抱莖改良型g1基因克隆及表達(dá)分析

抱莖改良型g1基因克隆及表達(dá)分析

果皮粘液是由外皮細(xì)胞的高爾基體產(chǎn)生的，并通過胞腔或細(xì)胞壁的果膠溶液傳播。干燥的種子在水中成熟后，粘液立即釋放，形成一層透明的纖維，并被整個種子包圍。這樣的種子是粘液的繁殖體。抱莖獨行菜(LepidiumperfoliatumL.)為十字花科(Cruciferae)獨行菜屬(Lepidium)一年或二年生草本植物,其種子為典型粘液質(zhì)繁殖體,廣泛分布于新疆干旱荒漠區(qū)的各種生境。粘液質(zhì)的存在對粘液繁殖體種子的儲存、擴散、萌發(fā)、防御及幼苗生長等均具有重要生物學(xué)意義,是粘液質(zhì)繁殖體植物適應(yīng)荒漠環(huán)境的有效對策之一。TRANSPARENTTESTAGLABRA1(TTG1)基因編碼一個經(jīng)典的轉(zhuǎn)錄因子WD40-repeat蛋白,此蛋白家族在許多植物的主要器官均有表達(dá),在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期調(diào)控、RNA剪接、囊泡運輸和轉(zhuǎn)錄等方面行使重要功能。在擬南芥粘液質(zhì)合成和釋放過程中,TTG1基因是位于種皮分化及粘液質(zhì)產(chǎn)生調(diào)控途徑上游的調(diào)控因子。對擬南芥TTG1基因的相關(guān)研究顯示,該基因在擬南芥主要器官中均有表達(dá);在種子種皮形成的初始階段不發(fā)揮作用,但在粘液質(zhì)分泌細(xì)胞形成過程中表達(dá),對維持細(xì)胞分化、外種皮細(xì)胞質(zhì)小柱的形成以及種子吸水后粘液質(zhì)的釋放等過程具有重要作用。然而,目前對于其它粘液繁殖體中的TTG1基因還鮮見報道,克隆抱莖獨行菜TTG1基因并分析其在不同組織及角果不同發(fā)育階段的表達(dá)情況,可為研究種子粘液質(zhì)形成的分子機制提供理論依據(jù)。擬南芥(Arabidopsisthaliana)是十字花科具粘液繁殖體的代表種及模式植物,前人通過分子生物學(xué)、結(jié)構(gòu)化學(xué)及形態(tài)觀察等方法,對其種皮及粘液分泌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、粘液質(zhì)的產(chǎn)生及分泌、粘液質(zhì)的組成等方面進行了較為深入和系統(tǒng)的研究,已取得較大進展[10,11,12,13,14,15,16,17]。擬南芥種皮粘液質(zhì)的形成是種皮外層細(xì)胞協(xié)調(diào)分化過程的一部分,目前已從擬南芥中分離到一些粘液質(zhì)突變體(簡稱mum),如mum1、mum2、mum3、mum4、mum5、ap2、ttg1、ttg2、gl2、myb61、tt8、egl3等,這些材料為深入研究種皮細(xì)胞分化、粘液質(zhì)生物合成及分泌的分子機制奠定了基礎(chǔ)。一些經(jīng)典的轉(zhuǎn)錄因子參與了外種皮的發(fā)育,其突變體種子在水合狀態(tài)下不能釋放粘液質(zhì),如APETALA2(AP2)基因功能缺失的擬南芥不能形成細(xì)胞質(zhì)小柱(擬南芥表皮細(xì)胞中的一個結(jié)構(gòu)),且不能合成粘液質(zhì);GLABRA2(GL2)是表皮細(xì)胞質(zhì)小柱形成及吸漲后粘液質(zhì)釋放必不可少的基因。而TTG1基因在擬南芥表皮細(xì)胞分化過程中具有重要作用,它能夠調(diào)控表皮毛和根毛的形態(tài)發(fā)生、花青素的生物合成及種皮發(fā)育過程中粘液質(zhì)的積累;該基因突變體形成的細(xì)胞質(zhì)小柱異常且粘液質(zhì)遇水不能釋放。據(jù)報道,TTG1基因是粘液質(zhì)合成信號途徑上游的調(diào)控因子,并與其它基因相互作用,調(diào)控下游相關(guān)基因TTG2、MUM2、MUM4等的表達(dá)。