鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵實驗報告

年級：2010級系：XX醫(yī)學班：1班組：1組姓名：XXXxxxxxxxxxx實驗一鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵實驗目的和要求1．掌握紫外可見分光光度計的基本操作；2．掌握鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵的原理和方法3．掌握吸收曲線繪制及最大吸收波長選擇；4．掌握標準曲線繪制及應用。實驗原理鄰二氮菲（1,10—鄰二氮雜菲）是一種有機配位劑，可與Fe2+形成紅色配位離子:Fe2++3Fe3Fe2++3Fe3在pH=3?9范圍內，該反應能夠迅速完成，生成的紅色配位離子在510nm波長附近有一吸收峰，摩爾吸收系數為1.1X10-4，反應十分靈敏，Fe2+濃度與吸光度符合光吸收定律,適合于微量鐵的測定。實驗中，老師我們又見面了采用pH=4.5?5的緩沖溶液保持標準系列溶液及樣品溶液的酸度;采用鹽酸羥胺還原標準儲備液及樣品溶液中的Fe3+并防止測定過程中Fe2+被空氣氧化。實驗儀器與試劑1．752S型分光光度計2?標準鐵儲備溶液（1.00X10-mol/L）3．鄰二氮菲溶液（0.15%，新鮮配制）鹽酸羥胺溶液（10%，新鮮配制）NaAC緩沖溶液50ml容量瓶7個1cm玻璃比色皿2個鐵樣品溶液實驗步驟標準系列溶液及樣品溶液配制，按照下表配制鐵標準系列溶液及樣品溶液。

年級：2010級系：XX醫(yī)學班：1班 組：1組姓名：XXXxxxxxxxxxx編號1234567(鐵樣品溶液)1.00X10-3mol/L標準鐵溶液0.00ml1.00ml2.00ml3.00ml4.00ml5.00ml2.50ml10%鹽酸羥胺溶液1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml0.15%鄰二氮菲溶液5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00mlNaAC緩沖溶液5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml說明以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度并搖勻。系列標準溶液濃度(mol/L)02x10-54x10-56x10-58x10-51x10-4吸收曲線繪制用1cm比色皿，以1號溶液作為參比溶液，測定4號溶液在各個波長處的吸光度，繪制吸收曲線，并找出最大吸收波長。測定波長480nm482nm484nm486nm488nm490nm492nm494nm496nm498nm吸光度0.6270.6280.6300.6320.6340.6360.6380.6450.6510.657測定波長500nm502nm504nm506nm508nm510nm512nm514nm516nm518nm吸光度0.6600.6660.6730.6790.6820.6840.6850.6780.6690.661測定波長520nm522nm524nm526nm528nm530nm532nm534nm536nm538nm吸光度0.6450.6160.5910.5660.5380.5060.4710.4360.3950.356選擇的最大吸收波長為：Amax=512nm繪制吸收曲線如下：不同波長吸光度曲線標準曲線制作

年級：2010級系：XX醫(yī)學班：1班 組：1組姓名：XXXxxxxxxxxxx— 測定2至7號溶液的吸光度，平行測定3次，計算吸光度平均值，繪制標準曲線。編號234567(樣品溶液)吸光度A10.2330.4600.6850.9121.1280.533和*Ar*rJ*J尸P-Jf*.?■rJIF5，-4F-J3jF?$尹P-J標準曲線21190.80.70.60.50.40.30.22XE—53XE—54XE—55XE—56XE—57XE—58XE—59XE—5IXE-4濃度(mol/L)E-4實驗數據處理7樣品溶液4.65x10-5mol/ml1、樣品中鐵的計算C=CX50.00X讀取值2.50

Cx=4.65X10-5X50.00/2.50=9.30X10-4mol/L2、 摩爾吸光系數計算在標準曲線的直線部分選擇量兩點，讀取對應的坐標值，計算鄰二氮菲配位物在最大吸收波長出的摩爾吸光系數：A-A8—―2 1c-c218=(0.460-0.233)/(0.00006-0.00004)=2.00X10-5年級：2010級系：XX醫(yī)學班：1班 組：1組姓名：XXXxxxxxxxxxx 實驗注意事項1、 測定系列標準溶液和樣品溶液時，必須使用同一只比色皿。2、 比色皿放入分光光度計樣品室前，必須使用吸水紙將外表面擦拭干凈。3、比色皿在換裝不同濃度溶液時，必須使用待測溶液潤洗至少三次。4、在比色皿未放入分光光度計測定光路時，必須將樣品室艙打開。討論及思考1．如果繪制你的標準曲線線性不好或者標準曲線有部分發(fā)生偏離，請分析原因。答：標準曲線部分偏離的原因可能是：（1）我感覺的數據如果有問題主要是感覺分光光度計不夠精確，使用旋鈕每次旋出相同的測定數值可能都不一樣，有時小范圍內甚至可能發(fā)生往大