dehp對大鼠各組織器官的損傷

dehp對大鼠各組織器官的損傷

二聚苯二羧酸酯（2-ethyl）是塑料中最常見的酸酯增塑劑。過去一直認(rèn)為酞酸酯類化合物毒性低且有良好的理化特性,而無限制地生產(chǎn)和使用。已有的研究表明,DEHP可通過多種途徑進(jìn)入生物體內(nèi),對許多器官和組織包括肝臟、腎臟、肺組織、心臟以及生殖器官造成損傷,并引發(fā)多種疾病。筆者通過大鼠體內(nèi)染毒的方式,觀察DEHP對大鼠心、肝、腎和睪丸造成的損傷。1材料和方法1.1測試方法RM2135型切片機(jī)(萊卡公司),日本Olympus光學(xué)顯微鏡(可攝像并連接圖像分析儀),DHP-9082型電熱恒溫箱(上海儀表廠),萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司),5ml移液管,吸耳球,小燒杯,2.5ml灌胃針帶針頭。DEHP試劑(濃度98%,ShoreRoad公司,產(chǎn)品批號:2042110),食用調(diào)和油,甲醛,無水乙醇,二甲苯,石蠟,Harris氏蘇木素,Eosin伊紅等。1.2dehp的急性毒性試驗(yàn)6周齡清潔級健康雄性Wistar大鼠50只(購自南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)部,動物及動物房合格證號:2002021,飼養(yǎng)平均溫度為27~29℃,相對濕度50%~55%,體重(200±10)g。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7d后,采用隨機(jī)分組方法,分為4個染毒組和1個陰性對照組,每組10只。采用灌胃染毒法,4個染毒組DEHP灌胃液劑量分別為1500、3000、4500、6000mg/kg;DEHP用食用油配制成相同體積,陰性對照組每天灌胃相同體積的食用油,每天10:00時灌胃1次,每次2ml,每4d測一次大鼠體重,觀察其精神、行為和皮毛狀態(tài),染毒28d后,所有大鼠均用脊柱脫臼法處死。處死前,分別測量其體重,處死后分別取出心、肝、腎、睪丸,稱量記錄其濕重,計(jì)算臟器系數(shù)。臟器系數(shù)計(jì)算公式為:臟器系數(shù)(%)=臟器濕重/體重×100%1.3進(jìn)行染色,進(jìn)行微觀觀察將取出的臟器放入10%的甲醛溶液中固定12h,進(jìn)行洗滌、脫水、透明、浸蠟、包埋和切片,蘇木素-伊紅染色,中性樹膠封片,加蓋玻片,恒溫箱中烘烤15h后,置鏡下觀察并拍照。1.4數(shù)據(jù)處理方法數(shù)據(jù)以表示,各組間數(shù)據(jù)比較采用Dunnett-t檢驗(yàn)、相關(guān)分析及多組單因素方差分析,所有數(shù)據(jù)均用SPSS12.0forWindows統(tǒng)計(jì)軟件處理,P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1阿斯匹林藥毒組大鼠的異?，F(xiàn)象在實(shí)驗(yàn)過程中,溶劑對照組和1500mg/kg組的大鼠均未出現(xiàn)明顯異常表現(xiàn);3000、4500、6000mg/kg染毒組大鼠則有異?，F(xiàn)象,大鼠接觸DEHP后,在實(shí)驗(yàn)后期出現(xiàn)不同程度的行動遲緩,被毛疏松無光澤,6000mg/kg劑量組大鼠在處死時,被毛較其他各組易脫落。