牛結(jié)核病防治技術(shù)

牛結(jié)核病防治技術(shù)

牛結(jié)核病主要是由牛型結(jié)核分枝桿菌引起的一種人獸共患的慢性傳染病。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為B類動物疫病，我國將其列為二類動物疫病。1危害經(jīng)濟(jì)損失巨大例如患病奶牛的壽命要比健康牛短得多，產(chǎn)奶量顯著減少，常常不能懷孕。如果該病未能控制，其病死率可達(dá)10％－20％。在執(zhí)行本病的防治措施是要花費(fèi)很大的人力和物力。結(jié)核病牛也往往是人感染結(jié)核病的重要傳染源。結(jié)核病的分布結(jié)核病曾經(jīng)廣泛流行于世界各地，尤以奶牛業(yè)發(fā)達(dá)國家為嚴(yán)重。盡管各國政府都十分重視對結(jié)核病的防治，一些國家亦在該病的控制方面取得了很大的成就，有效地控制甚至消滅了此病，但更多的國家依然呈現(xiàn)地區(qū)流行或散發(fā)流行。

2診斷流行病學(xué)癥狀病理變化病原檢測免疫學(xué)試驗(yàn)傳染原：牛型結(jié)核桿菌人型結(jié)核桿菌禽型結(jié)核桿菌牛型結(jié)核桿菌亦能感染人、豬及其他家畜。本病依據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化可做出初步診斷。確診需進(jìn)一步做病原分離鑒定或免疫學(xué)診斷。2.1流行特點(diǎn)本病奶牛最易感，其次為水牛、黃牛、牦牛。人也可感染。結(jié)核病病牛是本病的主要傳染源。牛型結(jié)核分枝桿菌隨鼻汁、痰液、糞便和乳汁等排出體外，健康?？赏ㄟ^被污染的空氣、飼料、飲水等經(jīng)呼吸道、消化道等途徑感染。2診斷2.2臨床癥狀：

潛伏期一般為10～45天，有的可長達(dá)數(shù)月或數(shù)年。通常呈慢性經(jīng)過。臨床以肺結(jié)核、乳房結(jié)核和腸結(jié)核最為常見。咳嗽

病牛常發(fā)的為肺結(jié)核，易疲勞，常有短而干的咳嗽，尤其當(dāng)起立、運(yùn)動、吸入冷空氣或塵埃時隨后咳嗽加重，頻繁且表現(xiàn)痛苦。呼吸次數(shù)增多或發(fā)生氣喘。消瘦

病畜日漸消瘦，貧血，有的牛肩前、股前、腹股溝、頜下、咽及頸淋巴結(jié)等體表淋巴結(jié)腫大。當(dāng)縱膈淋巴結(jié)受侵害腫大，壓迫食道，則有慢性脹氣癥狀。病勢惡化，可能發(fā)生全身性結(jié)核，即粟粒性結(jié)核。胸膜、腹膜發(fā)生結(jié)核病灶時呈現(xiàn)所謂的“珍珠病”，胸部聽診可聽到摩擦音。

乳房感染多數(shù)病牛乳房常被感染侵害，可見乳房上淋巴結(jié)腫大無熱無痛，泌乳量減少，乳汁初期無變化，病重時呈水樣稀薄。

頑固性下痢腸道結(jié)核多見于犢牛，可表現(xiàn)為消化不良，食欲不振，頑固性下痢，迅速消瘦。性機(jī)能紊亂生殖器官結(jié)核可出現(xiàn)性機(jī)能紊亂，發(fā)情頻繁且表現(xiàn)性欲亢進(jìn)，慕雄狂與不孕。孕畜流產(chǎn)，公畜副睪及睪丸腫大，陰莖前部可發(fā)生結(jié)節(jié)、糜爛等。

神經(jīng)癥狀中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要是腦及腦膜發(fā)生結(jié)核病變，常引起神經(jīng)癥狀，如癲癇樣發(fā)作、運(yùn)動障礙等。肺結(jié)核：以長期頑固性干咳為特征，且以清晨最為明顯?；夹笕菀灼冢饾u消瘦，病情嚴(yán)重者可見呼吸困難。乳房結(jié)核：一般先是乳房淋巴結(jié)腫大，繼而后方乳腺區(qū)發(fā)生局限性或彌漫性硬結(jié)，硬結(jié)無熱無痛，表面凹凸不平。泌乳量下降，乳汁變稀，嚴(yán)重時乳腺萎縮，泌乳停止。

