土建(特殊、關(guān)鍵)過程識別與控制書

土建(特殊、關(guān)鍵)過程識別與控制書（常用版）(可以直接使用，可編輯完整版資料，歡迎下載）

過程識別與控制書土建(特殊、關(guān)鍵)過程識別與控制書（常用版）(可以直接使用，可編輯完整版資料，歡迎下載）土方開挖工程施工過程流程圖·定位放線R、YU→確定開挖順序和坡度→沿灰線切出槽邊輪廓線→分段分層開挖→降排水→放坡、修→臨時支撐加固→·留出預(yù)留土層、清理整平→釬探R→驗槽R、YIN需要關(guān)注的問題質(zhì)量方面環(huán)境方面安全方面1.基底超挖★2.基底未保護3.施工順序不合理4.開挖尺寸不足，邊坡過陡土方運輸遺灑避免邊坡坍塌預(yù)防措施1.①根據(jù)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)圖繪制基坑開挖基底標高圖，經(jīng)審核無誤方可使用。②土方開挖過程中，特別是臨近基底時，派專業(yè)測量人員控制開挖標高。2.基坑開挖后盡量減少對基土的擾動，如基礎(chǔ)不能及時施工時，應(yīng)預(yù)留30cm土層不挖，待基礎(chǔ)施工時再開挖。3.開挖時應(yīng)嚴格按施工方案規(guī)定的順序進行，先從低處開挖，分層分段依次進行，形成一定坡度，以利排水。4.基底的開挖寬度和坡度，除考慮結(jié)構(gòu)尺寸外，應(yīng)根據(jù)施工實際要求增加工作面寬度。1.運輸車輛不超載。2.現(xiàn)場出口搭設(shè)腳手架平臺，派專人對運輸車輛進行拍打和修整，并加蓋好帆布。3.現(xiàn)場出口設(shè)洗車池，每輛車必清洗，池內(nèi)清水可以作為現(xiàn)場灑水、養(yǎng)護等重復(fù)利用。4.堆在現(xiàn)場的土，應(yīng)該用綠網(wǎng)式帆布覆蓋嚴密，以防止粉層對大氣的污染。1.基坑開挖放坡坡度要嚴格執(zhí)行《建筑地基基礎(chǔ)工程施工質(zhì)量驗收規(guī)范》的相關(guān)要求，不得隨意放坡。2.基坑采用護坡時，必須制定經(jīng)計算分析的可靠護坡錨固方案，并制定護坡專項方案。3.基坑開挖過程，派專人對基坑的穩(wěn)定性進行觀察，以便有情況及時發(fā)現(xiàn)處理。4.當開挖較深時，應(yīng)采取措施防止基坑底部土的隆起并避免危害周邊環(huán)境。糾正措施注：·XXXX——關(guān)鍵過程◆XXXX——特殊過程帶★的為需要制定糾正措施的方面R—記錄或報告YIN—隱檢YU—預(yù)檢過程識別與控制書地下防水工程施工過程流程圖卷材防水：材料進場檢驗試驗R→基層清理YIN→涂刷基層處理劑→·復(fù)雜部位增強處理YIN→涂刷基層膠粘劑→鋪貼卷材→◆卷材搭接縫及收頭封邊處理→檢查驗收YIN→保護層施工YIN烘烤卷材涂膜防水：材料進場檢驗試驗R→基層清理YIN→配制底膠→涂刷底膠→·復(fù)雜部位增強處理YIN→第一道涂膜→玻纖布鋪貼→第二道涂膜→第三、四道…涂膜至設(shè)計厚度→清理、檢查、修補→檢查驗收YIN→保護層施工YIN需要關(guān)注的問題質(zhì)量方面環(huán)境方面安全方面1.材料選擇2.空鼓★3.滲漏★廢防水材料的排放避免火災(zāi)發(fā)生、中毒預(yù)防措施1.多方案、多材料的比較，選擇一種價格合理，最適合現(xiàn)場實際情況使用的防水材料。2.①施工時要嚴格控制基層含水率，卷材鋪貼時，要將空氣排除徹底，接縫處應(yīng)認真操作，使其粘接牢固。②對陰陽角、管根等特殊部位，在防水施工前，應(yīng)做增強處理，可根據(jù)具體部位采取有效措施。3.①卷材末端的收頭處理，必須用嵌縫膏或其它密封材料封閉。②防水層施工完成后，要做好成品保護，并及時按設(shè)計要求做保護層。1.在防水材料選型時應(yīng)優(yōu)先選用無毒無味、對環(huán)境、對人體污染小的材料。2.底膠宜根據(jù)每班工作量配制，避免浪費，盛膠液的容器應(yīng)隨用隨密封，以免膠液中的溶劑稀釋揮發(fā)。3.廢的防水材料應(yīng)堆放在現(xiàn)場指定的地點。1.選材時宜選擇不燃燒的防水材料。2.材料運輸及存放時應(yīng)立放，并應(yīng)嚴禁明火及烈日暴曬，堆放處應(yīng)遠離熱源及易燃品。3.施工現(xiàn)場應(yīng)備足夠的消防器材及消防設(shè)施，消防道路暢通；施工地點及庫房應(yīng)備夠滅火器材，并派專人看護，以防火災(zāi)的發(fā)生。4.施工溫度以10~25℃最佳，不宜在大于35℃的氣溫下施工。糾正措施注：·XXXX——關(guān)鍵過程◆XXXX——特殊過程帶★的為需要制定糾正措施的方面R—記錄或報告YIN—隱檢YU—預(yù)檢過程識別與控制書回填土工程施工過程流程圖基坑（槽）清理→檢驗土質(zhì)/灰粉，按比例拌土R→分層鋪填→初步整平→·分層打夯/碾壓R→分項驗收需要關(guān)注的問題質(zhì)量方面環(huán)境方面安全方面1.未按要求測定土的干密度2.回填土下沉3.回填土夯壓不密實4.管道下部夯填不實土方運輸遺灑打夯機用電安全預(yù)防措施1.回填土每層都應(yīng)測定夯實后的干土密度,檢驗其密實度，符合設(shè)計要求才能鋪上層土;未達到設(shè)計要求的部位應(yīng)有處理方法和復(fù)驗結(jié)果。2.因虛鋪土超過規(guī)定厚度或冬期施工時有較大的凍土塊，或壓實遍數(shù)不夠，甚至漏壓，坑(槽)底有機物或落土等雜物清理不徹底等因素造成回填土下沉，施工中要認真執(zhí)行規(guī)范規(guī)定，檢查發(fā)現(xiàn)后及時糾正。3.回填時應(yīng)在夯壓前對干土適當灑水濕潤，對土太濕造成的“橡皮土”要挖出換土重填4.回填管溝時，為防止管道中心線位移或損壞管道，應(yīng)用人工先在管子周圍填土夯實，并應(yīng)從管道兩邊同時進行，直至管頂0.5m以上，在不損壞管道的情況下，可采用機械回填和壓實。1.運輸車輛不超載。2.現(xiàn)場出口設(shè)洗車池，每輛車必清洗，池內(nèi)清水可以作為現(xiàn)場灑水、養(yǎng)護等重復(fù)利用。3.堆在現(xiàn)場的土，應(yīng)該用綠網(wǎng)式帆布覆蓋嚴密，以防止粉層對大氣的污染。4.拌制灰土?xí)r，應(yīng)及時將未用完的白灰放入專用庫房；已經(jīng)拌好的灰土和篩好的砂應(yīng)及時覆蓋或灑水以免產(chǎn)生灰塵。1.必須設(shè)分級保護。蛙夯電源電纜必須選用橡套軟電纜，長度不得超過50米。電源開關(guān)至電機段的纜線應(yīng)穿軟管敷設(shè)固定。2.打夯機應(yīng)用單項開關(guān),手握部位應(yīng)有絕緣保護。3.所有臨時用電必須由電工接至作業(yè)面，其他人員禁止亂接電線。機電設(shè)備操作人員應(yīng)持證上崗，并按規(guī)定使用好個人防護用品，戴好絕緣手套，其它非操作人員禁止操縱機電設(shè)備。糾正措施注：·XXXX——關(guān)鍵過程◆XXXX——特殊過程帶★的為需要制定糾正措施的方面R—記錄或報告YIN—隱檢YU—預(yù)檢過程識別與控制書大體積混凝土施工施工過程流程圖定位放線R、YU→側(cè)模支設(shè)YU→底板下鐵綁扎→底板上鐵綁扎YIN→·混凝土澆筑R→·養(yǎng)護、測溫R需要關(guān)注的問題質(zhì)量方面環(huán)境方面安全方面控制裂縫的產(chǎn)生★1.噪聲(砼輸送泵、砼振搗棒)的排放2.混凝土運輸?shù)倪z灑1.基坑臨邊防護2.泵管防爆預(yù)防措施1.優(yōu)化配合比設(shè)計，采用低水化熱水泥，并摻用一定配比的外加劑和摻合料，同時采取措施降低砼的出機溫度和入模溫度。2.砼澆筑應(yīng)做到斜面分段分層澆筑、分層搗實，但又必須保證上下層砼在初凝之前結(jié)合好，不致形成施工冷縫，應(yīng)采取二次振搗法。3.在四周外模上留設(shè)泌水孔，以使混凝土表面泌水排出，并用軟軸泵排水。4.砼澆筑到頂部，按標高用長刮尺刮平，在砼硬化前1~2h用木搓板反復(fù)搓壓，直至表面密實，以消除砼表面龜裂。5.砼澆筑完后，應(yīng)及時覆蓋保濕養(yǎng)護或蓄水養(yǎng)護，并進行測溫監(jiān)控，內(nèi)外溫差控制在25℃以內(nèi)。1.混凝土振搗采用低噪音振搗棒，振搗時不得碰到鋼筋或鋼模板；罐車在等候進場時必須熄火，以減少噪音擾民。夜間施工時，要嚴格控制噪聲作業(yè)，對強噪音設(shè)備(如砼地泵)，加設(shè)隔音棚遮擋，以實現(xiàn)降噪。2.現(xiàn)場設(shè)置洗車池和沉淀池、污水井，罐車在出現(xiàn)場前均要用水沖洗，以保證市政交通道路的清潔，減少粉塵的污染。沉淀后的清水再用做洗車水重復(fù)使用。1.基坑臨邊防護要按規(guī)范要求?，F(xiàn)場沿基坑四周用紅白相間的φ48鋼管滿設(shè)≥1.2m的防護欄桿，外側(cè)滿掛密目網(wǎng)。2.①泵管的質(zhì)量應(yīng)符合要求，對已經(jīng)磨損嚴重及局部穿孔現(xiàn)象的泵管不準使用，以防爆管傷人②砼泵管在澆筑前要認真擰緊、仔細檢查，澆筑過程中派專人進行看護檢查。泵管轉(zhuǎn)彎宜緩，接頭密封要嚴。③當發(fā)生堵管現(xiàn)象時，立即將泵機反轉(zhuǎn)把砼退回料斗，然后正轉(zhuǎn)小行程泵送，如仍然堵管，則必須經(jīng)拆管排堵處理后再開泵，不得強行加壓泵送，以防發(fā)生炸管等事故。糾正措施注：·XXXX——關(guān)鍵過程◆XXXX——特殊過程帶★的為需要制定糾正措施的方面R—記錄或報告YIN—隱檢YU—預(yù)檢過程識別與控制書鋼筋工程施工過程流程圖鋼筋進場檢驗試驗R→鋼筋加工成型→·鋼筋現(xiàn)場綁扎→◆鋼筋連接→現(xiàn)場取樣試驗R→鋼筋隱蔽檢查YIN需要關(guān)注的問題質(zhì)量方面環(huán)境方面安全方面1.墻柱鋼筋位移★2.鋼筋接頭位置錯誤3.綁扎接頭、對焊接頭未錯開4.箍筋彎鉤不足135°5.板的彎起鋼筋、負彎矩筋被踩到下面1.鋼筋焊接作業(yè)點引起火災(zāi)2.氣壓焊用氧氣瓶、乙炔氣瓶引起火災(zāi)、爆炸1.防高空墜落2.防觸電預(yù)防措施1.①在砼澆注前檢查鋼筋位置，宜用梯子筋、定位卡或臨時箍筋加以固定；澆筑砼前再復(fù)查一遍，如發(fā)生位移，則應(yīng)校正后再澆筑砼。②澆注砼時注意澆筑振搗操作，盡量不碰到鋼筋，澆筑過程中派專人隨時檢查，及時修整鋼筋。2.