藥用植物鞣質的研究進展

藥用植物鞣質的研究進展

這種復合物也是一種復雜的多酚類化合物，具有相對復雜的沉積物性質。鞣質除在苔蘚植物中很少含有外,廣泛存在于植物界,約70%以上的中草藥中含有鞣質類化合物,富含鞣質的如五倍子、貫眾、兒茶、地榆、訶子、大黃、牡丹皮、山茱萸、狗脊、仙鶴草和老鸛草等。鞣質的多元酚類結構賦予它一系列獨特的化學性質,使它受到了國內外廣泛的關注。醫(yī)藥、林業(yè)、農業(yè)、食品、化工、環(huán)境等學科領域均有學者從不同角度開展了鞣質的基礎應用研究,尤其在醫(yī)藥領域的研究倍受矚目。目前鞣質的抗艾滋病(AIDS)研究令人關注,低分子量的水解鞣質,尤其二聚鞣花鞣質可作為口服劑來抑制AIDS,仙鶴草素在濃度0.01g/L~0.1g/L時就可起到最強的抑制AIDS病毒HIV生長的效果。鞣質能清除生物體內過剩的自由基,維護細胞膜的流動和蛋白質的構象,防止輻射誘發(fā)的DNA斷裂,從而在抑制脂質過氧化、心血管病、抗癌、抗突變、抗衰老、抗白內障等方面有獨到功效。一些水解鞣質,如:鞣酸、云實素、賈木鞣花素、訶子酸本身就有降低血壓的作用,提純物活性高于原草藥煎劑。近幾年國外對鞣質藥理活性的研究方興未艾,鞣質的藥理價值被不斷開發(fā),其應用前途非常廣泛。隨著鞣質研究的不斷深入,迫切需要對鞣質進行精確的定性定量分析,近幾年鞣質分析方法的進展十分迅速,各種新方法不斷涌現,本文作者對此進行了總結。1香草醛濃硫酸反應對二甲氨基苯甲醛反應的啟示鞣質分為可水解鞣質、縮合鞣質和新型鞣質,在對鞣質組分進行詳盡的鑒定之前,一般可通過一些特殊的反應對鞣質進行類型分析。常用的反應有三氯化鐵反應、明膠氯化鈉反應、溴水反應、乙酸鉛-硫酸鐵銨反應、香草醛濃硫酸反應、對二甲氨基苯甲醛反應、甲醛濃鹽酸-硫酸鐵銨反應等。其中,三氯化鐵反應顯灰綠色,說明含有鄰二酚羥基化合物,該鞣質為縮合型鞣質;溴水與縮合鞣質產生沉淀,與水解鞣質不沉淀;香草醛濃硫酸反應與對二甲氨基苯甲醛反應呈紅色,說明存在兒茶素類縮合鞣質;甲醛濃鹽酸-硫酸鐵銨反應是鑒別可水解鞣質和縮合鞣質的著名反應,此法可將縮合鞣質和水解鞣質分離,甲醛鹽酸煮沸將縮合鞣質沉淀濾去,水解鞣質不被沉淀留在溶液中用鐵鹽檢查,靈敏度高,可達十萬分之五。進一步的鞣質鑒定一般采取紙層析法、紫外法、紅血球凝聚法和薄層層析法,在這其中目前最常用的是薄層層析法。紙層析法的分離效果較差,斑點重疊不集中,拖尾現象較嚴重。與紙層析法相比,薄層層析法的分離效果好,斑點集中,檢測鞣質的分解產物沒食子酸的重現性好,靈敏度高。近年來新技術、新方法的應用有力地推動了藥用植物中鞣質的研究,尤其是高效液相色譜的成功應用,不僅可以檢測鞣質組分中的α、β異構體,還可以預試鞣質分子的大小、判斷結構測定中水解反應進行的程度。在鞣質的結構鑒定中,近年來大量使用光譜分析。1H-NMR、X-射線、CDFAB-MS、13C-NMR技術被大量使用。應用CD譜可以確定鞣質中HHDP、DHHDP的絕對構型;應用1H-NMR并結合化學降解產物的比旋度可分析得到整個分子的絕對構型;應用C-NMR可以確定整個分子的碳骨架,確定各個官能團之間的結合位置。這些較先進的技術和先進的色譜分離方法結合在一起,已經闡明了數百種新鞣質化合物的結構。2表面的含量是測量2.1重離子檢測方法鞣質的經典含量測定方法有很多種,重量法、容量法、比色法、分光光度法等經典方法均可作為鞣質的含量測定方法,它們的特點是簡單、容易操作,不需要貴重的儀器,因此特別在工業(yè)中被廣泛應用,如:用于飲料和工業(yè)廢水中鞣質的測定等。其中,最常用的有皮粉法、高錳酸鉀法、干酪素法、絡合滴定法、比色法和分光光度法。皮粉法是國際公認的鞣質含量測定方法。皮粉中的主成份是蛋白質,鞣質可通過分子中的酚羥基與蛋白質中的酰胺基形成氫鍵而結合成不溶于水的沉淀,因此通過重量分析可測定鞣質含量。皮粉法適用的范圍非常廣,我國藥典1995年版中鞣質含量的測定采用的就是皮粉法。它的缺點是耗用樣品多,測定時間長,而且沒有選擇性,其測定結果往往偏高,故一般只適用于測定鞣質含量高的生藥,樣品較少或含量低的則不適于測定。重量法一般使用皮粉,也可用其它沉淀劑,Reed就用三價鐿離子取代皮粉與鞣質結合進行重量分析,測定了雙子葉植物中的鞣質含量。