桑黃的名實(shí)與種名考辨

桑黃的名實(shí)與種名考辨

黑莓是黑莓、黑莓或胡孫眼的俗稱(chēng)?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》和《本草綱目》記載“治療經(jīng)氣虛證、月度閉血、產(chǎn)后血凝、男性不適、伏血、赤血”。自古以來(lái)，它就被用作珍稀藥物。桑黃的藥用價(jià)值最先在中醫(yī)典籍中得到肯定,近代研究顯示桑黃對(duì)腫瘤抑制率達(dá)96.78%,是國(guó)際公認(rèn)的最有效的抗癌真菌,其突出的抗腫瘤功效在日韓等國(guó)備受關(guān)注。1桑黃種phellinus桑黃屬于真菌界(Fungi)擔(dān)子菌門(mén)(Basidio-mycota)刺革菌目(Hymenochaetales)刺革菌科(Hymenochaetaceae),是硬質(zhì)多孔菌。因天然桑黃產(chǎn)量極少,而其他類(lèi)似野生種類(lèi)較多,一直沒(méi)有明確、統(tǒng)一的種名。日韓學(xué)者認(rèn)為桑黃種名為Phellinuslinteus(裂蹄木層孔菌,現(xiàn)為Inonotuslinteus),戴玉成(1998)研究表明裂蹄木層孔菌分布于熱帶美洲和非洲而非東亞地區(qū),桑黃應(yīng)是P.baumii(鮑氏針層孔菌,現(xiàn)為I.baumii),得到韓國(guó)學(xué)者認(rèn)同,但暴麻子長(zhǎng)于丁香樹(shù)而不是桑樹(shù)。鄧叔群(1963)和劉波(1974)指出桑黃學(xué)名是P.igniarius(火木層孔菌),火木層孔菌可長(zhǎng)于多種闊葉樹(shù)上,但不長(zhǎng)于桑樹(shù),雖也是藥用真菌但效果不突出。此外,還有外形似桑黃長(zhǎng)于桑樹(shù)的粗毛纖孔菌(Inono-tushispidus),但藥效不明顯。多種類(lèi)似桑黃的多孔菌使桑黃真面目更加撲朔迷離,直到吳聲華戴玉成(2012)結(jié)合形態(tài)特征與分子鑒定,表明桑黃是分布于中、日、韓,僅生長(zhǎng)于桑屬(Marus)植物上的新種Inonotussanghuang。2桑黃的生長(zhǎng)與發(fā)育桑黃原基呈檸檬黃或嫩黃色,子實(shí)體較大,菌蓋表面黃棕色至棕色,多年生老熟子實(shí)體菌蓋呈棕褐色,無(wú)菌柄,菌蓋多木質(zhì)化,具有反復(fù)生長(zhǎng)-停頓形成的年輪狀結(jié)構(gòu),有扇形、馬蹄形等,多見(jiàn)于10年以上老桑樹(shù)反復(fù)修剪而膨大的剪口部位。子實(shí)體邊緣可增大生長(zhǎng),腹面可增厚生長(zhǎng)。甄占萱等調(diào)查河北省承德市野生桑黃的生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律表明,承德桑園中的天然桑黃每年7-9月原基發(fā)生,主要著生于35年老齡桑樹(shù)的主干和側(cè)枝上,子實(shí)體萌發(fā)到孢子釋放完需12~15天,影響桑黃子實(shí)體發(fā)育主要環(huán)境因素是氣溫和濕度,其次是光照和通風(fēng)。野生桑黃生長(zhǎng)期間平均氣溫18.1~33℃,平均空氣相對(duì)濕度79.8%以上,散射光為宜,通風(fēng)不暢影響子實(shí)體生長(zhǎng),但對(duì)孢子形成影響不大。3蛋白雜多糖組成結(jié)構(gòu)由于桑黃新種確定時(shí)間尚短,前期對(duì)活性成分及功能研究集中于桑黃類(lèi)似菌,研究材料主要來(lái)源于P.linteus(裂蹄木層孔菌)、P.baumii(鮑氏針層孔菌)、P.igniarius(火木層孔菌)等,對(duì)深入透徹了解桑黃很有借鑒作用。桑黃多糖是桑黃類(lèi)真菌主要活性成分,可增強(qiáng)免疫力具抗腫瘤活性。