我們前期的研究結(jié)果顯示,抱莖獨行菜外種皮細(xì)胞發(fā)育及種皮粘液質(zhì)形成的細(xì)胞生物學(xué)過程與同科植物擬南芥具有明顯差異。通過觀察發(fā)現(xiàn),抱莖獨行菜外種皮發(fā)育及粘液質(zhì)形成和釋放與擬南芥所經(jīng)歷的細(xì)胞質(zhì)重排、火山狀細(xì)胞質(zhì)小柱形成、圍繞火山產(chǎn)生粘液質(zhì)“口袋”等一系列過程不同的是,抱莖獨行菜種子外種皮不發(fā)生細(xì)胞質(zhì)重排,其種皮掃描結(jié)構(gòu)也不是火山狀。抱莖獨行菜外種皮(外珠被)最外層細(xì)胞在發(fā)育成熟過程中不斷增大,且其內(nèi)切向壁和縱向壁均增厚,而外切向壁保持初生壁(便于粘液質(zhì)釋放);外種皮最外層及其緊鄰內(nèi)層細(xì)胞在成熟發(fā)育過程中合成大量造粉體(通過形態(tài)和碘染觀察),當(dāng)造粉體逐漸消失,最外層就成為一層死細(xì)胞,其中充滿了吸水后可以釋放的粘液質(zhì)(此粘液質(zhì)具有一定的結(jié)構(gòu);未發(fā)表數(shù)據(jù))。粘液質(zhì)的合成與釋放是一個復(fù)雜的過程,涉及許多調(diào)控因子和相關(guān)功能基因。TTG1基因位于粘液質(zhì)合成途徑上游,盡管在擬南芥中已明確該基因的主要功能,但其在抱莖獨行菜粘液質(zhì)形成和分泌過程中的作用尚不清楚。為探究TTG1基因在抱莖獨行菜粘液質(zhì)繁殖體中的相關(guān)功能,本實驗利用同源克隆方法獲得了抱莖獨行菜TTG1基因ORF序列(簡稱為LpTTG1),并將其克隆到原核表達(dá)載體pET30a(+)中,獲得重組質(zhì)粒pET30a-LpMUM4并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21,重組蛋白LpTTG1經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)及純化后免疫新西蘭兔制備了多克隆抗體,隨后對抱莖獨行菜種皮發(fā)育過程進行免疫組織化學(xué)定位研究。同時,通過熒光定量qRT-PCR檢測LpTTG1基因在抱莖獨行菜不同組織及不同發(fā)育階段角果中的表達(dá)模式,以及轉(zhuǎn)基因擬南芥株系中LpTTG1過表達(dá)對粘液質(zhì)調(diào)控途徑下游基因MUM4的影響,最后觀察比較過表達(dá)LpTTG1擬南芥株系和野生型擬南芥的種子形態(tài)及粘液質(zhì)釋放的方式,并推測與分析LpTTG1基因在抱莖獨行菜種皮粘液質(zhì)形成過程中的作用,以期為種子粘液質(zhì)形成的分子機制提供理論依據(jù)。1材料和方法1.1野生型的擬南駁岸檢測抱莖獨行菜(Lepidiumperfoliatum)成熟種子于2005年6月采自新疆古爾班通古特沙漠南緣,干燥后冷藏(4℃)備用。于當(dāng)年選擇地表溫度相對較低的深秋季節(jié)(10月下旬),將抱莖獨行菜種子露地播種到新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院院內(nèi)試驗地中。當(dāng)花苞微張且最長的雄蕊高過柱頭時,用不同顏色標(biāo)記角果基部并記錄授粉時間(dayafterpollination,以下簡稱為DAP)。收集0~18DAP不同發(fā)育階段的角果進行qRT-PCR檢測。野生型擬南芥為Columbia生態(tài)型,ttg1突變體(編號為CS89)購自哥倫比亞俄亥俄州立大學(xué)擬南芥生物資源中心(ABRC)。種子經(jīng)表面滅菌后播于MS培養(yǎng)基,約10d左右能明顯觀察到兩片真葉出現(xiàn)時,將幼苗移入花盆(蛭石∶珍珠巖=1∶3),于22℃、16h光照/8h黑暗條件下培養(yǎng)。