醫(yī)學(xué)免疫學(xué)：檢測(cè)組織細(xì)胞中蛋白表達(dá)的方法

檢測(cè)組織細(xì)胞中蛋白表達(dá)的方法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）免疫組織化學(xué)技術(shù)（IHC）免疫沉淀（IP）免疫印跡（Westernblot）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

為酶免疫測(cè)定技術(shù)的主要形式。是將抗原抗體反應(yīng)的高度特異性和酶的催化放大作用相結(jié)合，發(fā)展建立的一種非放射性免疫標(biāo)記分析方法。免疫組織化學(xué)技術(shù)（IHC）

用標(biāo)記的特異性抗體對(duì)組織切片或標(biāo)本中某些化學(xué)成分的分布和含量進(jìn)行組織和細(xì)胞原位定性、定位或定量研究的技術(shù)。幾種常見(jiàn)的方法：免疫熒光法免疫酶標(biāo)法免疫膠體金技術(shù)免疫沉淀（IP）利用抗原抗體特異結(jié)合的特性，應(yīng)用特意識(shí)別靶蛋白的抗體來(lái)分離、檢測(cè)細(xì)胞或組織中的靶蛋白的方法。關(guān)鍵步驟：細(xì)胞裂解裂解過(guò)程中，不但要大量釋放細(xì)胞內(nèi)蛋白，還要盡可能保證蛋白的完整性。因此通常要加去污劑（破壞細(xì)胞膜磷脂雙層結(jié)構(gòu)，能使膜蛋白進(jìn)一步釋放出來(lái)溶解）和蛋白酶抑制劑（抑制裂解后細(xì)胞提取物中蛋白酶活性）。免疫沉淀抗原抗體復(fù)合物抗原抗體可先形成復(fù)合物，然后再與樹(shù)脂結(jié)合；或者抗體先與樹(shù)脂結(jié)合，然后再與抗原形成復(fù)合物沉淀。免疫沉淀所選用的樹(shù)脂為結(jié)合了A蛋白或G蛋白的親和樹(shù)脂?？贵wFc段與A或G蛋白的結(jié)合能力不同。免疫印跡（Westernblot）

在蛋白質(zhì)凝膠電泳和固相免疫分析基礎(chǔ)上建立的一種蛋白質(zhì)多參數(shù)檢測(cè)技術(shù)?；驹硎峭ㄟ^(guò)特異性抗體與凝膠電泳分離的目標(biāo)蛋白質(zhì)抗原的反應(yīng)，分析抗體結(jié)合的位置和抗體結(jié)合量，進(jìn)而確定特定蛋白質(zhì)抗原分子在細(xì)胞或組織中的表達(dá)情況。一、蛋白質(zhì)抗原電泳分離（一）、樣本處理1、體外培養(yǎng)細(xì)胞蛋白質(zhì)樣本的制備2、組織蛋白質(zhì)樣本的制備3、蛋白質(zhì)定量和保存（二）、凝膠濃度選擇及配制（三）、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的選擇（四）、電泳二、蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)膜1、濕式電轉(zhuǎn)印2、半干式電轉(zhuǎn)印三、抗體雜交（一）封閉（二）抗體雜交四、檢測(cè)1、辣根過(guò)氧化物酶-ECL法2、辣根過(guò)氧化物酶-DAB法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定、操作簡(jiǎn)捷、快速、無(wú)污染等。應(yīng)用最廣泛。但只能定量。免疫組織化學(xué)技術(shù)（IHC）特異性強(qiáng)、靈敏度高、定位準(zhǔn)確，可研究目的蛋白的運(yùn)動(dòng)。不適合定量。免疫沉淀（IP）研究目的蛋白的理化特性。可用來(lái)蛋白純化、去除目的蛋白優(yōu)化免疫印跡效果、測(cè)定蛋白修飾位點(diǎn)信息、測(cè)定蛋白降解速度、測(cè)定酶活。免疫印跡（