梁柱墻鋼筋接頭較多時，翻樣配料加工時應(yīng)根據(jù)圖紙預(yù)先畫施工簡圖，注明各號鋼筋搭配順序，并避開受力鋼筋的最大彎矩處。3.經(jīng)對焊加工的鋼筋，在現(xiàn)場進行綁扎時對焊接頭要錯開搭接位置，加工下料時，凡距鋼筋端頭搭接長度范圍以內(nèi)不得有對焊接頭。4.鋼筋加工成型時應(yīng)注意檢查平直長度是否符合要求，現(xiàn)場綁扎操作時，應(yīng)認真按135°彎鉤。5.板的鋼筋綁好之后禁止人在鋼筋上行走或采取有效措施防止負筋被踩到下面，且在砼澆筑前先整修合格。1.①施工現(xiàn)場應(yīng)備足夠的消防器材及消防設(shè)施，消防道路暢通；施工地點應(yīng)備夠滅火器材，電焊機在使用過程中必須與周圍易燃物隔離。②使用電渣壓力焊進行鋼筋連接時，施工地點周圍的木屑等易燃易爆物品應(yīng)清理干凈，以防引起火災(zāi)發(fā)生。③焊工動火時要開動火證，持證上崗，每個焊工各備一臺滅火器設(shè)置專用接水用具，在施工區(qū)域放置兩桶水以便起火時消除隱患。2.①氧氣瓶、乙炔氣瓶運輸及存放時應(yīng)立放，應(yīng)嚴禁明火及烈日暴曬，存放處應(yīng)遠離熱源及易燃品，并加欄桿圍護派專人看護，以防火災(zāi)、爆炸的發(fā)生。②氧氣瓶、乙炔氣瓶應(yīng)使用防震圈及防回火裝置;空瓶與滿瓶應(yīng)分開存放。3.鋼筋加工產(chǎn)生的廢料必須集中存放，以備回收利用。1.在現(xiàn)場高空綁扎或焊接操作必須有操作架（特別是綁扎、焊接梁鋼筋時），操作架上必須鋪跳板，綁好防護攔桿及踢腳板。在極特殊情況下（如焊接柱筋或墻鋼筋的特殊部位），難以搭設(shè)防護架時操作人員須掛好安全帶。臨邊施工須特別做好安全防護。2.電氣設(shè)備必須做好定期檢查工作，確保運行正常，各安全裝置靈敏有效、安全可靠，并加強安全教育。施工機械必須設(shè)置防護裝置及接地或接零保護。每臺機械必須一機一閘并設(shè)漏電保護開關(guān)。糾正措施注：·XXXX——關(guān)鍵過程◆XXXX——特殊過程帶★的為需要制定糾正措施的方面R—記錄或報告YIN—隱檢YU—預(yù)檢過程識別與控制書模板工程施工過程流程圖模板設(shè)計→模板制作→現(xiàn)場拼裝吊運→·現(xiàn)場組裝→預(yù)檢YU→模板拆除→模板倒運需要關(guān)注的問題質(zhì)量方面環(huán)境方面安全方面1.墻體砼厚薄不一致2.墻面凹凸不平、模板粘連3.陰角不垂直、不方正4.梁柱接頭錯臺★1.模板的加工、支拆、清理與修復(fù)時噪聲的排放2.廢棄物的排放大模板不按規(guī)定堆放而傾倒預(yù)防措施1.墻體放線時誤差應(yīng)小，穿墻螺栓應(yīng)全部穿齊、擰緊；加工專用鋼筋固定撐具(梯子筋)，撐具內(nèi)的短鋼筋直接頂在模板的豎向縱肋上。模板的剛度應(yīng)滿足規(guī)定要求。2.①要定期對模板檢修，板面有缺陷時，應(yīng)隨時進行修理，不得用大錘或振搗棒猛振模板或用撬棍擊打模板。②模板拆除不能過早，砼強度達到1.2Mpa方可拆除模板，并認真及時清理和均勻涂刷隔離劑，要有專人驗收檢查。3.對于陰角處的角模，支撐時要控制其垂直度，并且用頂鐵加固，保證陰角模的每個翼緣必須有一個頂鐵，陰角模的兩側(cè)邊粘貼海綿條，以防漏漿。4.在柱模上口焊20×6mm的鋼條，柱子澆完砼后，使砼柱端部四周形成一個20×6mm交圈的凹槽，第二次支梁柱頂模時，在柱頂砼的凹槽處粘貼橡膠條，梁柱頂模壓在橡膠條上，以保證梁柱接頭不產(chǎn)生錯臺。1.①現(xiàn)場木工加工棚必須全封閉，并采取隔音措施，防止噪聲污染。同時配備足夠的滅火器材。②模板在支設(shè)、拆除、清理和修復(fù)時，要輕拿輕放，互相傳遞，不允許亂扔，以免因碰撞等造成破壞或噪聲污染。2.嚴禁使用廢機油作脫模劑。模板面涂刷時，應(yīng)防止滴漏，若有滴漏及時清理干凈，將廢棄物放入有毒有害垃圾池內(nèi)。1.大模板應(yīng)吊放在現(xiàn)場指定地點，不得任意放置。2.大模板吊放必須一次放穩(wěn)(對臉擺放)，保持自穩(wěn)角為70°～80°，并及時進行清理。3.經(jīng)常檢查支設(shè)模板的吊鉤、斜支撐及平臺連接處螺栓是否松動，發(fā)現(xiàn)問題及時組織處理。4.模板拆除時要采取臨時固定措施，防止傾倒殺傷人。糾正措施注：·XXXX——關(guān)鍵過程◆XXXX——特殊過程帶★的為需要制定糾正措施的方面R—記錄或報告YIN—隱檢YU—預(yù)檢過程識別與控制書混凝土工程施工過程流程圖方案設(shè)計→混凝土攪拌、運輸→·混凝土進場檢驗試驗R→◆混凝土澆筑、振搗→養(yǎng)護→拆?！庥^檢查需要關(guān)注的問題質(zhì)量方面環(huán)境方面安全方面1.麻面、蜂窩、孔洞★2.漏漿、爛根3.樓板面凸凹不平整1.噪聲(砼輸送泵、砼振搗棒)的排放2.混凝土運輸?shù)倪z灑3.冬季施工防凍劑的選擇1.防觸電2.防高空墜落預(yù)防措施1.在進行墻柱砼澆筑時，要嚴格控制下灰厚度(每層不超過50cm)及砼振搗時間；為防止砼墻面氣泡過多，應(yīng)采用高頻振搗棒振搗至氣泡排除為止；遇鋼筋較密的部位時，用細振搗棒振搗，以杜絕蜂窩、孔洞。2.墻體支模前應(yīng)在模板下口抹找平層，找平層嵌入模板不超過1cm，保證下口嚴密；澆筑混凝土前先澆筑5~10cm同標號混凝土水泥砂漿；混凝土坍落度要嚴格控制，防止混凝土離析；底部振搗應(yīng)認真操作。3.梁板砼澆筑方向應(yīng)平行于次梁推進，并隨打隨抹；在墻柱鋼筋上用紅色油漆標注樓面+0.5m的標高，拉好控制線控制樓板標高，澆砼時用刮杠找平；砼澆筑2~3h后，用木抹子反復(fù)（至少3遍）搓平壓實；當砼達到規(guī)定強度時方可上人。1.混凝土振搗采用低噪音振搗棒，振搗時不得碰到鋼筋或鋼模板，罐車在等候進場時必須熄火，以減少噪音擾民；夜間施工時，要嚴格控制噪聲作業(yè)，對強噪音設(shè)備(如砼輸送泵)，加設(shè)隔音棚遮擋，以實現(xiàn)降噪。2.砼罐車在撤離現(xiàn)場前，要派人用水將下料斗及車身沖洗干凈。3.冬季施工應(yīng)選用不含尿素（氨氣）的防凍劑。1.提前對電動工具進行檢查，并加強安全教育。振搗設(shè)備應(yīng)設(shè)有開關(guān)箱，并裝有漏電保護器。在指定電箱接線；振搗棒有專用開關(guān)箱，并接漏電保護器(必須達到兩極以上漏電保護)，接線不得任意接長。電纜線必須架空，嚴禁落地。2.①電梯井、通風(fēng)洞等洞口應(yīng)按規(guī)定進行防護，高空施工作業(yè)時應(yīng)系好安全帶和水平防護網(wǎng)。②現(xiàn)場施工必須有操作架(特別時施工外圍及電梯井筒時)鋪跳板，綁防護欄桿及踢腳板。糾正措施注：·XXXX——關(guān)鍵過程◆XXXX——特殊過程帶★的為需要制定糾正措施的方面R—記錄或報告YIN—隱檢YU—預(yù)檢過程識別與控制書鋼結(jié)構(gòu)工程(一)鋼結(jié)構(gòu)制作：加工準備→原材料進廠→·原材料復(fù)驗、入庫、存放R→鋼材表面處理、除銹→放樣、排料、劃線→刨邊，開坡口→趕平→鋼板組對、點焊→·組裝焊接→焊接工藝試驗R→焊接質(zhì)量檢查R→矯正、打磨→成品鉆孔→檢查幾何尺寸→除銹、噴漆→試拼裝、編號→成品檢驗驗收R→入庫→發(fā)運現(xiàn)場需要關(guān)注的問題質(zhì)量方面環(huán)境方面安全方面1.構(gòu)件運輸堆放變形2.焊接變形3.尺寸不準4.焊縫缺陷★1.機械噪聲污染2.粉層及油漆污染1.焊接作業(yè)防火2.構(gòu)件堆放的穩(wěn)固，防止倒塌預(yù)防措施1.構(gòu)件運輸堆放時地面必須墊平，墊點應(yīng)合理，上下墊木應(yīng)在一條垂線上，以避免墊點受力不均而產(chǎn)生變形。2.應(yīng)采用合理焊接順序及焊接工藝或采用夾具、胎具將構(gòu)件固定，然后再進行焊接，以防止焊接后翹曲變形。3.鋼構(gòu)件制作、吊裝、檢查時應(yīng)用統(tǒng)一精度的鋼尺，并嚴格檢查構(gòu)件制作尺寸，不允許超過允許偏差。4.嚴格按規(guī)范要求進行焊接施工，盡量減少焊接缺陷產(chǎn)生。1.廠房內(nèi)的噪聲必須限止在95db以下，并采取相應(yīng)的個人防護。2.嚴格控制粉層在10mg/m3標準內(nèi)尤其場地應(yīng)空氣流通，通風(fēng)良好，操作者應(yīng)佩帶有良好和完善的勞動防護用品加以保護。1.①現(xiàn)場備足夠的消防器材，非火警不得動用。凡動用明火和電、氣焊必須開具動火證，并設(shè)專人看火。②電、氣焊工作業(yè)前，應(yīng)清除作業(yè)范圍內(nèi)易燃物品或采取有效隔離措施。電氣焊作業(yè)完畢應(yīng)切斷電源、氣源，并檢查確認操作區(qū)域內(nèi)無火險隱患。③氧氣、乙炔瓶嚴禁放在動火地點下方，應(yīng)使用防回火裝置及有效遮蓋。2.①構(gòu)件的堆放、擱置應(yīng)十分穩(wěn)固，欠穩(wěn)定的構(gòu)件應(yīng)設(shè)支撐后固結(jié)定位，超過自身高度構(gòu)件的并列間距底大于自身高度，以避免連續(xù)倒塌②構(gòu)件安置要求平穩(wěn)、整齊，堆垛不超過二層。糾正措施注：·XXXX——關(guān)鍵過程◆XXXX——特殊過程帶★的為需要制定糾正措施的方面R—記錄或報告YIN—隱檢YU—預(yù)檢過程識別與控制書鋼結(jié)構(gòu)工程(二)鋼結(jié)構(gòu)安裝：測量放線、驗線R→構(gòu)配件進場復(fù)驗R→確定安裝順序→安裝鋼柱、測量標高位移垂偏R、YIN→安裝主鋼梁R、YIN→二次測量校正鋼柱R→◆高強螺栓連接（初擰→終擰）R、YU、YIN→再次測量校正鋼柱R→◆梁柱節(jié)點焊接連接→外觀檢驗、焊縫檢測R→安裝次梁→樓板壓型鋼板安裝YU→栓釘焊接YIN→封邊、堵頭板安裝/焊接→清理、驗收YU→下部鋼筋鋪設(shè)及設(shè)備管道、電氣安裝→上部鋼筋綁扎YIN→混凝土澆注、養(yǎng)護R→鋼結(jié)構(gòu)防火噴涂R→驗收R需要關(guān)注的問題質(zhì)量方面環(huán)境方面安全方面1.螺栓孔眼不對2.現(xiàn)場焊接質(zhì)量達不到設(shè)計及規(guī)范要求★3.不使用安裝螺栓，直接安裝高強螺栓1.焊接光污染2.無損檢測放射物危害鋼構(gòu)件安裝的防護、防高空墜落預(yù)防措施1.安裝時不得任意擴孔或改為焊接，應(yīng)與設(shè)計單位協(xié)商后按規(guī)范或洽商要求進行處理。