硫酸軟骨素生產(chǎn)工藝

硫酸軟骨素生產(chǎn)工藝硫酸軟骨素生產(chǎn)工藝動(dòng)物軟骨中均含有酸軟骨素，大家畜的鼻中隔及喉頭骨中含量較多，據(jù)報(bào)道，豬鼻中隔含有41%左右。藥物硫酸軟骨素是從軟骨中提取的硫梳軟骨素A和硫酸軟骨素C等各種硫酸軟骨素的混合物。有的商品稱康得靈。本品用于因鏈、霉素所引起的聽(tīng)覺(jué)障礙癥的預(yù)防和冶療，如偏頭痛、神經(jīng)痛、風(fēng)濕痛、肝炎等癥。性狀：硫酸軟骨素是一種白色粉末，吸水性強(qiáng)，易溶于水而成粘稠液體，不溶于乙醇、丙酮和乙醚等有機(jī)溶劑中，其鹽類對(duì)熱較穩(wěn)定上。制法：硫酸軟骨的制劑和片劑，它的生產(chǎn)工藝主要有稀堿和濃堿和濃堿提取兩種，下面各介紹兩種。一、稀堿提取工藝之一工藝流程：豬喉(鼻)軟骨，浸出氫氧化鈉過(guò)濾，浸出液，酶水解鹽酸、胰酶53?54C。，水解液，吸附活性白土、活性炭，沉淀氯化鈉、乙醇，PH值6.3?7，沉淀物，干燥無(wú)水乙醇60?65C，干品，制劑氯化鈉P值5.5，注射液。操作過(guò)程：浸出：將2%氫氧化鈉250千克置浸泡罐內(nèi)，加入潔白干燥軟骨40千克，在室溫下每隔半小時(shí)緩緩攪拌1次，待浸出液比重達(dá)波美5.0(20C)度時(shí)出料。用紗布過(guò)濾。骨渣再用適量蒸鎦水浸泡20分鐘，過(guò)濾。二次過(guò)濾液合并，使濾液總體積為200升。酶解：將上述濾液置消化罐中，攪拌下緩緩加入1：1鹽酸并調(diào)PH值8.8?9.0,用循環(huán)水浴加熱。罐內(nèi)溫度達(dá)50C。時(shí)加入相當(dāng)于1：25倍胰酶1300克（宜使用高倍的胰酶）繼續(xù)升溫，控制消化溫度為53?54C，不得超過(guò)50C循環(huán)水浴溫度55?57C保持，水解7小時(shí)。在水解過(guò)程中，由于氨基酸的增加，PH值會(huì)有下降，需用10%的氫氧化鈉隨時(shí)調(diào)整PH值至8.8?9.0,在水解過(guò)程后期，取反應(yīng)液少許，用濾紙自然過(guò)濾到比色管中，10毫升濾液滴加10%三氯醋酸1?2滴。若僅微顯渾濁，說(shuō)明消化情況良好，否則可酌情增加適量胰酶。吸附：使內(nèi)溫53?54C保持，用1：2鹽酸調(diào)節(jié)PH值至10%氫氧化風(fēng)俗溶液調(diào)PH值至6.0，并加入與濾液體積等同的1%氯化鈉溶液。溶解后過(guò)濾，濾液在攪拌下緩緩加入伍0%乙醇，使醇含量為75%，每隔30分鐘攪拌一次，共攪拌4?6次，使細(xì)小顆粒增大而沉降。靜置8小時(shí)以下，虹吸出上清液。硫酸軟骨素沉淀用無(wú)水乙醇充分脫水，洗滌2次，抽干，60?65干燥或真空干燥。制劑：硫酸軟骨素注射液配制配方：硫酸軟骨素40克（以純品計(jì)）氧化鈉17克注射用水加至3000毫升按配方稱取標(biāo)示量107%的硫酸軟骨素粉，撒入注射用水中，使其膨脹，攪拌溶解。再加入氯化鈉，調(diào)整PH值5.5左右，加熱煮沸，用布氏漏斗趁熱過(guò)濾，濾液迅速冷卻，于0?5處放置過(guò)夜。次日過(guò)，濾液加入0.3?0.5%活性炭迅速加熱至微沸，保持15分鐘，用砂濾包扎濾紙，乘藥液微沸時(shí)真空抽濾，濾液迅速冷卻至室溫，補(bǔ)加水稀釋至全量，過(guò)濾至澄明，灌封，常壓滅菌。硫酸軟骨素溶液易繁殖微生物，必要時(shí)可在處方中加入2%(V/V)的苯甲醇。說(shuō)明與討論：本品以含硫量計(jì)可達(dá)到5%以上，相當(dāng)于硫酸軟骨素或硫酸軟骨素鈉的百分含量，分別為71.64%及75.07%。用胰酶水解，可同時(shí)作用于蛋白質(zhì)和糖元。