2.2dehp對大鼠體重的影響由表1可見,大鼠在接觸1500、3000、4500和6000mg/kg的DEHP4d后,有體重增長緩慢的現(xiàn)象,并均低于溶劑對照組,4500和6000mg/kg組大鼠染毒24d后,出現(xiàn)了體重停止增長且有體重減輕的現(xiàn)象。各組大鼠體重均數(shù)經(jīng)方差分析可知,實(shí)驗(yàn)前各組大鼠體重均值基本相同,隨時間變化,各組體重均值都有增加,對照組體重均數(shù)增長量最大,4個染毒組隨DEHP濃度的升高,其體重均數(shù)有依次降低的趨勢,各染毒組大鼠體重均數(shù)普遍低于溶劑對照組。染毒組的大鼠體重與對照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)。實(shí)驗(yàn)過程中,實(shí)驗(yàn)組大鼠的體重均數(shù)-時間曲線圖呈波浪形變化,各組大鼠的體重隨時間變化增長緩慢,體重增量依次減小,對照組大鼠的體重隨時間變化為持續(xù)性升高,其體重均數(shù)-時間變化圖呈直線樣上升,未有明顯波動出現(xiàn)。其中一組為1500mg/kg組,其體重曲線波動較小,體重變化趨勢與對照組相似;隨著染毒劑量升高,3000~6000mg/kg組的大鼠的體重變化波動較大,體重均數(shù)-時間變化曲線趨于平緩,體重增長緩慢,甚至出現(xiàn)體重下降,說明低劑量的DEHP對大鼠損傷作用較小,劑量越大對大鼠的損害作用越強(qiáng),體重波動越頻繁,體重增量越小。2.3兩組/體重、肝臟/體重、臟器/體重系數(shù)比較由表2可見,染毒28d后,各染毒濃度組大鼠其心臟/體重、肝臟/體重、腎臟/體重系數(shù)均高于對照組(P<0.05,P<0.01),都有增大的趨勢。而睪丸/體重系數(shù)則小于對照組(P<0.05,P<0.01)。2.4dehp對大鼠肝組織的影響鏡下觀察大鼠各組織切片發(fā)現(xiàn),對照組大鼠的心、肝、腎、睪丸組織細(xì)胞正常。而染毒組大鼠各組織細(xì)胞都有受到不同程度的損傷,4500、6000mg/kg染毒組大鼠各組織細(xì)胞受損更明顯。2.4.1DEHP對大鼠肝組織的影響1500mg/kg劑量組的大鼠肝細(xì)胞有輕度水腫,肝竇變窄,個別肝細(xì)胞有再生,可見雙核(封三圖1A);3000mg/kg組的大鼠肝細(xì)胞有輕度水腫,肝竇變窄,個別細(xì)胞出現(xiàn)空泡,產(chǎn)生脂肪變性(封三圖1B);4500mg/kg組可見部分肝細(xì)胞水腫,部分肝細(xì)胞出現(xiàn)空泡,產(chǎn)生脂肪變性,變性細(xì)胞多集中在中央?yún)^(qū)(封三圖1C);6000mg/kg組大鼠肝細(xì)胞可見小范圍的細(xì)胞灶狀壞死,有炎細(xì)胞浸潤,可見部分肝細(xì)胞再生,變性細(xì)胞在中央?yún)^(qū)及肝小葉周圍區(qū)均有出現(xiàn)(封三圖1D)。2.4.2心肌細(xì)胞水腫1500mg/kg組的大鼠心肌細(xì)胞正常,未發(fā)現(xiàn)明顯改變(封三圖2A);3000mg/kg組的大鼠心肌細(xì)胞輕度水腫(封三圖2B);4500mg/kg組心肌細(xì)胞有輕度的細(xì)胞水腫和橫紋不清(封三圖2C);6000mg/kg組的大鼠可見心肌細(xì)胞明顯細(xì)胞水腫和橫紋消失,部分肌漿溶解,有的肌纖維斷裂的現(xiàn)象,部分心肌細(xì)胞發(fā)生脂肪變性(封三圖2D)。2.4.3a,b的測定1500、3000mg/kg組大鼠腎近曲小管輕度水腫(封三圖3A、B);4500、6000mg/kg組大鼠腎曲小管明顯水腫,間質(zhì)充血,由于腫脹造成擠壓而使結(jié)構(gòu)模糊不清,內(nèi)皮細(xì)胞腫脹,有輕度至中度增生,增生的細(xì)胞壓迫毛細(xì)血管管腔變窄,腎小球血流受阻(封三圖3C、D)。