2.焊工須有上崗證，并應(yīng)編號，焊接部位按編號做檢查記錄，全部焊縫經(jīng)外觀檢查凡達不到要求時，補焊后應(yīng)復(fù)驗。3.安裝時必須按規(guī)范要求先使用安裝螺栓臨時固定，調(diào)整緊固后再安裝高強螺栓并替換。1.現(xiàn)場焊接臨近居民樓時，夜間焊接應(yīng)采取必要的遮擋，以免影響居民的休息。2.無損檢測一定要有時間限制，一般以夜間拍片為好，并在檢測區(qū)域內(nèi)劃定隔離防范警戒線、遠距離控制操作。1.鋼柱安裝時必須搭設(shè)操作平臺，用于安裝和焊接作用，當柱身設(shè)計無爬梯時，在鋼柱起吊前必須安裝爬梯。2.在建筑物四周掛好六米的水平安全網(wǎng)，并在已安裝好的鋼柱外側(cè)搭設(shè)防護欄桿，滿掛密目安全網(wǎng)。3.在人工散鋪壓型鋼板時必須系好安全帶，且必須邊鋪邊固定，鋪設(shè)后周邊應(yīng)設(shè)防護欄桿，并在所有洞口上覆蓋水平安全網(wǎng)。糾正措施注：·XXXX——關(guān)鍵過程◆XXXX——特殊過程帶★的為需要制定糾正措施的方面R—記錄或報告YIN—隱檢YU—預(yù)檢過程識別與控制書細石混凝土地面工程施工過程流程圖彈+50cm水平線YU→基層清理→灑水濕潤→刷素水泥漿→貼灰餅、沖筋→澆筑混凝土R→抹面→養(yǎng)護→分項驗收需要關(guān)注的問題質(zhì)量方面環(huán)境方面安全方面1.地面起砂★2.空鼓裂縫★3.地面不平和漏壓4.倒泛水混凝土運輸?shù)倪z灑觸電預(yù)防措施1.施工用細石混凝土應(yīng)嚴格控制水灰比，壓光應(yīng)在細石混凝土終凝前完成。2.基層清理應(yīng)認真，前一天認真灑水濕潤，鋪灰、壓實、壓光應(yīng)掌握好時間，保證墊層、面層應(yīng)有的厚度。3.細時混凝土鋪設(shè)后壓邊角、管根等部位刮杠要到位，搓平要道邊，不漏壓。4.貼灰餅、沖筋時應(yīng)按要求找好泛水。有墊層的地面在做墊層時坡度要找好。砼罐車在撤離現(xiàn)場前，要派人用水將下料斗及車身沖洗干凈。施工前必須檢查用電工具的性能情況和漏電保護措施，操作工必須帶好絕緣手套，電器設(shè)備等必須做好保護接零。糾正措施注：·XXXX——關(guān)鍵過程◆XXXX——特殊過程帶★的為需要制定糾正措施的方面R—記錄或報告YIN—隱檢YU—預(yù)檢過程識別與控制書現(xiàn)制水磨石地面工程施工過程流程圖彈+50cm水平線YU→基層處理→灑水濕潤→預(yù)制底灰→沖筋及踢腳板找規(guī)矩→鋪抹底灰→底層灰養(yǎng)護→鑲分格條YU→拌制石渣灰→鋪抹石渣灰層→養(yǎng)護→·磨光酸洗→打蠟→分項驗收需要關(guān)注的問題質(zhì)量方面環(huán)境方面安全方面1.空鼓裂縫★2.磨紋、砂眼3.漏磨4.面層石渣粒不勻5.分格條掀起、顯漏不清楚★1.水電等能源消耗2.污水的排放觸電預(yù)防措施1.基層表面和鑲分格條時應(yīng)將浮灰清掃干凈，掃漿要均勻，應(yīng)隨掃漿隨鋪灰，壓實后注意養(yǎng)護，后續(xù)工序不能跟得太緊。2.磨光時要嚴格按工藝擦兩遍漿，并注意養(yǎng)護后按工藝程序操作。3.邊角、管根等部位容易漏磨，應(yīng)注意磨完后全面檢查，漏磨應(yīng)及時修補。4.石渣應(yīng)嚴格按照規(guī)格要求選擇粒徑，使渣灰拌合應(yīng)均勻，滾壓要密實。5.分格條應(yīng)鑲壓牢固、平整，石渣灰鋪磨后滾壓應(yīng)高出分格條，高度一致，磨光嚴格掌握平順。1.應(yīng)采取措施節(jié)約用水用電。2.污水應(yīng)有組織的排放，通過樓梯建或其他專用污水排放管等排放到沉淀池內(nèi)，二次沉淀后重復(fù)利用。施工前必須檢查用電工具的性能情況和漏電保護措施，操作工必須帶好絕緣手套，電器設(shè)備等必須做好保護接零。糾正措施注：·XXXX——關(guān)鍵過程◆XXXX——特殊過程帶★的為需要制定糾正措施的方面R—記錄或報告YIN—隱檢YU—預(yù)檢過程識別與控制書砌筑工程施工過程流程圖基層清理→施工準備（放線、立皮樹桿、材料進場等）YU、R→磚澆水→·排磚/砌塊，確定組砌方法→拌制砂漿R→砌磚/砌塊墻→YIN、YU澆注砼帶及構(gòu)造柱砼R→養(yǎng)護→磚/砌塊與門窗口聯(lián)接→磚/砌塊與樓板聯(lián)接→分項驗收需要關(guān)注的問題質(zhì)量方面環(huán)境方面安全方面1.拉結(jié)筋任意彎折、切斷2.墻體凸凹不平★3.墻體留槎，接槎不嚴4.拉結(jié)鋼筋不符合規(guī)定1.避免交叉污染及垃圾處理2.粉層對大氣污染防止磚砸人、墻體倒塌預(yù)防措施1.砌磚時要注意保護好拉結(jié)筋，不允許任意彎折或切斷。2.砌筑時必須認真拉線，澆筑砼構(gòu)造柱或圈梁時必須加好支撐，要堅持分層澆筑，分層振搗，澆筑高度不能大于2m，插振不得過度。3.施工間歇和流水作業(yè)需要留槎時必須留斜槎，留槎的槎口大小要根據(jù)所使用的材料和組砌方法而定；留槎的高度不超過1.2m，一次到頂?shù)牧糸妒遣辉试S的。4.拉結(jié)筋、拉結(jié)帶應(yīng)按設(shè)計要求預(yù)留、設(shè)置，預(yù)留位置應(yīng)預(yù)先計算好磚行模數(shù)，以保證拉結(jié)筋與磚行吻合，不應(yīng)將拉結(jié)筋彎折使用。1.①砌筑砂漿不得遺撒污染作業(yè)面。②施工垃圾應(yīng)每天清理，堆放在指定的地點。2.現(xiàn)場堆放的砂石料要用帆布覆蓋，水泥棚應(yīng)圍護嚴密。1.從磚垛上取磚時，先取高處后取低處，防止垛倒砸人。2.不準勉強在超過胸部以上的墻體進行砌筑，以免將墻體碰撞倒塌或上磚時失手掉下造成安全事故，必須及時搭設(shè)好腳手架。3.禁止用手向上拋磚運送，人工傳遞時，要穩(wěn)遞穩(wěn)接，兩人位置避免在同一垂直線上作業(yè)。4.手推車應(yīng)平穩(wěn)行駛，防止碰撞墻體。糾正措施注：·XXXX——關(guān)鍵過程◆XXXX——特殊過程帶★的為需要制定糾正措施的方面R—記錄或報告YIN—隱檢YU—預(yù)檢過程識別與控制書抹灰工程施工過程流程圖搭腳手架→門窗口四周堵縫（或墻板豎橫縫處理）→墻面基層清理→澆水濕潤墻面→·彈線、吊垂直找方及找規(guī)矩、抹灰餅→·沖筋→抹門窗口水泥砂漿護角→抹底灰→抹中層灰→抹罩面灰→抹水泥踢腳板→分項驗收YIN需要關(guān)注的問題質(zhì)量方面環(huán)境方面安全方面1.空鼓、開裂和爛根★2.抹灰面不平，陰陽角不垂直、不方正3.踢腳板和水泥墻裙等上口出墻厚度不一致、毛刺4.接槎不平，顏色不一致避免篩砂、拌灰時揚塵污染防高空墜落預(yù)防措施1.①基層應(yīng)清理干凈，抹灰前要澆透水，注意砂漿配合比，使底層砂漿與樓板粘結(jié)牢固。②抹灰時應(yīng)分層分遍壓實，施工完后及時澆水養(yǎng)護。2.抹灰前要認真用托線板、靠尺對抹灰墻面尺寸預(yù)測摸底，安排好陰陽角不同兩個面的灰層厚度和方正，認真做好灰餅、沖筋；陰陽角處用方尺套方，做到墻面垂直、平順、陰陽角方正。3.踢腳板、墻裙施工操作要加細，認真吊垂直、拉通線找直找方，抹完灰后用反尺將上口刮平、壓實、趕光。4.要采用同品種、同標號的水泥，嚴禁混用，防止顏色不均；接槎應(yīng)避免在塊中，應(yīng)甩在分格條處。1.砂漿拌和時應(yīng)在固定地點和鐵皮上操作，避免交叉污染。2.每天應(yīng)按照使用的用量拌和砂漿并用完，避免形成垃圾污染。3.抹灰過程中掉落地上的砂漿要隨時清理干凈。4.現(xiàn)場堆放的砂石料要用帆布覆蓋，水泥棚應(yīng)圍護嚴密。篩沙、拌灰時，應(yīng)文明作業(yè)，降低篩砂高度，并及時灑水降塵。在架子上進行施工時應(yīng)系好安全帶和水平防護網(wǎng)。糾正措施注：·XXXX——關(guān)鍵過程◆XXXX——特殊過程帶★的為需要制定糾正措施的方面R—記錄或報告YIN—隱檢YU—預(yù)檢過程識別與控制書門窗工程施工過程流程圖彈線找規(guī)矩YU→確定門窗框安裝位置YIN→掩扇及安裝樣板→門窗框安裝→門窗扇安裝YU→油漆→小五金件安裝→檢查驗收需要關(guān)注的問題質(zhì)量方面環(huán)境方面安全方面1.門窗洞口預(yù)留尺寸不準2.合頁不平、螺絲松動、合頁槽深淺不一3.上下層門窗不順直，左右門窗安裝標高不一致1.成品保護膜的合理處理2.油漆質(zhì)量的控制3.人造木板的甲醛含量1.射釘槍使用安全2.用電安全預(yù)防措施1.砌筑時上下左右拉線找規(guī)矩，一般門窗框上皮應(yīng)低于門窗過梁10~15mm，窗框下皮應(yīng)比窗臺上皮高5mm。2.合頁位置應(yīng)距門窗上下端宜取立梃高度的1/10；安裝合頁時，必須按畫好的合頁位置線開鑿合頁槽，槽深應(yīng)比合頁厚度大1~2mm；根據(jù)合頁規(guī)格選用合適的木螺絲，木螺絲可用錘打入1/3深后再行擰入。3.安裝人員必須按照工藝要點施工，安裝前先彈線找規(guī)矩，做好準備工作后，先安樣板，合格后再全面安裝。1.①木門框扇安裝合頁、門鎖時刨鑿下來的木屑隨手裝袋，工完當天運至垃圾場。金屬門窗或塑鋼門窗保護膜應(yīng)按垃圾分類處理規(guī)定處理②鋼質(zhì)防火門塞填砼時的落地灰要隨時清理干凈。2.應(yīng)選用環(huán)保型油漆。3.應(yīng)對人造木板中甲醛含量進行檢測，并符合GBJ50325-2001的有關(guān)規(guī)定。1.射釘槍使用要嚴格按有關(guān)的操作規(guī)程進行，任何時間槍口禁止對準人，遵循先上彈后上藥的原則，發(fā)射時要戴護目鏡。2.嚴格遵守有關(guān)的用電安全要求，電鉆、沖擊鉆等用電設(shè)備要求電線絕緣良好，接地線到位。糾正措施注：·XXXX——關(guān)鍵過程◆XXXX——特殊過程帶★的為需要制定糾正措施的方面R—記錄或報告YIN—隱檢YU—預(yù)檢過程識別與控制書室內(nèi)防水工程施工過程流程圖清理基層表面YIN→細部處理→配制底膠→涂刷底膠→·細部管根部附加層施工→第一遍涂膜→第二遍涂膜→第三、四…遍涂膜防水層施工R、YIN→防水層第一次試水R→保護層飾面磚施工YIN→防水層第二次試水R→檢查驗收需要關(guān)注的問題質(zhì)量方面環(huán)境方面安全方面1.材料的選擇2.空鼓★3.滲漏★1.廢防水材料的排放2.閉水試驗用水1.避免火災(zāi)發(fā)生2.操作人員中毒預(yù)防措施1.