Kim.G.Y等從P.linteus子實(shí)體粗多糖中分離得到一種酸性蛋白聚糖,分子量150KD,多糖72.2%,蛋白質(zhì)22.3%,多糖部分主要由甘露糖、半乳糖、葡萄糖、樹(shù)膠醛糖和木糖構(gòu)成,蛋白質(zhì)部分由大量的天門(mén)冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸和絲氨酸,是以β(l-3)-D-葡萄糖為主鏈,β(l-6)-D-葡萄糖為側(cè)鏈的蛋白雜多糖。QingGe等從P.baumii子實(shí)體分離到新的水溶性雜多糖,含L-巖藻糖、D-甘露糖、D-葡萄糖,以α,β-(1→6)-d-葡萄糖為骨架,在O-3位置上一個(gè)取代基,此外還包含(1→3,6)-p-d-甘露糖殘基和末端葡萄糖殘基。桑黃類(lèi)中萜類(lèi)成分包括倍半萜、二萜和三萜,三萜較常見(jiàn),有軟木三烯酮,β-乳香酸,熊果酸,蒲公英賽醇。莫順燕等在人工培養(yǎng)的火木層孔菌發(fā)現(xiàn)了9個(gè)新倍半萜及一個(gè)已知的倍半萜。王琪等從火木針層孔菌子實(shí)體中分離得到1個(gè)松香烷型二萜。已知藥用真菌中,僅有桑黃及其類(lèi)似菌含有黃銅。黃酮具有抗氧化、抗菌抗病毒、降血糖、護(hù)肝等多種藥理活性。莫順燕等首次從桑黃中分離到柚皮素,櫻花亭,二氫莰非素,7-甲氧基二氫莰非素,北美圣草素,香豆素等化合物,及兩個(gè)新的二氫黃酮衍生物,并成功人工合成。AkitoNagatsu等(2014)從P.linteus子實(shí)體甲醇提取物中得到桑黃黃酮A和B兩種新化合物。WoonHyungYeo等在P.linteus發(fā)酵液中分離到一種新的呋喃酮衍生物,分子量248,分子式C15H20O3,可顯著抑制枯草芽胞桿菌生長(zhǎng)。4藥理作用4.1桑黃多糖的體外藥動(dòng)學(xué)通過(guò)激活巨噬細(xì)胞、增強(qiáng)其吞噬功能、誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生和分泌腫瘤壞死因子,桑黃多糖對(duì)小鼠肝癌H22、肉瘤S180和肺癌Lewis均有較好的抑瘤作用,該機(jī)制也是桑黃抗腫瘤作用的重要機(jī)制之一。桑黃抗腫瘤機(jī)制主要是誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡,增強(qiáng)免疫系統(tǒng)促進(jìn)免疫應(yīng)答,抑制細(xì)胞代謝,且大劑量長(zhǎng)時(shí)間使用也對(duì)人體無(wú)任何毒副作用,還能緩解放、化療副作用。胡啟明從固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)的桑黃菌絲體,提純到3種均一多糖組分Plps-1、Plps-2和Plps-3,具一定抗氧化效果,但不具有顯著性,3種組分均可極顯著提高脾細(xì)胞活力,Plps-1和Plps-2可極顯著提高胸腺細(xì)胞活力,Plps-1能顯著提髙巨噬細(xì)胞吞噬能力,且3種成分均能顯著提高巨噬細(xì)胞分泌能力。Plps-1能夠抑制93.6%腫瘤細(xì)胞S180體外增殖,AnnexinV-FITC/PI細(xì)胞周期以及細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Plps-1誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡,使其停止在G1期,且無(wú)毒副作用。桑黃野生子實(shí)體熱水提物對(duì)小鼠肉瘤S180抑制率達(dá)96.7%。