乙肝病毒DNA的實(shí)驗(yàn)室檢測

LOREMIPSUMDOLOR乙肝病毒DNA的實(shí)驗(yàn)室檢測袁立云1、熒光定量PCR技術(shù)2、乙肝病毒的感染3、HBV-DNA與臨床熒光定量PCR技術(shù)熒光定量PCR技術(shù)Polymerasechainreaction(PCR)，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一種DNA的快速擴(kuò)增技術(shù)。PCR技術(shù)通過兩個短的稱為引物的DNA小片段和一種耐熱酶（TaqDNA聚合酶）的作用，經(jīng)過高溫變性、低溫退火、適溫延伸三個步驟在3個小時(shí)內(nèi)反復(fù)循環(huán)25-30次，把特定的DNA片段擴(kuò)增1000萬倍。每個PCR體系含4種主要成分：含有待擴(kuò)增序列的DNA模板、引物、TaqDNA聚合酶、脫氧核糖核酸三磷酸（dNTP）

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在反應(yīng)體系中加入熒光標(biāo)記，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)檢測整個PCR過程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對PCR終產(chǎn)物的分析，最終實(shí)現(xiàn)對未知的起始模版進(jìn)行定量分析的一種技術(shù)，是迄今對已知基因序列的核酸測定中最靈敏的方法。熒光定量PCR技術(shù)PCR反應(yīng)過程5’5’3’3’d.NTPsTaq酶Primers5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’反應(yīng)組分變性5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’延伸5’3’5’3’5’3’5’3’3’5’3’TaqTaq5’5’重復(fù)退火5’3’5’3’5’3’5’3’5’5’3’3’5’3’5’3’循環(huán)24個拷貝循環(huán)38個拷貝5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’3’5’5’3’5’3’5’3’5’3’熒光定量PCR原理插入染料法

SYBRGreenI雜交探針法(最常用)

TaqManTaqMan探針5’5’3’3’d.NTPsTaq酶Primers5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’反應(yīng)體系變性5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’Taql5’3’RQProbe5’3’RQ5’3’5’3’5’3’RQ退火5’3’1.鏈取代Taq3’QR5’5’3’3’QTaqR5’2.水解3.聚合5’3’QTaqR3’5’4.檢測熒光5’3’3’QTaqR5’l乙肝病毒的感染乙肝病毒的感染

（一）乙型肝炎病毒結(jié)構(gòu)及特點(diǎn)HBsAg：是HBV感染的主要標(biāo)志HBsAb：保護(hù)性抗體HBcAg：僅存于感染的肝細(xì)胞核內(nèi)，一般不存在于血循環(huán)中HBcAb:非保護(hù)性抗體，HBcAb-IgM提示HBV處于復(fù)制狀態(tài)HBeAg：HBV復(fù)制及強(qiáng)感染性的指標(biāo)HBeAb：有一定的保護(hù)作用，預(yù)后良好乙肝病毒的感染（二）HBV-DNA與“兩對半”1.“兩對半”：機(jī)體的免疫反應(yīng)狀態(tài)；2.“攜帶者”、“大三陽”、“小三陽”等免疫學(xué)指標(biāo)不能反應(yīng)體內(nèi)病毒復(fù)制水平與感染程度。FQ-PCR：檢測的是HBV本身的遺傳物質(zhì)—DNA，是病毒存在和復(fù)制的最可靠、最直接的指標(biāo)。HBsAg(－)

HBV-DNA(＋)

HBeAg(－)HBV-DNA(＋)3.血清學(xué)指標(biāo)(－)不能排除HBV感染。乙肝病毒的感染5.HBeAg陽性標(biāo)本HBVDNA檢出率90％左右

HBeAg與HBVDNA有著良好的相關(guān)性4.也可能出現(xiàn)H