多方案、多材料的比較，選擇一種價格合理，最適合現(xiàn)場實際情況使用的防水材料。2.①施工時要嚴格控制基層含水率，找平層與防水層接縫處應(yīng)認真操作，將空氣排除徹底，使其粘接牢固。②對地漏、衛(wèi)生潔具、陰陽角、管根等特殊部位，在防水施工前，應(yīng)做增強處理，涂刷要嚴密，可根據(jù)具體部位采取有效措施。3.①突出地面管根、地漏、排水口和衛(wèi)生潔具等處的周邊防水層不得碰損，部件不得變位。②涂膜防水層施工過程中，未固化前不得上人走動，以免破壞防水層，造成滲漏隱患。③已涂刷好的涂膜防水層，應(yīng)及時采取保護措施，未做好保護層之前，不得穿帶釘鞋出入，以免破壞防水層。1.①在防水材料選型時應(yīng)優(yōu)先選用無毒無味、對環(huán)境、對人體污染小的材料。②底膠宜根據(jù)每班工作量配制，避免浪費，盛膠液的容器應(yīng)隨用隨密封，以免膠液中的溶劑揮發(fā)。③廢的防水材料及盛防水材料的容器應(yīng)堆放在現(xiàn)場指定的地點。2.應(yīng)反復(fù)利用，節(jié)約用水，避免浪費。1.①選材時應(yīng)注意選擇不燃燒的防水材料。②材料運輸及存放時應(yīng)立放，應(yīng)密封存放在干燥、陰涼處，并嚴禁明火及烈日暴曬，堆放處應(yīng)遠離熱源及易燃品。③施工現(xiàn)場應(yīng)備足夠的消防器材及消防設(shè)施，消防道路暢通；施工地點及庫房應(yīng)備夠滅火器材，并派專人看護，以防火災(zāi)的發(fā)生。2.防水層施工過程中，室內(nèi)要通風(fēng)。糾正措施注：·XXXX——關(guān)鍵過程◆XXXX——特殊過程帶★的為需要制定糾正措施的方面R—記錄或報告YIN—隱檢YU—預(yù)檢過程識別與控制書屋面工程施工過程流程圖基層清理YIN→彈線找坡度→灑水濕潤→打底找坡→做隔氣層R→做保溫隔熱層→檢查驗收YIN→·防水層施工R、YIN→找平層施工→防水保護層施工→防水層驗收YIN→面層施工→蓄水或淋水試驗R→檢查驗收需要關(guān)注的問題質(zhì)量方面環(huán)境方面安全方面1.找平層起砂、空鼓、開裂★2.屋面積水3.防水層空鼓、滲漏★1.噪聲的排放2.粉層及垃圾的處理防高空墜落預(yù)防措施1.找平層施工前基層應(yīng)清理干凈并灑水濕潤，但不能用水澆透；施工時要抹壓充分，尤其是屋面轉(zhuǎn)角處、出屋面管根和埋件周圍要認真操作，不能漏壓；抹平壓實后，澆水養(yǎng)護，不能過早上人踩踏。2.打底找坡時要根據(jù)坡度要求拉線找坡貼灰餅，順排水方向沖筋，在排水口、雨水口處找出泛水，保溫層、防水層和面層施工時均要符合屋面坡度的要求。3.防水層施工時要嚴格控制基層含水率，并在后續(xù)工序的施工中加強檢查，嚴格執(zhí)行工藝規(guī)程，認真操作，空鼓和滲漏可以得到有效控制。1.現(xiàn)場在進行切割和鋪地磚時，要控制各種機械的噪音，將機械安放在平整度較高的平臺上，下墊木板。并定期檢查各種零部件，如發(fā)現(xiàn)零部件有松動、磨損，及時緊固或更換，以降低噪音。2.為了減少切割和磨光飾面磚時的粉塵飛揚，現(xiàn)場要設(shè)置苫布遮擋，并及時將粉末清理起來；將作業(yè)層中清掃出來的砂漿、雜物，分類存放在固定位置，待統(tǒng)一清運到北京市規(guī)定的垃圾集中地。1.屋面上的空洞均要加蓋木板，檐口處如女兒墻低于900mm時，要用鋼管搭設(shè)1200mm高護欄，并罩有安全網(wǎng)。2.高空作業(yè)人員不得過分集中，必要時要系安全帶；操作人員不得隨意向四周拋雜物下地，以免傷人；在靠近檐口部位施工時，要特別注意安全，不要后退施工，以防墜落。糾正措施注：·XXXX——關(guān)鍵過程◆XXXX——特殊過程帶★的為需要制定糾正措施的方面R—記錄或報告YIN—隱檢YU—預(yù)檢過程識別與控制書幕墻工程施工過程流程圖原材料進場檢驗試驗R→·彈線驗線R→各樓層安裝連接件YIN、R→安裝立柱→安裝橫梁→·橫梁、立柱的調(diào)整與緊固YU→安裝保溫、防火巖棉YU→安裝玻璃YIN→安蓋板及裝飾壓條→安裝樓層封閉鍍鋅鋼板→伸縮縫處理YU、YIN→抗?jié)B漏試驗R→清洗→驗收R需要關(guān)注的問題質(zhì)量方面環(huán)境方面安全方面1.玻璃出現(xiàn)嚴重“影像畸變”2.裝飾壓條不垂直、不水平3.鋁合金構(gòu)件表面污染嚴重★4.玻璃幕漏水★光污染1.外用吊籃使用安全2.高空作業(yè)防墜落預(yù)防措施1.玻璃進場時要進行開箱抽查，安裝前發(fā)現(xiàn)有翹曲現(xiàn)象應(yīng)剔出不用；安裝過程中格到工序嚴格操作，密封條鑲嵌平整，打膠后將表面擦拭干凈。2.安裝裝飾壓條時應(yīng)吊線和拉水平線進行控制，安完后應(yīng)橫平、豎直。3.運輸安裝過程中不能過早撕掉表面保護膜，打膠時盡量不要污染面層，打膠后及時將表面擦拭干凈4.玻璃四周的密封條規(guī)格要匹配，尺寸不得過大或過小，鑲嵌要平整嚴密，接口處一定要充填密實，達到不漏水為準。選擇光污染小的幕墻種類以及材料（主要是玻璃）品種。1.①必須嚴格貫徹有關(guān)操作規(guī)程每天工作前應(yīng)進行例行檢查，工作后要做好收尾工作。②吊藍上攜帶的材料和施工機具必須安置妥當，不得將吊藍傾斜和超載。2.①高空作業(yè)時，檢查腳手架、跳板的可靠程度，操作人員系好安全帶和防墜器具。②嚴禁施工人員在各樓層的沿口堆放材料，在各樓面設(shè)置2m安全警戒線，作業(yè)面設(shè)置高1.8m的安全帶掛扣鋼絲繩，操作前必須先清理任何可能帶來下墜的物品，嚴禁高空拋物。③手持玻璃吸盤和玻璃吸盤安裝機，應(yīng)進行吸附重量和吸附持續(xù)時間試驗，以防玻璃墜落傷人。糾正措施注：·XXXX——關(guān)鍵過程◆XXXX——特殊過程帶★的為需要制定糾正措施的方面R—記錄或報告YIN—隱檢YU—預(yù)檢過程識別與控制書外腳手架工程施工過程流程圖扣件式雙排外腳手架：地基處理→底座安裝→放置縱向掃地桿→樹立桿→安裝橫向掃地桿→安裝縱向水平桿與橫向水平桿→設(shè)置連墻件→加設(shè)剪刀撐→鋪腳手板→驗收需要關(guān)注的問題質(zhì)量方面環(huán)境方面安全方面1.腳手架構(gòu)架結(jié)構(gòu)及尺寸2.節(jié)點連接的可靠性3.垂直度與水平偏差4.連墻件的設(shè)置5.整體性拉結(jié)桿件6.腳手板的鋪設(shè)裝卸、安裝與拆除時噪聲的排放安全作業(yè)，防高空墜落預(yù)防措施1.構(gòu)架結(jié)構(gòu)符合規(guī)范、設(shè)計和有關(guān)規(guī)定，個別部位的尺寸變化在允許范圍內(nèi)。2.扣件的擰緊程度應(yīng)當控制在扭力矩達到40~60N.m；相鄰桿件的接頭應(yīng)相互錯開并置于不同的構(gòu)架框格內(nèi)；搭接桿件搭接長度≥0.8m；各桿件端頭伸出扣件蓋板邊緣長度不應(yīng)小于100mm。3.立桿垂直度應(yīng)≤1／300，同時應(yīng)控制最大垂直偏差值：當架高≤20m時不大于50mm，當架高＞20m時不大于75mm；水平桿的水平偏差應(yīng)≤1／250，且全架水平偏差不大于50mm。4.連墻件必須從底層第一步縱向水平桿處開始設(shè)置；連墻件布置最大間距：腳手架高度豎向間距(h)水平間距(la)每根連墻件覆蓋面積(m2)≤50m3h3la≤40＞50m2h3la≤27注：h——步距；la——縱距5.當架高為6~25m時，外側(cè)的兩端和其間按≤15m的中心距并自下往上連續(xù)設(shè)置剪刀撐，當架高＞25m時，應(yīng)于外側(cè)滿設(shè)剪刀撐；橫向支撐必須由底至頂層之字型連續(xù)布置。6.腳手板應(yīng)鋪平鋪穩(wěn)，必要時應(yīng)進行綁扎；板的搭接長度不得小于200mm，嚴禁出現(xiàn)超出支承橫桿250mm以上未作固定的探頭板。1.安裝與拆除時輕拿輕放。2.腳手架外側(cè)滿掛密目安全網(wǎng)，以減小在結(jié)構(gòu)和裝修施工階段由于在一些工序施工過程中粉塵飛揚的現(xiàn)象，降低粉塵向大氣中的排放。1.操作人員必須是經(jīng)考試合格的專業(yè)架子工，上崗人員定期體檢，合格后方可發(fā)上崗證。2.腳手架的構(gòu)配件質(zhì)量與搭設(shè)質(zhì)量應(yīng)按規(guī)范進行檢查驗收，合格后方準使用。3.作業(yè)層上的施工荷載應(yīng)符合設(shè)計要求，不得超載。4.在腳手架使用期間，嚴禁拆除下列桿件：主節(jié)點處的縱、橫水平桿，縱、橫掃地桿，連墻件。5.手架在拆除前，先將水平網(wǎng)內(nèi)、腳手板上的垃圾清理干凈，避免拆除時砸人。6超過20m高的腳手架要有計算書。糾正措施江南大學(xué)博士學(xué)位論文獸疫鏈球菌發(fā)酵生產(chǎn)透明質(zhì)酸過程控制與優(yōu)化姓名：劉龍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：發(fā)酵工程指導(dǎo)教師：堵國成20210301摘要為６．５ｇ／Ｌ，提高了２６％：（６）基于ＨＡ在獸疫鏈球菌中的生理功能以及細胞在脅迫環(huán)境下的物質(zhì)及能量代謝的應(yīng)答機理，考察了流加Ｈ２０２進行氧化脅迫對ＨＡ發(fā)酵過程的影響，研究發(fā)現(xiàn)在分批培養(yǎng)過程中流加Ｈ２０２進行氧化脅迫能夠轉(zhuǎn)變細胞產(chǎn)能途徑、提高細胞產(chǎn)能效率和提高ＨＡ合成速率，當Ｈ２０２流加速率為０．０６ｍｍｏｌＬ以ｈ．１時，ＨＡ的產(chǎn)量達到６．０ｅ，ｍ，比對照提高了２０％；（７）提出了一種間歇性ｐＨ脅迫策略：前０—６ｈ期間控制ｐＨ為７．Ｏ，在６－７ｈ期間控制ｐＨ為８．５，在７．８ｈ期間控制ｐＨ為７．０，在８－９ｈ期間再將ｐＨ調(diào)到８．５，如此循環(huán)下去，直至發(fā)酵結(jié)束。在此脅迫策略控制下，ＨＡ產(chǎn)量提高到６．５ｅ，ｍ，提高了３０％；（８）考察了ＨＡ發(fā)酵過程中常見氨基酸的代謝動力學(xué)，確定精氨酸、半胱氨酸和賴氨酸是影響細胞生長和ＨＡ合成的關(guān)鍵氨基酸；考察了添加核苷酸堿基（腺嘌呤、鳥嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、尿嘧啶）對ＨＡ發(fā)酵過程的影響，發(fā)現(xiàn)尿嘧啶對ＨＡ發(fā)酵具有重要影響。運用ＲＢＦ．