為了避免水解反應(yīng)局部過(guò)熱而影響酶的活力，工藝中采用循環(huán)水浴加熱裝置。軟骨浸泡時(shí)間長(zhǎng)，蛋白質(zhì)含量則相應(yīng)增多，從而會(huì)影響到成品的純度。為些規(guī)定浸出液比重的限度為波美5度。浸出的速度與室溫有關(guān)。由于此工敢的酶水解不可能完全徹底，而胰酶本身即為一種蛋白質(zhì)，使用活性白土作為吸附劑，除剩余的蛋白質(zhì)和多肽是有效的?；钚园淄恋谋砻骐S著PH值的升高而增大，PH值5以上粒子顯著變細(xì)，因而活性白土在中性時(shí)吸附性能較好。但由于中性時(shí)粒子過(guò)細(xì)無(wú)法通過(guò)濾器，所以在過(guò)濾前將PH值調(diào)至5.4,使過(guò)］比較順利?；钚园淄辽锌晌浇M織胺，與活性炭配合應(yīng)用還有脫色與去熱原的作用。酶水解及吸附過(guò)程溫度控制在53?54C。，不仞是酶反應(yīng)的需要，且能阻止微生物生長(zhǎng)，從過(guò)濾開(kāi)始至乙醇沉淀以前，操作要迅速，避免腐敗。本工藝所用活性白土的處理方法：取100千克活性白土，加常水70千克、鹽酸10升攪勻，通入蒸汽煮沸1小時(shí)，冷卻。用常水洗至PH值4.4，再用蒸鎦水反復(fù)洗至PH值5.1。吊濾后壓干，置盤中105C烘干粉碎，200C。活化3小時(shí)后置密封容器內(nèi)保存?zhèn)溆谩６?、稀堿提取工藝之二軟骨（絞碎），提取2%氫氧化鈉，堿性提取物，酶水解鹽酸、胰酶PH值8.5?9.0、53?56C。。6?7小時(shí)，水解液，鹽酸PH值7.0，濃縮液，沉淀乙醇，沉淀物，干燥，粗制粉，精制水，鹽酸PH值3.0過(guò)濾，濾液，水解氫氧化鈉、胰酶PH值8.5?9.0、53?56C。，4小時(shí)，二次水解液，鹽酸，過(guò)濾PH值6.0?7.0、100C。濾液，乙醇，沉淀干燥。精制粉，制劑，成品。工藝過(guò)程：提?。簩⒊齼糁拒钙渌Y(jié)締組織的軟骨絞碎，加入4倍量2%氫氧化鈉溶液浸提24小時(shí)。過(guò)濾。棄去濾渣，濾液合并。酶水解：用1：1鹽酸調(diào)PH值為8.5?9.0，加入0.4%量的胰酶，在53C。?56C。條件下不斷攪拌消化6?7小時(shí)，速冷至30C。以下，再用1：1鹽調(diào)PH值至7.0放置過(guò)夜（須防止腐）。虹吸上清液，沉淀用布袋吊濾。沉淀：所得濾液在60C。以下減雨衣縮至原體積的1/2。過(guò)濾。濾液加入95%乙醇，使醇濃度下降至65%?70%，放置過(guò)夜。過(guò)濾，沉淀物用95%乙醇洗滌3次，在60C。以下干燥，取得粗制粉?？晒┛趧┯?。精制取上述粗制粉，加入20倍量蒸鎦水溶解，用1：1鹽到調(diào)PH值至3.0，冷庫(kù)內(nèi)放置過(guò)夜。過(guò)濾，濾液用20%氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至8.5?9.0，加入0.4%量的胰酶，于53C。?56C。攪拌消化4小時(shí)，放冷至30C。以下，調(diào)PH值6.0?7.0，加熱到100C。保持20分鐘，立即冷卻。過(guò)濾濾液加入95%乙醇，使乙醇濃度下降至70%左右，放置4小時(shí)以下。過(guò)濾。以乙醇、丙酮、乙醚洗滌沉淀物。減壓干燥，得精制粉。制劑：A康得靈注射液配方：硫酸軟骨素粉撒入注射用水中，使之溶解，加入苯甲醇，最后補(bǔ)加注射用水足量，用鹽酸或氫氧化鈉溶液液調(diào)PH值6.0?7.0，過(guò)濾，灌封，常壓滅菌即得。B康得靈糖衣片配方：硫酸軟骨素粉0.12克淀粉0.125克硬脂酸鎂0.005克片重0.25克取濕淀粉制粒，干燥后按配方混入乙過(guò)80?100目篩的硫酸軟骨素粉和硬脂酸鎂壓片，包衣，即得。