2.4.4大鼠精子畸形試驗(yàn)1500mg/kg組大鼠睪丸細(xì)胞未發(fā)現(xiàn)明顯異常改變,曲精管正常,含各級精母細(xì)胞及成熟精子(圖4A),3000、4500、6000mg/kg組大鼠出現(xiàn)腺管腫脹,擠壓在一起,間質(zhì)充血,各級精母細(xì)胞減少,甚至精子消失等現(xiàn)象(封三圖4B、C、D)。3dehp對大鼠的毒性作用本次實(shí)驗(yàn)采用外來化合物的亞慢性毒性實(shí)驗(yàn),選擇其接觸途徑時,應(yīng)盡量模擬人類在環(huán)境中接觸該化合物的途徑或方式。人體吸收DEHP的途徑,除了職業(yè)與醫(yī)療接觸外,最常見的是通過食物與飲水,但由于大鼠個體間發(fā)育情況、對環(huán)境的適應(yīng)度、對DEHP敏感度等各方面有較大差異,其每日食物與水分?jǐn)z入量有差異,采用飼料或飲水經(jīng)口喂飼法給予DEHP時,受環(huán)境影響較大,如對DEHP敏感的鼠自行減少攝食量等,使大鼠間攝入的DEHP量缺乏可比性。因此本實(shí)驗(yàn)大鼠采用注射灌胃法攝入DEHP。對照組大鼠與各染毒組大鼠每天攝食量沒有區(qū)別,約為每只大鼠每天20~25g。動物的行為活動與精神狀態(tài)常常反映其生理病理狀態(tài),不同實(shí)驗(yàn)組大鼠在接觸DEHP過程中所出現(xiàn)的中毒癥狀如行動遲緩、萎靡不振、被毛疏松無光澤,都可以從側(cè)面反映DEHP對大鼠的毒性作用,這些癥狀都有助于探討DEHP對動物機(jī)體的損傷部位及程度。實(shí)驗(yàn)過程中,有多種因素均可影響動物體重的增長,如食欲變化、消化功能變化、代謝和能量消耗變化等,但很多體外化合物對動物的體重變化也有影響。本實(shí)驗(yàn)過程中,各組大鼠所處的環(huán)境相同,飼料與飲水相同,僅各組間大鼠DEHP染毒劑量不同,因而染毒組大鼠整體的體重均數(shù)增長減慢,高劑量組大鼠出現(xiàn)體重停止增長甚至體重下降的情況,說明是由于受試化合物DEHP引起的毒性效應(yīng)。臟器系數(shù)即臟/體比值,若受試化合物使某個臟器受到損害,如增生、充血、水腫、萎縮等,則此比值就會發(fā)生改變,可以增大或減小。因此,臟/體比值是一個靈敏、有效和客觀的指標(biāo)。研究發(fā)現(xiàn)各染毒組大鼠心、肝、腎/體重系數(shù)均明顯高于溶劑對照組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,均有增大的趨勢,且各臟器系數(shù)有隨染毒劑量增加而依次升高的現(xiàn)象,表明DEHP劑量越高對大鼠心、肝、腎損傷作用越嚴(yán)重;睪丸/體重系數(shù)明顯低于對照組,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,可見,染毒組睪丸有萎縮的趨勢,且隨著染毒劑量增加有萎縮加重的現(xiàn)象。這與厲曙光等報道相符。本實(shí)驗(yàn)是利用病理解剖學(xué)從形態(tài)學(xué)角度研究DEHP對大鼠的組織器官造成的損傷,任何組織的損傷都包括形態(tài)、機(jī)能和代謝三個方面的變化,損傷的原因主要是由于組織、細(xì)胞物質(zhì)代謝障礙引起的,DEHP對大鼠損傷的形態(tài)變化可間接說明DEHP對大鼠的組織代謝的