腸結(jié)核：消瘦,持續(xù)下痢與便秘交替出現(xiàn)，糞便常帶血或膿汁。乳房感染2診斷2.3病理變化：在肺臟、乳房和胃腸粘膜等處形成特異性白色或黃白色結(jié)節(jié)。結(jié)節(jié)大小不一，切面干酪樣壞死或鈣化，有時壞死組織溶解和軟化，排出后形成空洞。胸膜和肺膜可發(fā)生密集的結(jié)核結(jié)節(jié)，形如珍珠狀。禽型結(jié)核分枝桿菌感染可能無臨床癥狀，但亦可能出現(xiàn)昏睡和消瘦。在應(yīng)激條件下，可能發(fā)生突然死亡，這往往與嚴(yán)重的肝臟病變有關(guān)，象這樣的病變在死后解剖時容易觀察到。禽型結(jié)核分枝桿菌能引起人的一種漸進(jìn)性的難以治療的疾病。因此所有操作均須在有充分生物防護(hù)裝置的條件下進(jìn)行。人型結(jié)核分枝桿菌感染除靈長類動物會出現(xiàn)咳嗽等癥狀外，其他動物一般無明顯臨床癥狀。大體解剖觀察牛型結(jié)核分枝桿菌感染病變可發(fā)生在所有內(nèi)臟器管最常見的是肺、胸膜、腸系膜淋巴結(jié)。感染早期，可在肺門部位及肺門淋巴結(jié)見到干酪樣壞死或鈣化的病灶。感染中后期，可在胸膜、胸腔見到“珍珠狀”增生，形成所謂的“珍珠胸”。在腸系膜可見到串珠狀淋巴結(jié)腫大。禽型結(jié)核分枝桿菌感染主要表現(xiàn)為肺、肝、脾的粟粒狀結(jié)核病變，肝脾顯著腫大，表面及組織內(nèi)可見到大小似小米、顏色為灰黃色的化膿斑點(diǎn)。人型結(jié)核分枝桿菌感染可見干酪樣壞死或鈣化的病灶。病變可發(fā)生在所有內(nèi)臟器官，漿膜表面，特別是胸膜，骨及關(guān)節(jié)。最常發(fā)生在肺、支氣管、縱隔及咽喉淋巴結(jié)、乳腺、肝、脾及腸。早期的病變包括在咽喉、支氣管縱隔，以及偶爾可見的腸系膜等淋巴結(jié)的干酪樣及鈣化肉芽腫，其大小從針尖大到榛實(shí)大，偶爾有蒂。粟粒狀結(jié)核病變的大小似小米，在肺、肝、脾以及其它器官可大量發(fā)現(xiàn)，其顏色為灰黃色。病理學(xué)診斷在巨噬細(xì)胞內(nèi)繁殖結(jié)核桿菌侵入機(jī)體后，易被巨噬細(xì)胞吞噬，但在某些情況下不被殺死，而且能在巨噬細(xì)胞內(nèi)繁殖并沿淋巴管蔓延。原發(fā)性結(jié)節(jié)局部病變主要是由該菌的直接作用形成特異性原發(fā)性病灶――原發(fā)性結(jié)節(jié)。當(dāng)動物機(jī)體抵抗力強(qiáng)，則原發(fā)性病灶囊化，形成瘢痕或鈣化而痊愈。當(dāng)動物抵抗力弱時，病菌可從淋巴、血管和天然管道三條途徑散布全身，引起其他組織器官的結(jié)核病灶或全身性結(jié)核（粟粒性結(jié)核病）。組織病理變化病理學(xué)特點(diǎn)在器官組織發(fā)生以增生性或滲出性炎，或兩者混合存在。增生性結(jié)核結(jié)節(jié)動物機(jī)體抵抗力強(qiáng)時，機(jī)體對結(jié)核菌的反應(yīng)以細(xì)胞增生為主，形成增生性結(jié)核結(jié)節(jié)，由類上皮細(xì)胞，和巨噬細(xì)胞集結(jié)在結(jié)核菌周圍，構(gòu)成特異性肉芽腫，外圍是一層密集的淋巴細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，形成非特異性肉芽組織。器官原有輪廓被破壞。滲出性結(jié)核當(dāng)機(jī)體抵抗力降低時，機(jī)體的反應(yīng)則以滲出性炎為主，即在組織中有纖維蛋白和淋巴細(xì)胞的彌漫性沉積。后發(fā)生干酪樣壞死，化膿或鈣化，這種變化主要見于肺和淋巴結(jié)。滲出性結(jié)核的干酪樣壞死保存了一般組織的結(jié)構(gòu)，而在增生性病灶中。