電針對(duì)卵巢大鼠行為學(xué)及血漿雌二醇及下丘腦室旁核表達(dá)的影響

電針對(duì)卵巢大鼠行為學(xué)及血漿雌二醇及下丘腦室旁核表達(dá)的影響

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，雌激素對(duì)情緒調(diào)節(jié)有重要影響。下降水平與產(chǎn)后抑郁和更年期后抑郁密切相關(guān)。研究表明,電針可以通過調(diào)整下丘腦軸異常功能,預(yù)防和改善圍絕經(jīng)期綜合征的癥狀。提示電針可能通過調(diào)節(jié)體內(nèi)雌激素水平來調(diào)整下丘腦軸,改善圍絕經(jīng)期抑郁。為此,我們以去勢(shì)雌性大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,觀察電針干預(yù)后大鼠在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中的行為學(xué)改變和對(duì)大鼠血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、促黃體生成素(LH)及下丘腦室旁核c-fos表達(dá)的的影響,探討電針的抗抑郁效應(yīng)及其機(jī)制。材料和方法1.動(dòng)物和群體結(jié)果1.去勢(shì)大鼠fst行為改變2.大鼠血清e(cuò)2、fsh和lh水平的變化3.大鼠大腦側(cè)c-fos的發(fā)現(xiàn)電針抗抑郁作用的提出早在20世紀(jì),ManfredBleuler就提出內(nèi)分泌抑郁這一概念,認(rèn)為內(nèi)分泌系統(tǒng)與精神疾病間存在某些因果關(guān)系。女性比男性抑郁的患病率高,特別易發(fā)生在激素水平變化的時(shí)期,提示圍絕經(jīng)期激素水平變化可能在抑郁障礙的發(fā)生中起一定作用,抑郁癥與雌激素水平下降有明顯的相關(guān)性。雌激素對(duì)中樞神經(jīng)遞質(zhì)具有多種作用,可影響人類各種心理活動(dòng),包括認(rèn)知、心境、性欲以及攻擊行為,可調(diào)節(jié)心境和行為,有促進(jìn)良性情緒的作用。Freeman等研究發(fā)現(xiàn)在絕經(jīng)過渡期抑郁癥發(fā)病率上升,絕經(jīng)后下降,經(jīng)二變量分析顯示雌激素水平與抑郁癥狀顯著相關(guān),提示雌激素水平降低是抑郁癥發(fā)生的危險(xiǎn)因素。強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)(forcedswimmingtest,FST),也稱行為絕望實(shí)驗(yàn)或Porsolt實(shí)驗(yàn)。FST的基本原理是利用動(dòng)物不能逃出惡劣環(huán)境,以致行為絕望而設(shè)計(jì)出的一種模型,即動(dòng)物在強(qiáng)迫游泳應(yīng)激條件下,經(jīng)掙扎后可出現(xiàn)絕望表現(xiàn)即不動(dòng)狀態(tài)。其理論依據(jù)與人類抑郁癥中慢性、低水平的應(yīng)激源導(dǎo)致抑郁癥的發(fā)生并加速抑郁癥發(fā)展的機(jī)理更接近。FST作為一種研究抑郁癥的負(fù)性心理應(yīng)激動(dòng)物模型,已被廣泛應(yīng)用于抗抑郁藥物的篩選。本研究發(fā)現(xiàn),切除卵巢后,大鼠在強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)中不動(dòng)時(shí)間明顯增加、掙扎時(shí)間減少,有明顯的抑郁傾向;電針和美雌醇治療后,強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中,大鼠不動(dòng)時(shí)間明顯減少,掙扎時(shí)間增加,顯示電針能夠改善去勢(shì)大鼠抑郁行為。研究顯示,針刺治療圍絕經(jīng)期抑郁癥有較好的療效,且不良反應(yīng)少,安全性高。本實(shí)驗(yàn)所選穴位中,三陰交為足太陰脾經(jīng)腧穴,是足三陰經(jīng)交會(huì)穴,沖任帶三脈與肝脾腎關(guān)系密切,取之可調(diào)補(bǔ)沖任、疏肝理脾、補(bǔ)益肝脾腎3臟。內(nèi)關(guān)為心包經(jīng)之絡(luò)穴,取之可調(diào)理心神。兩穴合用共同起到疏肝解郁,補(bǔ)腎健脾,調(diào)神醒腦之功效。下丘腦-垂體軸是調(diào)節(jié)女性生殖功能的重要支柱。女性進(jìn)入更年期婦女血漿E2水平逐漸下降,FSH、LH開始增高,絕經(jīng)期婦女血清FSH、LH明顯增高。新近研究發(fā)現(xiàn),下丘腦-垂體-腎上腺軸(HPA)與下丘腦-垂體-性腺軸(HPG)的相互作用參與了抑郁癥的發(fā)病。