白土茯苓中-谷甾醇的含量測定

白土茯苓中-谷甾醇的含量測定

白土耳其自治區(qū)是百合科肖登植物。春、秋二季采挖,除去須根及泥沙,洗凈,趁鮮切片,曬干。其主要分布于湖南、四川、云南和貴州等地。白土茯苓味甘、淡,性平,主治小便淋澀、白濁、帶下、癰腫瘡毒。臨床多用于治療筋骨攣痛、瘰疬癰腫、梅毒、鉤端螺旋體病。國內(nèi)外有關(guān)白土茯苓的研究較少。20世紀(jì)70年代,曾從白土茯苓中分離得到β-谷甾醇(β-sitosterol)、棕櫚酸(palmaiticacid)和硬脂酸(stearicacid)等。藥理實(shí)驗(yàn)表明,β-谷甾醇具有明顯的降膽固醇、止咳、抗癌、抗炎等藥理作用。目前報道的分析方法有薄層掃描法、氣相色譜法、高效液相色譜-紫外檢測法、高效液相色譜-ELSD法等。本試驗(yàn)對白土茯苓中β-谷甾醇含量進(jìn)行測定。在選定的色譜條件下,供試溶液中β-谷甾醇與相鄰組分分離度良好。經(jīng)方法學(xué)考察,方法的重復(fù)性、穩(wěn)定性、精密度、加樣回收率均符合有關(guān)規(guī)定,可用于該藥材的質(zhì)量控制。1儀器、試劑和試劑Aglient1100高效液相色譜儀:AglientG四元泵(Quatpump),AglientG1322A真空在線脫氣機(jī)(Degrasser),AglientG1313A自動進(jìn)樣器(ALS),AglientG1315DAD二極管陣列檢測器,Aglientchimstationsystem(安捷倫化學(xué)工作站);電子天平(德國賽多利斯,BP-211D型);超聲波清洗器(KQ3200DB型,昆山市超聲儀器有限公司)。三氯甲烷(天津市申泰化學(xué)試劑有限公司);無水乙醇(北京化工廠);甲醇(色譜純,天津科密歐公司);磷酸(北京紅星化工廠)。β-谷甾醇對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號11085-200504);白土茯苓(山西振東藥業(yè)提供,來源為貴州省安順市多個縣區(qū),經(jīng)本院李先榮教授鑒定為百合科肖菝葜屬植物短柱肖菝葜)。2方法和結(jié)果2.1流動相、流速色譜柱:sinachromODS-BP(5μm,4.6mm×250mm);檢測波長210nm;流動相:甲醇-0.1%磷酸(98∶2);流速:1.0mL/min。理論塔板數(shù)均大于3000。色譜圖見圖1。2.2對照溶液的制備精密稱取β-谷甾醇對照品4.4mg,置10mL容量瓶中,加無水乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得對照品溶液。2.3供試品溶液的制備取白土茯苓粉末約5g,精密稱定,置于錐形瓶中,加三氯甲烷100mL,浸泡1h,超聲處理(功率150W,頻率40Hz)1h,濾過,蒸干,殘渣加無水乙醇使溶解并轉(zhuǎn)移置25mL量瓶中,加無水乙醇至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,即得供試品溶液。2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別精密吸取0.5、1、2、5、10、20μL的對照品溶液,注入液相色譜儀中,按上述色譜條件測定色譜峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo),對照品質(zhì)量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,回歸方程為:Y=29.621X+2.1807,r=1.0000。結(jié)果顯示,進(jìn)樣量在0.22~8.8μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.5儀器精密度試驗(yàn)取對照品溶液10μL,在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次,分別測得β-谷甾醇峰面積,結(jié)果β-谷甾醇峰面積RSD=1.03%,表明儀器精密度良好。2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份樣品供試液,分別于配置后0、2、5、9、12h進(jìn)樣測定,測得β-谷甾醇含量的RSD=1.80%,表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。2.7含量測定取同一批樣品粉末約5g,共5份,精密稱定,分別按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,各取20μL分別進(jìn)樣測定,結(jié)果β-谷甾醇含量平均值為0.073%,RSD=0.91%。2.8加樣回收率測定取樣品5份,每份取粉末約2.5g,精密稱定,準(zhǔn)確加入β-谷甾醇對照品一定量,按“2.3”項(xiàng)下方法制備,測定含量,計算回收率,結(jié)果見表1。2.9樣品含量的測量取3批白土茯苓藥材樣品,按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。分別精密吸取10μL,按上述色譜條件測定,結(jié)果見表2。3提取方法的確定本試驗(yàn)采用HPLC法測定白土茯苓中β-谷甾醇的含量,操作在常溫下進(jìn)行,方法靈敏度高,操作簡便、快速,為白土茯苓中β-谷甾醇的含量測定提供了可靠的依據(jù)。在選擇提取溶劑時,對氯仿、甲醇、乙醇進(jìn)行了比較,結(jié)果表明,氯仿不僅提取效率高,而且雜質(zhì)少。在選擇提取方法時,對索氏提取法和超聲提取法進(jìn)行了比