需要指出的是由上皮樣及巨細(xì)胞組成的結(jié)節(jié)是不夠作確診結(jié)核病用的，因?yàn)樵摬∽儾皇墙Y(jié)論性的，尚需揭示出病原的存在。結(jié)核菌素反應(yīng)與病變牛結(jié)核菌素陽性反應(yīng)，但剖檢時找不到病變。當(dāng)牛結(jié)核病在牛群中嚴(yán)重流行時，遇到這種情況不多。但對于牛結(jié)核病清凈的牛群，這種情況就比較常見了。無病變的牛結(jié)核菌素陽性反應(yīng)是不是完全屬于非特異性反這種情況很難作出明確診斷，因?yàn)橛行┡ｋm然感染牛型結(jié)核分枝桿菌，但病變很少或不明顯，解剖時不易發(fā)現(xiàn). 2診斷2.4實(shí)驗(yàn)室診斷2.4.1病原分離鑒定采集病牛的病灶、痰、尿、糞便、乳及其它分泌物樣品，作抹片或集菌處理（見附件）后抹片，用抗酸染色法染色鏡檢，并進(jìn)行病原分離培養(yǎng)和動物接種等試驗(yàn)。病料淋巴結(jié)痰乳精液子宮分泌物尿和糞便樣品運(yùn)送樣品應(yīng)封裝在無菌的容器內(nèi)冷藏運(yùn)送。對那些提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)陽性，但尸檢時無病理學(xué)病變的動物，可從下頜、咽后、支氣管、肺（特別是肺門及肺門淋巴結(jié)）、縱隔及一些腸系膜的淋巴結(jié)采集樣品送檢。病原牛結(jié)核分枝桿菌屬于分枝桿菌屬哺乳動物結(jié)核桿菌種牛型結(jié)核桿菌亞種。結(jié)核分枝桿菌也可感染牛極少數(shù)情況下，禽結(jié)核分枝桿菌也可感染牛。病原檢測染色鏡檢培養(yǎng)特性動物試驗(yàn)生化試驗(yàn)分子生物學(xué)診斷染色鏡檢涂片先在玻片上涂布一層薄甘油蛋白，甘油蛋白的配制：雞蛋白20mL，甘油20mL，水楊酸鈉0.4g，混勻。如檢驗(yàn)標(biāo)本為乳汁等含脂肪較多的材料，在涂片制成后，用二甲苯或乙醚脫脂1－2分鐘后傾去，再滴加95％酒精以除去二甲苯，待酒精揮發(fā)后即可染色。然后吸取標(biāo)本滴加其上，涂布均勻。萋－尼氏抗酸染色涂片后，經(jīng)火焰固定加石炭酸復(fù)紅染色液用100mL95％酒精加3g堿性復(fù)紅配制成堿性復(fù)紅飽和酒精溶液，取堿性復(fù)紅飽和酒精溶液10mL，與5％苯酚溶液90mL混合后用濾紙濾過將玻片在火焰上加熱至出現(xiàn)蒸汽（不能產(chǎn)生氣泡），如此熱染5分鐘（如染色液干涸，須加適量補(bǔ)充）。水洗后滴加3％鹽酸酒精脫色30－60秒（至無色素脫下為止）濃鹽酸3mL，95％酒精97mL，混勻。水洗后，以駱氏美蘭染色液復(fù)染1分鐘。甲液：美蘭0.3g，95％酒精30mL。乙液：0.01％氫氧化鉀溶液100mL?；旌霞闯伤矗?，鏡檢?？顾峋鷳?yīng)不被鹽酸酒精脫色而染成紅色，其他細(xì)菌與動物細(xì)胞可被鹽酸酒精脫色而均被染成蘭色。菌體形態(tài)牛結(jié)核分枝桿菌呈細(xì)長平直或微彎曲的桿菌，長1.5-5微米，寬0.2-0.5微米.在陳舊培養(yǎng)基上或干酪性淋巴結(jié)內(nèi)的菌體，偶而可見長達(dá)10微米或更長培養(yǎng)將經(jīng)過處理的被檢樣品標(biāo)本接種到培養(yǎng)基上（同時作2－4份）培養(yǎng)一天后，以熔化的石蠟封口，繼續(xù)培養(yǎng)。

牛型結(jié)核分枝桿菌生長緩慢，初次分離培養(yǎng)時，需36－37℃培養(yǎng)5－8周方可出現(xiàn)菌落。在固體培養(yǎng)基上不產(chǎn)生任何顏色，菌落濕潤、略顯粗糙并發(fā)脆。加1％的丙酮酸鈉能促進(jìn)生長。若是非典型分枝桿菌，則生長較快，大部分（但不是全部）產(chǎn)生白色或具有橙色或黃色色素，常形成黃色或橙色菌落。某些種類的色素只有在亮處才顯出。試驗(yàn)動物豚鼠兔雞牛型結(jié)核分枝桿菌易感