ＱＰＳＯ算法對關(guān)鍵營養(yǎng)因子的添加濃度進行了優(yōu)化，最佳添加濃度為：精氨酸０．０６２ｇ／Ｌ，半胱氨酸０．０３６ｇ／ｔ．，賴氨酸０．０４３ｇｍ，尿嘧啶０．０６ｇ／Ｌ時，在此條件下，ＨＡ產(chǎn)量提高到６．３ｇ／Ｌ，提高了２６％；（９）研究了不同培養(yǎng)模式對ＨＡ發(fā)酵過程的影響，發(fā)現(xiàn)采用分批培養(yǎng)可獲得較高的碳源對ＨＡ的轉(zhuǎn)化率，而補料分批培養(yǎng)可獲得較高的細胞比生長速率，于是提出了一種兩階段培養(yǎng)模式：在第一階段內(nèi)（０．８ｈ）進行指數(shù)流加培養(yǎng)，在８ｈ提高碳源濃度至２５ｇ／Ｌ，進行第二階段的分批培養(yǎng)。在此兩階段培養(yǎng)模式中，ＨＡ產(chǎn)量提高至５。９８ｇ／ｔ．，比單一分批培養(yǎng)模式提高了２０％。為進一步提高ＨＡ產(chǎn)量，在第二階段培養(yǎng)期間應(yīng)用間歇性ｐＨ脅迫策略轉(zhuǎn)變細胞產(chǎn)能途徑、提高細胞產(chǎn)能效率，ＨＡ產(chǎn)量進一步提高至６．６ｅｅｌ，提高了３２％，碳源對ＨＡ的轉(zhuǎn)化率（地）提高了１９％，而生產(chǎn)強度提高了３２％，實現(xiàn)了ＨＡ高產(chǎn)量、高底物轉(zhuǎn)化率與高生產(chǎn)強度的相對統(tǒng)一。關(guān)鍵詞：透明質(zhì)酸，獸疫鏈球菌，混合，傳質(zhì)，氧化脅迫，培養(yǎng)模式ⅡＡｂｓｔｒａｃｔＡｂｓｔｒａｃｔＨｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ（ＨＡ）ｉｓａｎａｔｕｒａｌｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃａｃｉｄａｎｄＮ—ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅｊｏｉｎｅｄａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｌｙｂｙｐ一（１—３）ａｎｄｐ一（１—４）ｇｌｙｃｏｓｉｄｉｃｂｏｎｄｓ．Ｗｉｔｌｌｉｔｓｕｎｉｑｕｅｐｈｙｓｉｃｏ—ｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｈｉｇｈｗａｔｅｒ－ｈｏｌｄｉｎｇｃａｐａｃｉｔｙ，ｖｉｓｃｏｅｌａｓｔｉｃｉｔｙ，ａｎｄｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ，ＨＡｉｓｗｉｄｅｌｙａｐｐｌｉｅｄｉｎｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ，ｃｏｓｍｅｔｉｃａｎｄｈｅａｌｔｈｃａｒｅｆｉｅｌｄｓ．ＣｕｒｒｅｎｔｌｙｔｈｅｍｉｃｒｏｂｉａｌｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｉｓｒｅｐｌａｃｉｎｇｔｈｅａｎｉｍａｌｔｉｓｓｕｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｓｔｈｅｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｔｅｃｈｎｉｑｕｅｔｏｐｒｏｄｕｃｅＨＡ．ＷｉｔｈｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｉｎｇＨＡｍａｒｋｒｔｄｅｍａｎｄ，ｉｔｉｓｖｅｒｙｃｒｕｃｉａｌｔＯｉｒｅｐｒｏｖｅＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔｙ．Ｉｎｔｈｉｓｔｈｅｓｉｓ。ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｍｉｘｉｎｇｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄｏｘｙｇｅｎｍａｓｓｔｒａｎｓｆｅｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｔｌｌｅｃｕｌｔｕｒｅｓｙｓｔｅｍａｎｄｔｈｅｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ，ａｓｅｒｉｅｓｏｆｐｒｏｃｅｓｓｃｏｎｔｒｏｌａｎｄｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｗｅｒｅｄｅｖｅｌｏｐｅｄａｓｌｉｓｔｅｄｉｎｔｈｅｆｏｌｌｏｗｉｎｇ：（１）ＭｉｃｒｏｂｉａｌＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎＷａＳａｋｉｎｄｏｆｈｊｇｈｖｉｓｃｏｓｉｔｙｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｐｏｏｒｍｉｘｉｎｇｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄｌｏｗｍａｓｓｔｒａｎｓｆｅｒｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｗｅｒｅｔｈｅｂｏｔｔｌｅｎｅｃｋｓｏｆＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ。Ｔｈｅｍｉｘｉｎｇｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄｏｘｙｇｅｎｍａｓｓｔｒａｎｓｆｅｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄａｎｄｔｈｅｍａｉｎｆａｃｔｏｒｓｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇｍｉｘｉｎｇｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄｏｘｙｇｅｎｍａｓｓｔｒａｎｓｆｅｒ（ａｇｉｔａｔｉｏｎｓｐｅｅｄ，ａｅｒａｔｉｏｎｒａｔｅａｎｄｓｔｉｒｒｅｒｎｕｍｂｅｒ）ｗｅｒｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄ、析ｍｔｈｅｒａｄｉａｌｂａｓｉｓｆｕｎｃｔｉｏｎｎｅｕｒａｌｎｅｔｗｏｒｋｃｏｕｐｌｉｎｇｑｕａｎｔｕｍ·ｂｅｈａｖｅｄｐａｒｔｉｃｌｅｓｗａｒｍｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ（ＲＢＦ－ＱＰＳＯ）ａｌｇｏｒｉｔｈｍ。Ｕｎｄｅｒｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ（ａｇｉｔａｔｉｏｎｓｐｅｅｄ：２９４ｒｐｍ，ａｅｒａｔｉｏｎｒａｔｅ：１．５ｖ、，ＩＩ】，ｓｔｉｒｒｅｒｎｕｍｂｅｒ：３），ＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｒｅａｃｈｅｄ５．５８ｇ／Ｌ，ａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙ１２％；（２）ＴｈｅｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｙｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｓｙｓｔｅｍＷａｓｎｏｔｉｎａｓｔａｔｕｓｏｆｃｏｍｐｌｅｔｅｍｉｘｉｎｇｅｖｅｎｕｎｄｅｒｔｈｅａｂｏｖｅｏｐｔｉｍｉｚｅｄｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｃｏｍｐｌｅｔｅｍｉｘｉｎｇｏｎｔｈｅｍｉｃｒｏｂｉａｌＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎＷａｓｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｏｕｇｈｔｈｅｍｉｘｉｎｇｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄｏｘｙｇｅｎｍａｓｓｔｒａｎｓｆｅｒｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｗｅｒｅｉｍｐｒｏｖｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｗｈｅｎｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｓｙｓｔｅｍｗａｓｉｎａｓｔａｔｕｓｏｆｃｏｍｐｌｅｔｅｍｉｘｉｎｇ，ＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｄｅｃｒｅａｓｅｄ，ｐｏｓｓｉｂｌｙｄｕｅｔｏｔｈｅｈａｒｍｆｕｌｅｆｆｅｃｔｏｆｓｇｏｎｇｓｈｅａｒｓｔｒｅｓｓｏｎｔｈｅｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈａｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．ＩｔＷａｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｌｏｗｓｈｅａｒｓｔｒｅｓｓ，ｈｉｇｈｏｘｙｇｅｎｍａｓｓｔｒａｎｓｆｅｒｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙａｎｄｈｉｇｈｄｉｓｓｏｌｖｅｄｏｘｙｇｅｎｌｅｖｅｌｗｅｒｅｔｈｅｉｄｅａｌｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｍｉｃｒｏｂｉａｌＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．（３）Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅａｂｏｖｅｒｅｓｕｌｔｓ，ｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｏｘｙｇｅｎｖｅｃｔｏｒｒ／．