1.2抱莖行菜總rna的提取用RNAprepPurePlantKit(Bioteke)試劑盒提取抱莖獨行菜新鮮葉片(100mg)的總RNA。按照TAKARA反轉(zhuǎn)錄酶M-MLV說明書步驟,在20μL體系中,加入800ng總RNA,以oligo(dT)15為引物,于42℃孵育1h合成cDNA。1.3重組基因tg1基因表達(dá)與擴增根據(jù)GenBank發(fā)表的擬南芥與油菜TTG1基因cDNA全長序列(NM180739.2與EF175932.1)設(shè)計同源引物(上游引物:5'-GCGGTACCACCATGGATA-ATTCAGCTC-3'和下游引物:5'-GCGTCGACCT-CAAACTCTAAGGAGCTGC-3'),克隆抱莖獨行菜LpTTG1基因開放閱讀框序列(ORF),且在上、下游引物中分別引入KpnⅠ和SalⅠ酶切位點(下劃線部分),還在上游引物酶切位點后面引入起始密碼子附近的KOZAK序列(ACCA),以增強外源基因TTG1在轉(zhuǎn)基因植株中的表達(dá)。運用multi-alignment和BLAST程序分析不同TTG1基因的序列同源性以及氨基酸序列,并使用在線服務(wù)器程序Protscale(/cgibin/protscale.pl)計算LpTTG1蛋白推測分子量;采用軟件SMART4.0(http://smart.embl-heidelberg.de/)和MotifScan(http://myhits.isb-sib.ch/cgi-bin/motif_scan)分別分析LpTTG1蛋白功能結(jié)構(gòu)域及基序。1.4誘導(dǎo)表達(dá)蛋白的純化及免疫將LpTTG1基因編碼區(qū)插入原核表達(dá)載體pET30a的多克隆位點,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET30aLpTTG1,誘導(dǎo)表達(dá)帶His標(biāo)簽的融合蛋白以備后續(xù)純化。pET30a-LpTTG1含誘導(dǎo)型T7啟動子及終止子,并以卡那霉素抗性基因作為選擇標(biāo)記。重組蛋白LpTTG1經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)和純化后免疫新西蘭兔,用弗氏不完全佐劑增強免疫反應(yīng),每次免疫加強間隔1周,共免疫3次。通過ELISA和Westernblot檢測抗體的效價和特異性。1.5蓮座葉基因組dna提取及rt-pcr檢測將LpTTG1基因ORF序列插入植物表達(dá)載體pCAMBIA1301的多克隆位點,獲得重組載體pCAMBIA1301-LpTTG1。采用凍融法將重組質(zhì)粒pCAMBIA1301-LpTTG1轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105,利用花序浸染法轉(zhuǎn)化擬南芥野生型植株。收集擬南芥T0代種子,播種到含30mg/L潮霉素與300mg/L鏈霉素的MS培養(yǎng)基上,培養(yǎng)8~10d后,將陽性苗移至無抗生素的MS培養(yǎng)基上,恢復(fù)培養(yǎng)1周后再移栽至花盆中(蛭石∶珍珠巖=1∶3)。分別提取野生型擬南芥及其抗性植株蓮座葉的基因組DNA和總RNA,利用LpTTG1特異性(非AtTTG1)引物(上游引物:5'-CTCCTCCACTCGT-TCCGGCCAAAGG-3',下游引物:5'-CCAG-GCAATGTCGTGAACCTCCTTA-3')進行PCR、RT-PCR擴增。PCR擴增體系為20μL,反應(yīng)條件:94℃預(yù)變性5min;94℃變性50s,55℃退火50s,72℃延伸45s,30個循環(huán);72℃延伸5min。