乙酸乙脂、甲醇和水的提取物顯著抑制DLA引起的小鼠腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng),以乙酸乙醋的提取物效果最好。張敏等確定桑黃多糖在500mg/kg劑量時(shí)對(duì)H22肝癌作用較為明顯。溫克等比較桑黃、靈芝、阿加里斯茸、PL-2,PL-5等5種真菌類(lèi)藥物抗腫瘤作用,桑黃的作用最為明顯。4.2血清-干擾張萬(wàn)國(guó)等研究表明,桑黃能顯著降低肝纖維化大鼠血清氨基酸轉(zhuǎn)移酶水平和血清膠原含量。病理組織觀察顯示對(duì)肝細(xì)胞保護(hù)作用明顯,可抑制纖維組織增生,阻止肝纖維化形成與發(fā)展,顯著提高血清γ-干擾素水平。Kim等發(fā)現(xiàn)裂蹄針層孔菌的菌絲體甲醇提取物,通過(guò)保持肝谷胱甘肽水平,恢復(fù)RNA合成而起到保護(hù)肝臟的作用,對(duì)H2O2或軟骨糖胺(Galactos-amine)處理的原代培養(yǎng)鼠肝細(xì)胞有保護(hù)作用,以乙酸乙酯萃取部分保護(hù)作用最好。4.3誘導(dǎo)抗體作用張萬(wàn)國(guó)等發(fā)現(xiàn)火木針層孔菌能直接誘導(dǎo)人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PMNCs)產(chǎn)生γ-干擾素,IFN-γ具有明顯的抗腫瘤活性,誘導(dǎo)T細(xì)胞輔助抗體產(chǎn)生,增強(qiáng)細(xì)胞毒T細(xì)胞和NK細(xì)胞對(duì)腫瘤的殺傷作用,并通過(guò)作用于巨暖細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞調(diào)節(jié)機(jī)體免疫。HUANGHuiyu等證明口服裂蹄針層孔菌能顯著減少腫瘤細(xì)胞大小,增加T細(xì)胞數(shù)量及IL-12、IFN-γ.TNF-α的分泌,增強(qiáng)NK細(xì)胞活性和抑菌力。Oh等試驗(yàn)表明桑黃水提物口服制劑可誘導(dǎo)IFN-γ產(chǎn)生,促進(jìn)T淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)。4.4清除細(xì)胞自由基鮑氏針層孔菌甲醇提取物和熱水提取物中的酌類(lèi)物,對(duì)羥基自由基、過(guò)氧化氧的清除率在80%~90%(Mi-YaeShon等),對(duì)裂蹄針層孔菌子實(shí)體的70%乙醇浸提物,具有良好的抗氧化活性(Song等)。4.5間接誘變劑的誘變作用火木針層孔菌和裂蹄針層孔菌多糖(固體發(fā)酵、子實(shí)體水提及液體發(fā)酵液和菌絲體),可抑制直接誘變劑四銷(xiāo)基苯二胺(NPD)、疊氮化鈉(NaN3)和間接誘變劑2-氨基芴(2-AF)、苯并芘(BaP)的誘變作用。通過(guò)提高機(jī)體抗氧化防御功能,減小自由基對(duì)生命大分子損傷,抑制脂質(zhì)過(guò)氧化等途徑,桑黃胞內(nèi)多糖能明顯拮抗環(huán)磷酰胺引起的小鼠體細(xì)胞和生殖細(xì)胞突變。4.6孔菌子實(shí)體正丁醇提取物對(duì)抗菌性能的影響Kim等發(fā)現(xiàn)裂蹄針層孔菌一種蛋白多糖,可誘導(dǎo)HO-1活性防治自身免疫性關(guān)節(jié)炎。Hur等研究表明,裂蹄針層孔菌子實(shí)體正丁醇提取物對(duì)耐甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌抑菌活性良好。Jang等證明,鮑氏針層孔菌提取物能夠抑制炎癥細(xì)胞(包括中性白細(xì)胞、IL-1β)增加,在人的急性肺炎治療中可能產(chǎn)生積極影響。4.7化合物的抗衰老能力吳娜以體外修復(fù)受損神經(jīng)細(xì)胞和清除自由基的能力為指標(biāo),鑒定出桑黃子實(shí)體醇提物乙酸乙酯萃取相和正丁醇萃取相抗衰老能力較好。