ｄｏｄｅｃａｎｅａｄｄｉｔｉｏｎｏｎｍｉｃｒｏｂｉａｌＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎＷａｓｓｔｕｄｉｅｄａｎｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ．ｗｉｔｈａｎ”．ｄｏｄｅｃａｎｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ５％（ｖ／ｖ），ｔｈｅｖｏｌｕｍｅｔｒｉｃｏｘｙｇｅｎｍａｓｓｔｒａｎｓｆｅｒｃｏｅ伍ｃｉｅｎｔＫＬａｄｕｒｉｎｇ８—１６ｈｒｅａｃｈｅｄ３７ｈ－１，ｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙ３。７ｆｏｌｄｓａｎｄＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｃｈｉｅｖｅｄ６。３ｇ／Ｌ，ｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙ２６％．ＴｈｏｕｇｈＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎＷａｓｉｍｐｒ錚觶澹?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｖｉａｔｈｅａｄｄｉｔｉｏｎｏｆｏｘｙｇｅｎｖｅｃｔｏｒ１１．ｄｏｄｅｃａｎｅ．ｔｈｅｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｗａｓｍｏｒｅｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄａｎｄｔｈｅｉｎｄｕｓｔｒｉａｌＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｗａｓｎｏｔａｐｐｌｉｃａｂｌｅ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｈｅｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｍｉｘｉｎｇｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄｏｘｙｇｅｎｍａｓｓｔｒａｎｓｆｅｒｅ繯ｃｉｅｎｃｙｖｉａｔｈｅＨＡｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎＷａｓｆｕｒｔｈｅｒｅｘｐｌｏｒｅｄ．（４）ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅａｄｄｉｔｉｏｎｏｎｔｈｅｍｉｃｒｏｂｉａｌＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄａｎｄｉｔ１１ＩＡｂｓｔｒａｃｔｗａｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅａｄｄｉｔｉｏｎｃｏｕｌｄｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｍｉｘｉｎｇｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｗａｓ０．２５ｇ／Ｌ，ＨＡｏｘｙｇｅｎｍａｓｓｔｒａｎｓｆｅｒｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ．Ｗｈｅｎｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｄｅｃｒｅａｓｅｄｆｒｏｍ１３００ｋＤａｔｏ２１ｋＤａ，ｍａｋｉｎｇｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｓｙｓｔｅｍｉｎａｓｔａｔｕｓｏｆｃｏｍｐｌｅｔｅｍｉｘｉｎｇ，ａｎｄＫＬａｒｅａｃｈｅｄ１００ｈ一．ＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｒｅａｃｈｅｄ６．３ｇ／Ｌ，ｅｎｈａｎｃｅｄｂｙ２６％．ＴｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｃｏｓｔＷａｓｈｉｇｈａｎｄｔｈｅｉｎｄｕｓｔｒｉａｌＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｗａｓｎｏｔｆｅａｓｉｂｌｅ；（５）ＥｆｆｅｃｔｏｆｈｙｄｒｏｇｅｎｐｅｒｏｘｉｄｅａｎｄａｓｃｏｒｂａｔｅａｄｄｉｔｉｏｎｏｎｍｉｃｒｏｂｉａｌＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄａｎｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔ，ｔｈｅｔｗｉｃｅａｄｄｉｔｉｏｎｏｆｈｙｄｒｏｇｅｎｐｅｒｏｘｉｄｅａｎｄａｓｃｏｒｂａｔｅａｔ８ｈａｎｄ１２ｈｃｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｍｉｘｉｎｇｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄｏｘｙｇｅｎｍａｓｓｔｒａｎｓｆｅｒ．ＷｈｅｎｔｈｅｈｙｄｒｏｇｅｎｐｅｒｏｘｉｄｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎＷａｓ１．０ｍｍｏｌ／ｇＨＡａｎｄａｓｃｏｒｂａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎＷａｓ０．５ｍｍｏｌ／ｇＨＡ，ＫＬａｒｅａｃｈｅｄ４９ｈ－１ａｎｄＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎＷａｓ６．０ｇ／Ｌ，ｅｎｈａｎｃｅｄｂｙ２０％；（６）ＢａｓｅｄｏｎｔｈｅｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆＨＡｃａｐｓｕｌｅｉｎＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓａｎｄｔｈｅｓｕｂａｔｒａｔｅａｎｄｅｎｅｒｇｙｒｅｓｐｏｎｓｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔｈｅｃｅｌｌｓｓｕｂｊｅｃｔｔｏｓｔｒｅｓｓｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ，ＩｍｐａｃｔｏｆｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｖｉａｆｅｅｄｉｎｇｈｙｄｒｏｇｅｎｐｅｒｏｘｉｄｅｏｎｍｉｃｒｏｂｉａｌＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎＷａｓｓｔｕｄｉｅｄ，ａｎｄｉｔＷａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔｔｈｅｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｃｏｕｌｄｔｒａｎｓｆｏ脅ｔｈｅｅｎｅｒｇｙ—ｙｉｅｌｄｉｎｇｐａｔｈｗａｙａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｅｎｅｒｇｙ－ｙｉｅｌｄｉｎｇｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ，ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｄｔｏｔｈｅｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｏｆＨＡｓｙｎｔｈｅｓｉｓｒａｔｅ．Ａｔａｈｙｄｒｏｇｅｎｐｅｒｏｘｉｄｅｆｅｅｄｉｎｇｒａｔｅｏｆ０．０６ｍｍｏｌＬ叱ｈ．１，ＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｒｅａｃｈｅｄ６．０ｇ／ＬａｎｄＷａｓｅｎｈａｎｃｅｄｂｙ２０％；（７）Ａｎｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔａｌｋａｌｉｎｅｓｔｒｅｓｓｓｔｒａｔｅｇｙｗａｓｐｒｏｐｏｓｅｄ：ｐＨｖａｌｕｅＷａｓｋｅｐｔａｔ７．０ｆｏｒｔｈｅｆｉｒｓｔ６ｈ，ａｎｄｔｈｅｎｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔｌｙｓｗｉｔｃｈｅｄｔｏ８．５ｆｏｒ１ｈａｎｄｂａｃｋｔｏ７．０ｆｏｒ１ｈ，ｔｈｅｃｙｃｌｅＷａｓｒｅｐｅａｔｅｄｕｎ簦椋?ｔｈｅｅｎｄｏｆｔｈｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．ＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｒｅａｃｈｅｄ６．５ｇ甩ａｎｄＷａｓｅｎｈａｎｃｅｄｂｙ３０％、析ｔ１１ｔｈｅｉｍｐｒｏｖｅｄｅｎｅｒｇｙｓｔａｔｕｓｂｙｔｈｅｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔａｌｋａｌｉｎｅｓｔｒｅｓｓｓｔｒａｔｅｇｙ；（８）ＴｈｅｍｅｔａｂｏｌｉｃｋｉｎｅｔｉｃｓｏｆａｍｉｎｏａｃｉｄｓｄｕｒｉｎｇｔｈｅｍｉｃｒｏｂｉａｌＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｗａｓｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ，ａｎｄｔｈｅａｒｇｉｎｉｎｅ，ｃｙｓｔｅｉｎｅａｎｄｌｙｓｉｎｅｗｅｒｅｆｏｕｎｄｔｏｂｅｔｈｅｋｅｙａｍｉｎｏａｃｉｄｓｆｏｒｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈａｎｄＨＡｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．ｎ圮ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｂａｓｅｓａｄｄｉｔｉｏｎｏｎｔｈｅｍｉｃｒｏｂｉａｌＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ鰨幔?