1.6目的基因的發(fā)現(xiàn)分析1.6.1定量pcr分析分別提取抱莖獨行菜根、莖、葉、角果等不同組織及不同發(fā)育階段角果(1、5、8、11、15DAP)的總RNA,并利用GeneAmp5700實時PCR系統(tǒng)及SYBRGreen(Invitrogen)進行定量PCR分析。PCR擴增程序:95℃預(yù)變性2min;95℃變性30s,62℃退火30s,72℃延伸30s,40個循環(huán)。以抱莖獨行菜的β-actin基因為內(nèi)參(上游引物:5'-CCAAAGGCCAACAGAGAGAAGAT-3',下游引物:5'-TGAGACACACCATCACCAGAAT-3')。1.6.2pcr擴增atmom4基因回復(fù)突變株的pcr擴增分別提取野生型和過表達(dá)LpTTG1擬南芥根、莖、葉、角果等不同組織的總RNA,并利用特異引物(上游引物:5'-GTGAGGGACATGAAGGAAAAGCT-3',下游引物:5'-AGACACTGTACTTCCTCTCTGGTG-3')對AtMUM4進行擴增,PCR擴增程序:95℃預(yù)變性2min;95℃變性30s,60℃退火30s,72℃延伸30s,共40個循環(huán)。以擬南芥的β-actin基因作為內(nèi)參。1.6.3小鼠血清緩沖液ph用4%多聚甲醛固定液固定0~20DAP的角果,于4℃靜置24h后制作石蠟切片。利用超薄切片機LicaRM2126將其切成厚度5~10μm的切片,展平至載玻片上。與抗體孵育之前,用1%牛血清白蛋白(BSA)配置的10%山羊血清緩沖液(pH7.4)于37℃孵育載玻片15min。將一抗(抗β-1,3-D-glucan抗體)按1∶100稀釋后,在每張切片組織上滴加100μL,37℃孵育1h;然后用加入Tween-20的磷酸鹽緩沖液(PBST,pH7.4)洗脫,再將按1∶500稀釋辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的山羊抗兔二抗,滴加到每張切片組織上(100μL),37℃孵育1h;最后按照二氨基聯(lián)苯胺(DAB)染色試劑盒說明書對切片組織進行染色,并置于光學(xué)顯微鏡MoticB5professionalseries(BockOptronicsInc.,Canada)下觀察、拍照。1.7種子形態(tài)觀察利用體式顯微鏡(NikonSMZ800,Japan)觀察擬南芥野生型、ttg1突變體及LpTTG1過表達(dá)株系種子形態(tài),并通過釕紅(針對多聚糖的染料)染色觀察種子種皮粘液質(zhì)的釋放過程及著色程度。1.8數(shù)據(jù)分析軟件本實驗所有數(shù)據(jù)均采用3次重復(fù)并取其平均值,使用GraphPadPrismVersion4.02(GraphPadSoftware,SanDiego,CA)軟件對數(shù)據(jù)進行分析;對獨立樣本數(shù)據(jù)采用未配對t檢驗和單因素方差分析,若差異顯著則在P=0.05水平上進行多重比較Tukey檢驗。2結(jié)果與分析2.1抱莖行菜所生的低通量及其同源性通過同源克隆獲得抱莖獨行菜LpTTG1基因cDNA的開放閱讀框序列(ORF),BLAST分析顯示該基因ORF全長為1032bp,編碼343個氨基酸,分子量為38.11kD,等電點為4.71。多序列比對結(jié)果表明,抱莖獨行菜LpTTG1基因與GenBank公布的擬南芥AtTTG1以及油菜(Brassicanapus)BnTTG1核酸序列分別具有88.95%與79.55%的同源性,氨基酸序列分別有96.79%與91.55%的同源性。抱莖獨行菜、擬南芥、油菜TTG1氨基酸序列之間blast結(jié)果如圖1所示,其中方框內(nèi)的序列是WD40蛋白家族的必要基序(表1),這說明從抱莖獨行菜中克隆得到了TTG1基因。