對(duì)乙酸乙酯相分離純化后,得到11個(gè)單一化合物,化合物10和化合物11有較好抗衰老活性。隨后在純化物對(duì)老年癡呆癥病程發(fā)展關(guān)鍵酶作用研究表明,化合物10和化合物11對(duì)乙酰膽堿酯酶抑制率高于其他成分,化合物10還能抑制衰老細(xì)胞中BACE1和HDAC家族蛋白的表達(dá),延緩衰老的發(fā)生。5人工培訓(xùn)5.1袋料栽培基質(zhì)優(yōu)化桑樹(shù)、楊樹(shù)、柞樹(shù)都可以作為栽培桑黃屬的良好樹(shù)種。段木栽培時(shí),25℃黑暗條件下培養(yǎng),不宜與其他菌種共同培養(yǎng),出菇溫度25~30℃,土壤的濕度50%~60%,空氣濕度在90%以上,通氣良好。栽培鮑氏針層孔菌過(guò)程中,子實(shí)體形成期多糖含量最高,孢子彈射后最低,抗氧功效方面,栽培子實(shí)體可以取代野生的。人工段料栽培的問(wèn)題是需要消耗大量木材,菌種易退化且生長(zhǎng)周期長(zhǎng)。鐘石等優(yōu)化得到袋料栽培基質(zhì)為:木屑50%,桑皮10%,棉籽殼30%,麩皮8%,糖、石膏各1%;桑枝段適量。接種后恒溫25℃濕度約90%,培養(yǎng)30-40天后菌絲體轉(zhuǎn)黃,菌袋劃出小口,給予晝夜溫差刺激(20~27℃),空氣濕度增至95%以上,促進(jìn)原基分化,50~60天后子實(shí)體發(fā)育成熟。5.2最佳培養(yǎng)條件優(yōu)化藥用真菌菌絲體發(fā)酵是獲得活性物質(zhì)的快速途徑,成為藥用真菌研究熱點(diǎn)之一。桑黃液體發(fā)酵生產(chǎn)菌絲體和胞外多糖,可高效獲取活性物質(zhì),此類(lèi)研究主要集中于優(yōu)化營(yíng)養(yǎng)條件和環(huán)境因素?？拱┲骰钚晕镔|(zhì)桑黃多糖,液體發(fā)酵的胞外多糖具有降血糖的作用。王秋穎實(shí)驗(yàn)室研究表明,以菌絲產(chǎn)量和胞外多糖產(chǎn)量為指標(biāo),火木層孔菌SA-1在氮源含量為0.5%、碳源含量為4.5%時(shí)生長(zhǎng)狀況最佳。鮑氏針層孔菌的液體發(fā)酵最優(yōu)條件是:6%接種量、起始pH6.0、發(fā)酵溫度28℃,適宜碳氮比在22∶1至30∶1之間,碳源是40g/L葡萄糖,氮源是6g/L大豆蛋白胨,無(wú)機(jī)鹽是ZnSO4·7H20,液體發(fā)酵9天生物量最高,11天胞外多糖產(chǎn)量最高,培養(yǎng)基裝液量為100mL/500mL。5L發(fā)酵罐優(yōu)化的培養(yǎng)條件:溫度28℃,通氣量0.40vvm,攪拌轉(zhuǎn)速60r/min,裝液量2.5L,發(fā)酵7天后,菌絲體生物量為3.59g/L,胞外多搪含量為6.4g/L,胞外總黃酮含量106.3μg/mL。這些都為實(shí)現(xiàn)“桑黃”工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)提供了重要依據(jù)。鐘石等以菌絲體干重為指標(biāo),優(yōu)化野生桑黃液體發(fā)酵培養(yǎng)基為麥芽糖3%,酵母粉2%,MgSO40.15%,KH2PO40.10%,檸檬酸三銨0.10%,復(fù)合維生素B0.01%,0.3%桑枝水提物。6桑黃的發(fā)現(xiàn)和鑒定桑黃及藥用功效在我國(guó)源遠(yuǎn)流長(zhǎng),卻因天然子實(shí)體罕見(jiàn),類(lèi)似物眾多而成為傳奇,遠(yuǎn)不如靈芝、蟲(chóng)草、茯苓等藥用真菌廣泛開(kāi)發(fā)利用,而卻在日本、韓國(guó)受到重視。隨著生物技術(shù)發(fā)展,桑黃真身顯露,栽培條件和發(fā)酵技術(shù)日益成熟,生物活性成分及藥理研究資料日漸深入