干酪素法的特點在于干酪素能選擇性地結合有生理活性的鞣質,因此測出的是有生理活性的鞣質,而無生理活性的鞣質如鞣酐則不被測定,選擇性比皮粉法要高,一般適于測定鞣質含量較低的鞣質。羅文毓等對干酪素法和皮粉法進行了比較,實驗表明干酪素法的結果明顯低于皮粉法,且重復性好。程立方用干酪素法測定了側柏葉中有生物活性的低含量鞣質。高錳酸鉀法利用鞣質有較多酚羥基易被氧化的性質,用高錳酸鉀滴定樣品液中鞣質。同皮粉法一樣高錳酸鉀法選擇性較小,易受樣品中還原性物質干擾,誤差較大,最大的優(yōu)點是操作簡單。除了高錳酸鉀外,常用的氧化滴定劑還有硫酸鈰等。已報道的有在18種燒傷收斂中草藥、中藥地榆、醋炒槐米等質量評價中的應用。鞣質分子內的多個鄰位酚羥基可作為多基配體與一個中心離子,如:銅、錫、鉍、鋅、汞、鐵等絡合,形成環(huán)狀的螯合物,在不同的pH值下發(fā)生沉淀。絡合滴定法就是利用鞣質這一性質,通過用EDTA返滴定過量金屬離子來確定鞣質的含量。楊偉對絡合滴定法和高錳酸鉀法測定啤酒花中鞣質含量進行了對比,結果表明絡合滴定法的準確度和精密度要高,終點更清晰明顯。比色法利用某些試劑與鞣質發(fā)生顏色反應,用比色計測定吸光度以確定鞣質含量。常用的試劑有香草醛-鹽酸、普魯士藍、Folin-Denis和硫酸等。分光光度法是利用鞣質與某些試劑反應生成有色化合物,通過吸光度測定確定樣品中的鞣質含量。該方法在目前的應用最為廣泛。常用的顯色劑有氯化鐵、氯化鐵-1,10二氮雜菲、Folin-Ciocalteu試劑、5%鹽酸-丁醇、甲胺基粉-重鉻酸鉀溶液、FolinDAB8試劑、Folin-Denis試劑、偏釩酸銨等,這些顯示劑的檢測范圍一般在500~700nm之間。已被用于檢測果汁、果渣、啤酒、茶葉、高粱、制革污水和中藥如五倍子中鞣質含量的檢測。鞣質在紫外區(qū)275nm左右處有較強的特征吸收,可以用紫外法對鞣質進行定量分析。胡耀星利用高嶺土特異吸收鞣質,使鞣質的紫外吸收消失,用紫外法測得了柿子和柿醬中的單寧含量,最低檢測限可達0.01~0.1g/L。2.2檢測層面的研究近年在鞣質含量測定方面也出現了一些較新的方法。這些方法包括高效液相色譜法、原子吸收分光光度法、薄層掃描法、熱透鏡光譜法、高靈敏示波電位動力學分析法和電化學傳感器法等。它們具有高靈敏度、高準確度和不易受干擾的共同特點,將會成為鞣質分析的主要研究手段。高效液相色譜在鞣質分析中的應用,為鞣質定量分析開辟了非常有前景的道路,已成為鞣質含量測定非常有效和準確的方法。Salagoity用高效液相色譜法測定了五倍子中五倍子鞣質的含量。劉延澤等利用反相高效液相色譜成功地測定了茶葉70%丙酮提取物及其抗癌有效成份EGCG。已報道的還有大黃、檳榔花、地榆和茶葉中鞣質含量的測定。原子吸收分光光度法是利用鞣質與金屬離子發(fā)生沉淀反應后通過測定過量金屬離子間接測定鞣質的含量,沉淀劑一般為銅離子的乙酸銨溶液。該方法簡單快速,不受顏色及共存物質的干擾。Yebra等利用原子吸收分光光度法測定了白酒和茶葉中鞣質含量,并結合流動注射分析技術用于工業(yè)上的實時質量監(jiān)測。杜小燕等用此法間接地測定了五種茶葉中鞣質的含量,線性響應范圍較寬。Cladera等報道了用熱透鏡光譜法測定白葡萄酒中鞣質的含量,其檢測限達到了5ng/mL,與分光光度法約100ng/mL的檢測限相比,有了飛速的提高,為樣品中痕量鞣質含量的測定開辟了光明的前景。蔡毓瓊首次報道了薄層掃描法在鞣質測定中的應用,他利用島津CS-930型薄層掃描儀對余甘子喉片中沒食子酸的含量進行了測定,該方法測定鞣質含量簡單、快速、穩(wěn)定,具有樣品處理簡單、不需任何顯色劑的特點,大大增強了結果的準確性和可靠性,適于推廣。Ghindilis等用電化學傳感器測定了茶葉中茶多酚的含量,該方法采用經過固化的酶電極,連續(xù)測定500次多酚類化合物酶的活性也不會減低,可與流動進樣系統(tǒng)相連接用于實時監(jiān)測。丁亞軍等利用高靈敏示波電位動力學分析法測定了茶葉中的單寧含量,該方法利用KBrO3和KBr的氧化還原反應與茶單寧的溴化反應之間的差異,將動力學分析法和示波電位法結合起來,能夠測定μg/L級的茶單寧,而且直觀靈敏,測定范圍寬,不受顏色及沉淀的影響。適于飲料及生物樣品中痕量鞣質的測定。3關于