溫箱中預(yù)溫一會(huì)再行配制就可解決。(2)要注意去離子水的pH值。處理方法:用0.1nNaOH調(diào)節(jié)pH值至7左右。3.3.2洗板有兩種,即手工洗板和洗板機(jī)洗板。采取手工洗板,孔與孔之間液體易交叉;采取洗板機(jī)洗板時(shí),洗液量不足導(dǎo)致洗板不徹底,針孔堵塞導(dǎo)致抽吸不完全,清洗效果差。處理方法:(1)手工洗板時(shí),孔內(nèi)洗液不能溢出,拍板時(shí)要垂直,但用力不能過(guò)猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫落;(2)用洗板機(jī)洗板,洗滌液要新鮮配制,洗板機(jī)要經(jīng)常檢查沖洗頭是否暢通,洗滌液瓶應(yīng)定期徹底清洗,要定期檢查整個(gè)管路,疏通管路,若針頭被堵塞,可用注射器排除;(3)我科采用機(jī)洗5遍人工加洗1遍,效果較好;(4)洗板時(shí),吸水紙不可重復(fù)使用;(5)洗完板時(shí),應(yīng)充分扣干反應(yīng)孔,可用吸水紙包住反應(yīng)板扣干。3.4顯色3.5注意試驗(yàn)的連續(xù)性加入終止液后用酶標(biāo)儀檢測(cè),酶標(biāo)儀需預(yù)熱15min~30min,因反應(yīng)板加入A、B顯色劑后在37℃放置30min,反應(yīng)板底部會(huì)有水霧,檢測(cè)時(shí)可出現(xiàn)假陽(yáng)性,上機(jī)前一定要在吸水紙上吸干。在以上的操作過(guò)程中,要保持試驗(yàn)的連續(xù)性,有的工作人員在洗完板時(shí),因故未能及時(shí)加A、B顯色液,會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果造成影響,因此要注意試驗(yàn)的連續(xù)性,這