說(shuō)明與討論：有的工藝用稀堿提取后，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)PH值至2.8?3.0，加熱至60C。，過(guò)濾的溶液用氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至7.0?7.5，加熱至70C。，過(guò)濾后乙醇沉淀得粗品，精制時(shí)用A、R、3942霉菌蛋白酶進(jìn)行水解，效果也好。提取前的確小時(shí)應(yīng)間歇攪拌；消化后要立即冷卻以防腐敗；濃縮工序可濃縮至原體積的1/5左右，以減少乙醇用量；精制工序中在酶水解并調(diào)PH值6.0?7.0后?？杉??3%針劑炭再加熱至100C。。本工藝制得的硫酸軟骨素制粉，含量為65%左右。所以在注射液配方中所規(guī)定硫酸軟骨素量并不是實(shí)際稱量的值，而是應(yīng)按精粉的實(shí)際百分含量進(jìn)行折算。實(shí)際上要加30克左右。軟骨每千克用2%氯化鈉溶液4800毫升和2%氫氧化鈉溶液1200毫升的混合液提取24小時(shí)，殘?jiān)儆?%氯化鈉3200毫升和2%氫氧化鈉800毫升的混合液提取1次，所得提取液經(jīng)胰酶水解，加熱除去蛋白質(zhì)后，通過(guò)乙醇沉淀等工序，能得到較純的硫酸軟骨素。三、濃堿提工藝之一工藝路線：豬喉頭軟骨（絞碎），水解提取濃氫氧化鈉40C。，2小時(shí)，堿性提取物，鹽酸PH值7.0?7.2提取液，去糖元淀粉酶，甲苯PH值7.0?7.2、3.8?40C。，1小時(shí)，水解液，去酸性蛋白鹽酸，滑石粉PH值2.8?3.0，65C，濾液，去酸性蛋白質(zhì)氫氧化鈉，滑石粉PH值7.3?7.5C。清液，沉淀乙醇，沉淀物，干燥，成品（片劑原料）。工藝過(guò)程：原料處理：將豬頭洗凈，在80C以下蒸煮約2小時(shí)，除去脂肪結(jié)締組織，用水洗凈，一10C。貯藏2周以上，備用。水解提取：將冷凍軟骨解凍，絞碎。于水解鍋加入333升波美20度氫氧化鈉溶液。在攪拌下加入軟骨100千克，加熱至40C，提取2小時(shí)。加鹽酸調(diào)PH值至7.0?7.2，加淀粉酶8000單位（先用提取液調(diào)成粥狀）和甲苯50毫升，38?40C。水解1小時(shí)，取小樣過(guò)濾，將濾液裝入5毫升試管中，滴入碘試液2滴，停止水解。去蛋白質(zhì)：A、 去酸性蛋白質(zhì)：用鹽酸調(diào)節(jié)上述水解液PH值至2.8?3.0，加滑石粉0.75千克，加熱到65C。后，迅速冷卻至室溫（必要時(shí)鍋內(nèi)加冷水），靜置4小時(shí)以上，用折迭帆布濾器反復(fù)過(guò)濾，至濾液澄清為止。B、 去堿性蛋白質(zhì)：將上述溶液用氫氧化鈉溶液調(diào)PH值至7.0?7.5,加放0.75千克，加熱到75C。后，迅速冷卻至室溫，靜置4小時(shí)以上。用折迭帆布濾器過(guò)濾，濾液要求澄清。沉淀、干燥：將濾液加2.5倍體積90%以上的乙醇，邊加邊激烈攪拌，沉淀1?2小時(shí)，等上面乙醇液不渾濁后，將上清液吸出進(jìn)行回收。沉淀物抽干后取出，放在65%?68%乙醇2022年0毫升中攪拌30分鐘，放置過(guò)夜。次日，吸取上清液回收乙醇，沉淀物帛干手用95%乙醇2022年0毫升處理2次，每次1小時(shí)，抽干。然后攤于清潔的盤中，置烘箱中70C。烘干，為硫酸軟骨素片原料。制劑：本品每片原料含量如下：硫酸軟骨素鈉鹽0.125克滑分0.005克淀粉顆粒0.135克片得0.268克說(shuō)明與討論：加入淀粉酶的目的是除去糖元（即動(dòng)物淀粉）。根據(jù)不同種類和不同效價(jià)的淀粉酶，應(yīng)掌握其最適溫度和最適PH值，并注意調(diào)整用量，但如果只作為片劑原料，可不必除去糖元。