ａｌｓｏｓｔｕｄｉｅｄａｎｄｔｈｅｕｒａｃｉｌｈａｄａｐｏｓｉｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｎｔｈｅｍｉｃｒｏｂｉａｌＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．Ｕｎｄｅｒｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ（ｂｙａｄｄｉｎｇａｒｇｉｎｉｎｅ０．０６２ｇ／Ｌ，ｃｙｓｔｅｉｎｅＯ．０３６ｇ／Ｌ，ｌｙｓｉｎｅ０．０４３ｇ／ＬａｎｄｕｒａｃｉｌＯ．０６ｇ／Ｌ）ｏｂｔａｉｎｅｄｂｙＲＢＦ—ＱＰＳＯａｐｐｒｏａｃｈ，ＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｒｅａｃｈｅｄ６．３ｇ／Ｌ，ｅｎｈａｎｃｅｄｂｙ２６％：（９１Ｅ婦ｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｕｌｔｕｒｅｍｏｄｅｓｏｎｔｈｅｍｉｃｒｏｂｉａｌＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄａｎｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｂａｔｃｈｃｕｌｔｕｒｅｈａｄａｈｉｇｈｅｒＨＡｓｙｎｔｈｅｓｉｓｒａｔｅｗｈｉｌｅｆｅｄ．ｂａｔｃｈｃｕｌｔｕｒｅｈａｄａｈｉｇｈｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈｒａｔｅ．Ａｔｗｏ—ｓｔｅｐｆｅｄ－ｂａｔｃｈａｎｄｂａｔｃｈｃｕｌｔｕｒｅａｐｐｒｏａｃｈＷａｓｐｒｏｐｏｓｅｄ：ｔｈｅｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌｆｅｅｄｉｎｇＷａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｄｕｒｉｎｇ０－８ｈａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｂａｔｃｈｃｕｌｔｕｒｅＷａｓｓｔａｒｔｅｄ謝ｔ１１ａｎｉｎｉｔｉａｌｓｕｃｒｏｓｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ２５ｇ／Ｌ．ＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｏ５．９８ｇ／Ｌ，ｅｎｈａｎｃｅｄｂｙ２０％．ＴｏｆｕｒｔｈｅｒｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｏｎｔｈｅｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈａｎｄＨＡｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｔｈｅｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔａｌｋａｌｉｎｅｓｔｒｅｓｓｓｔｒａｔｅｇｙｗａｓａｐｐｌｉｅｄｉｎｔｈｅｓｅｃｏｎｄｓｔａｇｅａｎｄＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｏ６．６ｇ／Ｌ，ｅｎｈａｎｃｅｄｂｙ３２％．１１１ｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｙｉｅｌｄｏｆｃａｒｂｏｎＳＯｕｒＣｅｔ０ＨＡａｎｄＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔｙｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙ１９％ａｎｄ３２％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｃｈｉｅｖｉｎｇｔｈｅⅣＡｂｓｔｒａｃｔｕｎｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｈｉｇｈＨＡｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ｈｉｇｈｃａｒｂｏｎｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｒａｔｅａｎｄｈｉｇｈｐｒｏｄｕｃｔｉｖｉｔｙ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ，Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｚｏｏｅｐｉｄｍｅｉｃｕｓ，ｍｉｘｉｎｇ，ｍａｓｓｔｒａｎｓｆｅｒ，ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ，ｃｕｌｔｕｒｅｍｏｄｅＶ獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含本人為獲得江南大學(xué)或其它教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。簽名：近日期：蟬?。唬盒完P(guān)于論文使用授權(quán)的說明本學(xué)位論文作者完全了解江南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定：江南大學(xué)有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文，并且本人電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。保密的學(xué)位論文在解密后也遵守此規(guī)定。簽名：Ｍｔ’洲．了．川導(dǎo)師簽名：影紐日期：山二２．７．易＞第一章緒論第一章緒論１．１概述１．１．１醫(yī)藥生物技術(shù)與透明質(zhì)酸２１世紀是生命科學(xué)的時代，生物技術(shù)在醫(yī)療保健、農(nóng)業(yè)、環(huán)保、輕化工程、食品等重要領(lǐng)域?qū)Ω纳迫祟惤】蹬c生存環(huán)境、提高農(nóng)牧業(yè)產(chǎn)量和工業(yè)質(zhì)量等方面正在發(fā)揮越來越重要的作用【ｌｊ。醫(yī)藥生物技術(shù)是現(xiàn)代生物技術(shù)中最活躍、所占比重最大（６０％）和取得成果最多的領(lǐng)域，以其特有的高新技術(shù)在新藥的研究、開發(fā)、生產(chǎn)和改造傳統(tǒng)制藥工業(yè)中得到日益廣泛的應(yīng)用，為人類提供了用傳統(tǒng)生物技術(shù)難以獲得的珍貴藥品【２１。生物技術(shù)藥物或稱生物藥物已廣泛應(yīng)用于治療癌癥、冠心病、艾滋病、多發(fā)性硬化癥、貧血、發(fā)育不良、糖尿病、心力衰竭和一些罕見的遺傳疾病【３’４】。醫(yī)藥生物技術(shù)是生物技術(shù)首先取得突破、實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化的技術(shù)領(lǐng)域，２１世紀的醫(yī)藥生物技術(shù)呈現(xiàn)出蓬勃發(fā)展態(tài)勢。美國在醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域占據(jù)了世界領(lǐng)先地位，各種生物技術(shù)產(chǎn)品被廣泛應(yīng)用于醫(yī)療、制藥等行業(yè)，醫(yī)藥生物技術(shù)已成為美國高技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展的核心動力之一。至Ｕ２００６年為止，美國已批準的生物技術(shù)藥物和疫苗共１８２個，適應(yīng)癥達２６０個，使３．７５億患者受益【５】。美國擁有５２５個基因?qū)嶒炇?，生物制藥技術(shù)公司１３００家左右，其中３００多家公司上市，市場資本總額超過３３０８億美元。預(yù)計至Ｕ２０２５年，美國生物技術(shù)市場總額將達到２萬億美元，將占國民生產(chǎn)總量（ＧＤＰ）的２０％【６】。日本提出了“生物產(chǎn)業(yè)立國”的國家長遠目標，現(xiàn)已上市的生物技術(shù)產(chǎn)品有３１種之多，其中８０％是基因重組藥物，正在研發(fā)的產(chǎn)品有４７種，主要包括紅細胞素、生長激素、粒細胞集落刺激因子、胰島素、干擾素、高血糖素、組織纖溶酶原激活劑等產(chǎn)品〔刀。歐洲的生物技術(shù)藥品市場已經(jīng)占據(jù)了全球２８％的份額，有２９０種蛋白質(zhì)進入臨床研究試驗，其中２９種已經(jīng)批準上市，歐洲醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)在今后的５．１０年內(nèi)將和美國和日本展開激烈競爭【８】。我國醫(yī)藥生物技術(shù)的研究和開發(fā)起步較晚，但在“十五”期間，中國政府加大了對生物技術(shù)及其產(chǎn)業(yè)發(fā)展的支持力度。國家８６３計劃、９７３計劃、國家自然科學(xué)基金等重大研究發(fā)展規(guī)劃對生物技術(shù)的總投資接近６０億元，醫(yī)藥生物技術(shù)及其產(chǎn)業(yè)發(fā)展到今天已初具規(guī)模。國家“十一五”科技支撐計劃把轉(zhuǎn)基因生物新品種培育和重大新藥創(chuàng)制作為重點科技攻關(guān)項目，力爭在“十一五”期間研锘ｉＪ３０～４０個具有知識產(chǎn)權(quán)和市場競爭力的新藥，完善新藥創(chuàng)制與中藥現(xiàn)代化技術(shù)平臺。目前我國有２０個國家生物技術(shù)藥物重點實驗室，３個基因工程藥物開發(fā)中心，２８９家生物制藥企業(yè)，初步形成支撐我國藥業(yè)發(fā)展的新藥創(chuàng)制技術(shù)體系ｐ，１０】。透明質(zhì)酸（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃａｃｉｄ，簡稱ＨＡ），又名玻璃酸，是Ｍｅｙｅｒ和Ｐａｌｍｅｒ于１９３４年首先從牛眼玻璃體中分離出的一種高粘性物質(zhì)【ｌ¨。