2.2單帶栽培perthg1基因的發(fā)現(xiàn)分析2.2.1不同組織中l(wèi)pttg1基因表達(dá)分析為了解LpTTG1基因在抱莖獨行菜不同組織中的表達(dá)水平,分別提取抱莖獨行菜根、薹、蓮座葉、抱莖葉及角果的總RNA進行qRT-PCR表達(dá)檢測,結(jié)果顯示,抱莖獨行菜TTG1基因在不同組織中均有表達(dá)(相對表達(dá)量為1.0~3.21),反映了該基因功能的多樣性(圖2)。LpTTG1相對轉(zhuǎn)錄水平在根中最高,抱莖葉中最低,然而單因素方差分析顯示不同組織中的表達(dá)量無顯著差異(P=0.1194)。為探究LpTTG1基因在抱莖獨行菜種子成熟過程中的表達(dá)情況,分別采集授粉后1、5、8、11、15d的角果提取總RNA并進行qRT-PCR表達(dá)檢測。結(jié)果顯示(圖3),LpTTG基因的mRNA積累量在角果發(fā)育后期(授粉后11~15d)上升趨勢更為明顯,但不同發(fā)育階段之間無顯著差異(P=0.0760)。2.2.2免疫組織化學(xué)為進一步探究抱莖獨行菜不同發(fā)育階段角果中LpTTG1蛋白表達(dá)水平的變化,制作了石蠟切片并純化重組蛋白LpTTG1制備了多克隆抗體(數(shù)據(jù)未列出),經(jīng)一抗(抗β-1,3-D-glucan抗體)和HRP標(biāo)記的山羊抗兔二抗分別孵化切片組織后染色。據(jù)甲苯胺藍(lán)染色部位,可將抱莖獨行菜粘液質(zhì)的形成及種皮分化過程分為4個階段:首先,在種皮發(fā)育早期(0~4DAP),表層細(xì)胞均含有細(xì)胞核、中央大液泡及被擠壓到邊緣的細(xì)胞質(zhì);其次,在5~7DAP階段,表皮細(xì)胞開始產(chǎn)生粘液質(zhì)但仍存在造粉體;第三,在8~12DAP階段,表皮細(xì)胞中的造粉體和內(nèi)容物逐漸消失;最后的13~18DAP階段,表皮細(xì)胞變成勻質(zhì)的粘液細(xì)胞,此時種子完全成熟。免疫組織化學(xué)定位分析結(jié)果顯示,在剛結(jié)束授粉的成熟胚珠階段,各層珠被細(xì)胞形態(tài)大小一致(圖4:A),與空白血清作為陰性對照的染色結(jié)果相比(圖4:B),LpTTG1在各層珠被細(xì)胞中均有表達(dá),且表達(dá)量一致(圖4:C)。隨后,兩層外珠被細(xì)胞開始分化并產(chǎn)生造粉體(圖4:D),和空白對照相比(圖4:E),LpTTG1在內(nèi)外珠被各層細(xì)胞和胚中均有表達(dá),在外珠被表皮細(xì)胞中的表達(dá)量最高,且集中在細(xì)胞核周圍(圖4:F)。外珠被兩層細(xì)胞的造粉體繼續(xù)積累(圖4:G),與空白對照相比(圖4:H),LpTTG1仍在外珠被表皮細(xì)胞中圍繞細(xì)胞核高表達(dá)(圖4:I)。授粉后8~15d的角果,外珠被表皮細(xì)胞產(chǎn)生粘液質(zhì),造粉體退化、減少并呈錐狀堆積,內(nèi)珠被退化、層數(shù)減少(圖4:J),與空白對照相比(圖4:K),LpTTG1在內(nèi)外珠被各層細(xì)胞和胚中都有表達(dá);在珠被(種皮)各層細(xì)胞中,LpTTG1在外珠被兩層細(xì)胞中的表達(dá)量有所下降,內(nèi)珠被最外層細(xì)胞中表達(dá)量突然增高(圖4:L)。隨后,外珠被表皮細(xì)胞產(chǎn)生大量的粘液質(zhì),造粉體退化、減少,幾乎完全消失,內(nèi)珠被只剩下細(xì)胞質(zhì)濃厚的柵欄層(圖4:M),和空白對照相比(圖4:N),LpTTG1在胚中仍有表達(dá),但在種皮細(xì)胞中的表達(dá)量已顯著降低(圖4:O)。最后,在成熟種子的外種皮中LpTTG1的表達(dá)量降至最低。2.3rt-pcr分析lpttg1基因表達(dá)對植物基為探究LpTTG1在抱莖獨行菜種皮分化及粘液質(zhì)形成中的作用,構(gòu)建了植物表達(dá)載體pCAM-BIA1301-LpTTG1并轉(zhuǎn)化擬南芥。