四、濃堿提取工藝之二工藝路線：軟骨（絞碎），提取氫氧化鈉40C。，3小時(shí)，提取液，鹽酸PH值7.2濾液，酶水解，胰酶PH值7.2，40C。，3小時(shí)，水解液，乙醇沉淀，洗活70%乙醇，脫鹽沉淀物，脫水90%乙醇脫水沉物，干燥70C。，成品（片劑原料）。工藝過(guò)程：提取：取除去脂肪及結(jié)締組織的漿軟骨，經(jīng)解凍后絞碎，稱重，置不銹鋼夾層鍋中，加入原料重量1/2的波美15?20度氫氧化鈉溶液（即每100千克碎軟骨加60千克），然后攪拌加入碎軟骨。加熱至液溫40C。，保溫經(jīng)提取3小時(shí)后，冷卻。緩緩加入工業(yè)鹽酸調(diào)PH值至7.2,紗布過(guò)濾，濾渣擠干后廢棄。去糖無(wú)限元和蛋白質(zhì)：將過(guò)濾液置夾層鍋中，保溫40C。，調(diào)PH值至2，加入3942蛋白酶（每千克原料15萬(wàn)單位）和胰酶（適量），同時(shí)加入甲苯100毫升，攪拌水解3小時(shí)，水解結(jié)束時(shí)取小樣過(guò)濾，濾液分別用碘試液及10%三氯醋酸測(cè)定合格后，加熱至70C，加入適量滑石粉（約為原料的1%），保溫10分鐘左右，然后迅速冷卻至40C以下，過(guò)夜。沉淀：次日，將冷卻的液體用折布過(guò)濾，濾液必須澄清，對(duì)碘試液和三氯醋酸試液反應(yīng)均顯陰性。將濾液放于缸內(nèi)，在激烈攪拌下加入約2.5倍量的90%以上乙醇，使濾液的醇濃度下降至65?70%，停止攪拌，靜置沉淀。洗滌、干燥：待乙醇液加收。沉淀物用布氏漏斗抽干后取出，加入20升70%的乙醇，攪拌均勻，然后放置。待沉淀后，吸去上清液，沉淀物抽干，再加入20升95%乙醇，如上法洗滌2次。抽干后，攤于清潔的盤中，置烘箱中70C以下烘干。即可作為制劑原料。說(shuō)明和討論：實(shí)踐證明，本工藝與上面另一濃堿提取工藝對(duì)比，得率較高，但含量較低。有工藝用濃堿提取水化后，即緩緩用鹽酸調(diào)PH值約為2.8過(guò)濾。濾液用氫氧化鈉調(diào)PH值約為6.7,靜置沉淀得品，再經(jīng)胰酶水解，精制得精品。濃堿工藝所用氫氧化鈉溶液濃度都在10%以上，有的甚至達(dá)40%以上。雖然較用稀氫氧化鈉的工藝操作簡(jiǎn)便，提取時(shí)間短，但濃堿也有可能使硫酸軟同h降解和影響療效。無(wú)論哪種工藝，原料處理很重要?？蓪④浌窃谒侵蠓?0分鐘左右，除去脂肪和其他結(jié)束結(jié)締組織，然后與帶棱角的石子置一轉(zhuǎn)筒中放置，以磨去殘留肌肉，也可用胰酶處理，即每100千克原料，加入胰酶粉約8克，在溫水(不超過(guò)50C。)中消化約20分鐘，用水洗凈后即可投料。如用生產(chǎn)藥用胰酶后的粗酶，則每100千克原料加約1千克。用量不宜過(guò)多，時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)使有效成分損失。五、產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)方法目前硫酸軟骨素地方標(biāo)準(zhǔn)較多，尚統(tǒng)一。僅以上海、河南、湖南、山東、江西和四川等省、市藥品標(biāo)準(zhǔn)來(lái)比較：分子式有按硫酸軟骨素(C14H21O14NS)計(jì)算，也有按其鈉鹽(C14H20O14NSNa)計(jì)算的。因而，即使標(biāo)示量彼此相同，但實(shí)際硫酸軟骨素劑量并一一致。還有以含氨基葡萄糖的限量作為純度標(biāo)準(zhǔn)的，但標(biāo)示量并未規(guī)定按照什么標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定量