本研究顯示,大鼠切除卵巢后,血漿E2水平明顯降低,FSH、LH水平明顯升高,行為學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示有明顯抑郁傾向。電針三陰交、內(nèi)關(guān)干預(yù),可改善去勢(shì)大鼠抑郁行為,顯著提高血漿E2的水平,降低血漿FSH和LH水平,同時(shí)可誘導(dǎo)大鼠下丘腦室旁核c-fos蛋白的顯著表達(dá)。筆者認(rèn)為電針抗抑郁效應(yīng)可能是通過調(diào)整下丘腦-垂體軸功能紊亂實(shí)現(xiàn)的,更深入的機(jī)制環(huán)節(jié)有待進(jìn)一步研究證實(shí)。2-3月齡SPF級(jí)雌性SD大鼠40只,體質(zhì)量220-300g,由安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,許可證號(hào):<皖>2005-001。分籠標(biāo)準(zhǔn)飼料,飲用涼白開水,室溫20℃-25℃。隨機(jī)分成正常對(duì)照組(N)、去勢(shì)組(OVX)、電針組(APU)及美雌醇組(E),每組10只。2.免疫探索及儀器美雌醇(ethynylestradiol-3-methylether,ESigma-Aldrich);兔抗c-fos單克隆抗體及DAB試劑盒(博士德生物有限公司);E2、LH和FSH放射免疫分析試劑盒(北京北方生物研究所);G6805-2A型低頻電子脈沖治療儀(上海華誼);冷凍切片機(jī)(Leica1900);OlympusBX51顯微鏡;捷達(dá)JD-801形態(tài)學(xué)顯微圖像分析系統(tǒng)。3.阿斯塔納的雙側(cè)前穴位電針apu10%水合氯醛(0.35mL/100g)腹腔注射麻醉后,大鼠背位固定,下腹部正中線距外陰1cm處,剪除長(zhǎng)毛,常規(guī)消毒,切開皮膚和腹肌約1.5cm,分離組織,行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)。2周后,參照林文注《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的針灸穴位方法及擬人比較法,APU組電針雙側(cè)內(nèi)關(guān)、三陰交穴位。使用G6805-2A型電針儀,電流3mA,疏密波型,頻率15Hz,強(qiáng)度以局部皮膚肌肉輕微顫動(dòng)為宜,1次/d,每次15min,持續(xù)2周。E組用Sesameoil配制成0.1mg/mL的美雌醇溶液,腹腔注射1mg/kg,1次/d,持續(xù)2周。N組及OVX組正常喂養(yǎng)。4.民模和鼠籠制備安靜狀態(tài)下,將各組大鼠第1次分別置于水溫24℃-25℃、水深30cm、直徑25cm、高度60cm的圓柱形筒內(nèi),使其游泳15min,并準(zhǔn)確記錄每只大鼠的開始游泳時(shí)間。游泳結(jié)束后,用毛巾將鼠毛擦干,置30℃的環(huán)境內(nèi)30min后放入鼠籠。第2次(24h)后,在同樣時(shí)間同樣條件下讓大鼠第2次游泳5min。以s為單位測(cè)定5min內(nèi)所呈現(xiàn)的3種不同狀態(tài)的時(shí)間數(shù):不動(dòng)時(shí)間(大鼠在水中停止掙扎呈直立漂浮狀態(tài),或僅有偶爾的肢體運(yùn)動(dòng)以保持頭部浮在水面的持續(xù)時(shí)間總和,immobility,IMM);掙扎時(shí)間(大鼠俯沖、前肢拍打水面及抓爬筒壁的時(shí)間總和,struggling,STR);游泳時(shí)間(大鼠圍筒主動(dòng)游泳的時(shí)間總和,swimming,SWI)。5.腦室旁核c-fos表達(dá)放射免疫方法檢測(cè)血漿E2、FSH、LH水平。下丘腦室旁核c-fos表達(dá)采用SABC法,嚴(yán)格按試劑盒說明操作,DAB顯色。陰性對(duì)照以PBS代替一抗。6.對(duì)大鼠血清c-fos的影響c-fos表達(dá)的結(jié)果采用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析,每只大鼠選取3張切片,分別計(jì)算每張切片中下丘腦室旁核c-fos免疫活性物質(zhì)陽性細(xì)胞數(shù)。統(tǒng)計(jì)資料用表示,采用t檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,SPSS17.0forwindows軟件分析。由表1可知,OVX組與N組比,不動(dòng)時(shí)間明顯較長(zhǎng),掙扎時(shí)間明顯較短;與OVX組相比,APU組及E組均可使大鼠的不動(dòng)時(shí)間明顯縮短,掙扎時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.05,P<0.01)。由表2可知,OVX組與N組比,E2水平明顯降低,FSH及LH的水平明顯升高;與OVX組相比,APU及E組均可使