此后人們又對ＨＡ的分布、化學(xué)結(jié)構(gòu)、本章部分內(nèi)容投稿于ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＰｒｏｇ（ＵｎｄｅｒＲｅｖｉｅｗ）．江南大學(xué)博士學(xué)位論文生理功能和臨床應(yīng)用進行了多方面、大量的研究，特別是Ｂａｌａｚｓ于１９６０年首次將ＨＡ用于復(fù)雜的視網(wǎng)膜脫離手術(shù)，取得了理想的療效，之后有關(guān)ＨＡ的醫(yī)藥應(yīng)用研究又取得了更大的進展【１２】。作為生化藥物的一種，ＨＡ由于其自身的特點，不僅在醫(yī)學(xué)上應(yīng)用廣泛，在化妝品、食品保健等領(lǐng)域也有廣泛應(yīng)用。高分子量ＨＡ（ＭＴ＞１ｘ１０６Ｄａ）一般應(yīng)用于醫(yī)藥領(lǐng)域，而低分子量ＨＡ（Ｍｒ＜Ｉｘｌ０６Ｄａ）一般應(yīng)用于化妝品和食品領(lǐng)域。一般來講，分子量越高，價格越高。目前化妝品級和食品級的ＨＡ在國際市場上的價格為１０００～１５００ＵＳ￥．ｋｇ～，而醫(yī)藥級的ＨＡ價格在每公斤１０萬ｕｓ￥ｐＡ上【１３】。２００３年醫(yī)藥級ＨＡ在國際市場上的總銷售額為４．２億美元，到２００５年達到５．６億美元，而到２００７年已達８．３億美元，預(yù)計到２０１０年將超過１０億美元【ｌ４‘。國外已有多家公司生產(chǎn)ＨＡ藥品，如美國的Ｈｙｖｉｓｃ，俄羅斯的Ｌｕｒｏｎｉｔｅｌ，澳大利亞的Ｅｔａｍｕｃｉｎ及瑞士的Ｈｅａｌｏｎ等。我國國內(nèi)企業(yè)用發(fā)酵法生產(chǎn)ＨＡ始于上世紀８０年代末至９０年代初，山東福瑞達公司已成為國內(nèi)首屈一指的使用發(fā)酵法生產(chǎn)ＨＡ的廠商，其他各省市也有若干家中小企業(yè)在生產(chǎn)ＨＡ且以食品化妝品級為主。高品質(zhì)的藥用級ＨＡ仍需進口，特別是用于眼科手術(shù)及關(guān)節(jié)炎治療的ＨＡ進口產(chǎn)品，價格在每公斤８０萬元以上。隨著ＨＡ的醫(yī)療用途的不斷擴大，尤其是抗關(guān)節(jié)炎和抗腫瘤藥新用途的開發(fā)，在我國擁有１３億人口的巨大市場里，ＨＡ將有廣闊的市場前景。１．１．２透明質(zhì)酸的結(jié)構(gòu)與分布ＨＡ是由１３－（１＿３）和ｐ－（１＿４）糖苷鍵連接的（１—３）－２－乙酰氨基－２－脫氧－１３一葡萄糖（１＿４）…Ｏ１３Ｄ．葡萄糖醛酸雙糖重復(fù)單位組成，其結(jié)構(gòu)如圖１－１所示【１５】。一個分子質(zhì)量約為４ｘ１０６Ｄａ的完整ＨＡ，所包含的二糖單位數(shù)可達１００００個甚至更多（每個二糖單位分子質(zhì)量約為４００Ｄａ）〔１６１。ＩｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃａｃｉｄｉｉＮ－ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅＩ’■■■●■■■ｏ■■＿■■＿＿■●●＿■■■＿■■＿＿■■■■＿■■■■■■■■■一ｏ■■■■■■■■■■■■＿■■■■■■■■＿＿＿＿＿＿■■●■■■■■■■＿＿＿■一圖１－１由Ｄ．葡萄糖醛酸和Ⅳ－乙酰氨基葡萄糖組成的ＨＡ重復(fù)單位Ｆｉｇ．１—１ＲｅｐｅａｔｉｎｇｕｎｉｔｏｆＨＡｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆＤ－ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｃａｃｉｄａｎｄＮ－ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｅ電子顯微鏡下觀察ＨＡ為一線性單鏈，在水溶液中擴展成隨機的線圈狀，線圈的直徑約５００ｎｍ。ＨＡ分子中每一雙糖單位均含有一個羧基，在生理條件下均可解離成負離子，等空間距離負離子的相互排斥使其分子在水溶液中處于松展狀，占據(jù)了大量空間，可結(jié)合多于本身１０００倍的水。２第一章緒論隨著對ＨＡ生物活性研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)除了其粘彈性在關(guān)節(jié)腔內(nèi)所起到的潤滑、緩沖勢作用及在結(jié)締組織中充當填料的生物學(xué)功能之外，ＨＡ還通過作用于細胞及細胞間質(zhì)中的ＨＡ受體，調(diào)節(jié)細胞功能，在組織生成和修復(fù)、腫瘤侵襲等過程中發(fā)揮重要作用，ＨＡ的這種活性使人們認定ＨＡ有二級結(jié)構(gòu)甚至三級結(jié)構(gòu)的存在。對ＨＡ稀溶液進行光散射研究發(fā)現(xiàn)，ＨＡ在水溶液中成單螺旋狀態(tài)，分子內(nèi)的氫鍵使其形成螺旋結(jié)構(gòu)【１１７１。ＨＡ分子在水溶液中呈數(shù)種對稱體存在，如二折體（即分子鏈中每一扭含２個雙糖）、三折體或四折體等。二折體在酸性溶液中較常見，當溶液中的陽離子為鈣離子時則多以三折體形式存在。對ＨＡ手性光學(xué)檢查和核毆艙裱芯拷峁礱鰨芤褐械模齲練腫釉諍艽蟪潭壬弦雜行蜃刺嬖?。对｝x寥芤航屑畬硨?！管纺[恿坎槐洌芤旱惱扯讓饗越檔停菪陌刖都跣荊保浮?。当溶液由中许嶒碱性箟劚Ｄ[擁耐卣茍冉檔停腫佑捎行蜃刺蛭扌蜃刺洹＃齲寥芤涸謁嶁蘊跫攏腫幽誶餳猓褂蟹腫蛹淝餳５保穡任玻凳保芤旱惱車栽對陡哂謚行勻芤海怯捎冢齲練腫酉嗷プ饔瞇緯刪哂幸歡ǜ招緣拇蠓腫油唇峁顧隆?在ＨＡ二級結(jié)構(gòu)的研究中，發(fā)現(xiàn)當ＨＡ達到一定濃度時，ＨＡ分子間具有相互作用，形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，濃度更高時形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。用旋轉(zhuǎn)陰影電子顯微鏡觀察到ＨＡ分子可以聚集成長的細絲，這些細絲可以分枝構(gòu)成不規(guī)則的蜂巢狀。人們推測除了分子間氫鍵外，可能還有其它作用力存在。Ｓｃｏｔｔ依據(jù)其在旋轉(zhuǎn)陰影電子顯微鏡下所見，采用計算機模擬等手段，提出了ＨＡ的三級結(jié)構(gòu)，即ＨＡ分子中每個三糖單位均有一塊疏水區(qū)域，該區(qū)域由８個ＣＨ（相當于—個正辛烷）組成。無數(shù)個這樣的疏水區(qū)域有規(guī)律地交替分布存ＨＡ大分子的對應(yīng)面上。在高濃度時，ＨＡ分子間的疏水區(qū)域相互作用可構(gòu)成雙螺旋結(jié)構(gòu)，此為ＨＡ分子相互聚集的基礎(chǔ)【ｌ９１。ＨＡ分子聚集形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的能力受其分子量的影響，低分子量ＨＡ在低濃度時僅生成碎片狀網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，而高分子量ＨＡ卻能生成整體的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。Ｒｅｅｓ等發(fā)現(xiàn)在高分子量ＨＡ溶液中加入低分子量ＨＡ混合后，會極大地改變高分子量ＨＡ溶液的流變學(xué)性質(zhì)，這一作用為聚集．斷裂效應(yīng)１２０１。ＨＡ形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的能力具有分子量依賴性，據(jù)此可成功地解釋高分子量ＨＡ與低分子量ＨＡ在相同濃度下保護細胞免受自由基破壞時，后者效果差的原因。ＨＡ形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的特性賦予其廣泛的生物學(xué)功能及應(yīng)用開發(fā)前景。自然界中ＨＡ廣泛地存在于動物的各種組織內(nèi)，如結(jié)締組織、臍帶、皮膚、人血清、雞冠、關(guān)節(jié)滑液、腦、軟骨、眼玻璃體、人尿、雞胚、兔卵細胞、動脈和靜脈壁，其中在雞冠中的含量最高（７５００ｍｇ／Ｌ）Ｅ２１】。在哺乳動物體內(nèi)，以玻璃體、臍帶和關(guān)節(jié)滑液中含量較高（４１００ｍｇ／Ｕ）ｔ】。在這些組織中，ＨＡ常與蛋白質(zhì)結(jié)合，并與其它粘多糖共存，在玻璃體和滑液中以溶解的形式存在，在雞冠和臍帶中則以凝膠形式存在。ＨＡ在各組織或器官中的濃度或含量相對穩(wěn)定，若某一組織或器官的ＨＡ的濃度或含量出現(xiàn)較為明顯的變化，就說明該組織或器官存在病變。運用這一原理將ＨＡ作為一種診斷試劑已被應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)，即通過ＨＡ的含量變化情況來確定患病情況。ＨＡ同時也存在于部分細菌中，現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的產(chǎn)ＨＡ的細菌主要有產(chǎn)氣桿菌、綠膿桿菌和Ａ、Ｂ、Ｃ溶血性鏈球菌。１９３７年，Ｋｅｎｄａｌｌ等【２３Ｊ發(fā)現(xiàn)溶血性鏈球菌Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ３江南大學(xué)博士學(xué)位論文ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ可以合成ＨＡ并分泌到胞外形成莢膜。鏈球菌屬的許多細菌都具有莢膜，其主要成分就是ＨＡ。鏈球菌在生長過程中，莢膜的產(chǎn)生有幾種不同的情況，有的菌株整個生長期都有莢膜，有的在對數(shù)生長期的前期產(chǎn)生，后期消失；或穩(wěn)定期消失，有的根本不產(chǎn)生莢膜。這與菌種是否產(chǎn)生透明質(zhì)酸酶（ＨＡａｓｅ）有密切關(guān)系１２４Ｊ?？僧a(chǎn)生ＨＡ的鏈球菌多為Ａ族和Ｃ族，Ａ族中主要有釀膿鏈球菌等，由于致病性強，較少用作菌種進行大規(guī)模發(fā)酵；Ｃ族致病性較弱，多采用此類菌，主要有獸疫鏈球菌、馬疫鏈球菌和類馬疫鏈球菌等。發(fā)酵生產(chǎn)ＨＡ的菌種一般是將產(chǎn)生ＨＡ的鏈球菌進行誘變處理而得到的。除鏈球菌外，還有Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｍｕｌｔｏｃｉｄａ也可產(chǎn)生ＨＡ，只是合成ＨＡ的機制與鏈球菌不同【２５１。不同動物組織提取的及不同菌種發(fā)酵生產(chǎn)的ＨＡ無種屬差異，在化學(xué)本質(zhì)和分子