提取轉(zhuǎn)基因擬南芥T1代植株的基因組DNA,并以抱莖獨行菜TTG1cDNA的特異性引物(選擇抱莖獨行菜和擬南芥TTG1cDNA序列中差異最大的區(qū)段分別設(shè)計上、下游引物,并確認(rèn)只能擴增出各自的相應(yīng)片段)進行PCR擴增,結(jié)果顯示,在預(yù)期位置擴增出了目的條帶(圖5:A,460bp)。挑選PCR陽性植株提取總RNA,以抱莖獨行菜TTG1cDNA特異性引物進行RT-PCR擴增,檢測外源基因在擬南芥中的表達(dá)(圖5:B),確認(rèn)獲得了轉(zhuǎn)基因株系。為探究LpTTG1過量表達(dá)對粘液質(zhì)合成途徑中其它相關(guān)基因的影響,分析了野生型(WT)和TTG1過表達(dá)擬南芥植株(TOP)不同組織(根、薹、葉、角果)中TTG1下游基因AtMUM4的表達(dá)變化。qRT-PCR結(jié)果顯示,LpTTG1在擬南芥中過量表達(dá)顯著增強了角果中AtMUM4的表達(dá)(圖6,P<0.05),表明該基因在轉(zhuǎn)基因株系中表達(dá)且參與角果發(fā)育過程相關(guān)事件。為進一步明確TTG1基因在種皮分化及粘液質(zhì)沉積中的作用,觀察了擬南芥野生型、ttg1突變體及TTG1過表達(dá)株系種子形態(tài)及粘液質(zhì)釋放過程。結(jié)果顯示,ttg1突變體種子花青素合成能力下降(圖7:A1)且?guī)缀醪环置谡骋嘿|(zhì)(圖7:A2,A3);而過表達(dá)株系與野生型種子表皮細(xì)胞的形態(tài)、粘液質(zhì)的釋放方式及數(shù)量等均無顯著差異(圖7:Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ)。3抱莖體制和中性型基因的表達(dá)本實驗通過同源克隆得到了抱莖獨行菜種皮粘液質(zhì)調(diào)控基因TTG1的cDNA序列,并對其進行了初步的功能鑒定。LpTTG1基因ORF序列及氨基酸序列的多重比對結(jié)果顯示,LpTTG1、擬南芥AtTTG1和油菜BnTTG1基因具有較高同源性,且不同TTG1基因編碼的WD40蛋白擁有共同基序。qRT-PCR和免疫定位分析顯示,LpTTG1與抱莖獨行菜角果發(fā)育、種皮分化及粘液質(zhì)合成相關(guān)。該基因過量表達(dá)增加了轉(zhuǎn)基因擬南芥粘液質(zhì)調(diào)控途徑下游基因AtMUM4的轉(zhuǎn)錄水平,但對種子形態(tài)及粘液質(zhì)分泌與釋放方式無顯著影響。有研究表明,擬南芥粘液質(zhì)的合成與分泌是一個復(fù)雜過程,涉及許多調(diào)控因子和相關(guān)功能基因,AtTTG1就是位于該調(diào)控網(wǎng)絡(luò)上游的一個調(diào)控基因。AtTTG1含有4個WD序列,形成功能性β-螺旋折疊結(jié)構(gòu)最少需要4個WD重復(fù)序列(也稱Trp-Asp或WD40基序,通常由大約40個氨基酸殘基構(gòu)成,存在保守的GH和WD序列)。WD重復(fù)序列蛋白由一個很大的基因家族編碼,在擬南芥中已鑒定出59種。到目前為止,推測所有WD蛋白在一系列細(xì)胞事件中均具有調(diào)控作用。本研究結(jié)果顯示,LpTTG1與擬南芥氨基酸序列具有高度同源性,也具有4個WD重復(fù)序列,推測抱莖獨行菜TTG1蛋白與擬南芥TTG1蛋白具有相似的多重生物學(xué)功能。AtTTG1在各器官均有表達(dá),調(diào)控多種性狀,如表皮毛與根毛發(fā)生、種子花青素合成、種皮發(fā)育及粘液質(zhì)的形成與釋放等。本實驗發(fā)現(xiàn)抱莖獨行菜TTG1基因能在不同組織中表達(dá)且轉(zhuǎn)錄水平無顯著差異,這可能暗示了該基因功能的多樣性。此外,qRT-PCR結(jié)果顯示LpTTG1基因的mRNA在角果中逐漸積累,表明該基因可能在角果和種子成熟過程中發(fā)揮作用。擬南芥TTG1基因負(fù)責(zé)調(diào)控種皮發(fā)育和粘液質(zhì)