氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定甲基苯丙胺咖啡因氯胺酮

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定甲基苯丙胺咖啡因氯胺酮

近年來，從傳統(tǒng)的石油麻醉藥物轉(zhuǎn)變?yōu)榫袼幬?，如中樞神?jīng)抑制劑、致動(dòng)劑、鎮(zhèn)靜劑和催眠藥。你有各種各樣的東西，你可以增加數(shù)量。為了提高藥效、減少毒品的不良作用及降低成本,毒品制造者常將多種類別的藥物摻加到一起。如有些“搖頭丸”中,除了含有甲基苯丙胺、3,4-亞甲基二氧基甲基苯丙胺外,其他成分還有咖啡因、氯胺酮、非那西汀、安定等。最近出現(xiàn)的冰毒片劑“麻古”片中除了主要成分甲基苯丙胺外,還添加有咖啡因、氯胺酮、偽麻黃堿等。本實(shí)驗(yàn)考察了不同pH條件下甲基苯丙胺、咖啡因和氯胺酮混合樣品的提取回收率和經(jīng)三氟乙酸酐衍生化的檢測(cè)效果,建立了這三種藥物混合濫用的GC/MS定性定量方法,可為甲基苯丙胺、咖啡因、氯胺酮混合濫用中毒的法醫(yī)學(xué)鑒定及毒品鑒別等禁毒緝毒工作提供科學(xué)依據(jù)。1回收率試驗(yàn)1.1儀器與材料TRACEDSQ氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC/MS,美國(guó)Finnigan公司);DL-5型低速大容量離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);華普達(dá)HY-3多功能振蕩器(常州市華普達(dá)教學(xué)儀器有限公司);QL-901渦旋混合器(江蘇海門市麟麒醫(yī)用儀器廠)。甲基苯丙胺、咖啡因、氯胺酮標(biāo)準(zhǔn)品(購(gòu)自北京公安部二所),分別配置成1mg/ml的乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液;乙醚,乙酸乙酯為分析純。三氟乙酸酐(trifluoroaceticanhydrideTFA),購(gòu)于Sigma公司。0.5%NaOH溶液。1.2方法1.2.1樣品的制備和提取取1ml空白兔血置于10ml具塞離心試管中,加1ml蒸餾水稀釋,分別添加甲基苯丙胺、咖啡因和氯胺酮三種標(biāo)準(zhǔn)溶液各10μl,加0.5%NaOH溶液調(diào)至pH=9,pH=11及pH=13。乙醚5ml提取2次,振蕩混勻,1500r/min離心15min,取有機(jī)層,合并兩次乙醚萃取液,加入酸性甲醇液(MeOH∶HCl為20∶1)1滴,40℃水浴揮干。殘?jiān)尤胍宜嵋阴ズ蚑FA各25μl,封口膜密封后微波60%火力衍生2min,80℃水浴揮干。殘?jiān)?0μl無水乙醇定容,取1μl進(jìn)行氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用分析。以標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量,每種條件行五樣本分析,取均數(shù)比較。將測(cè)得值與實(shí)際值相比即可得絕對(duì)回收率。通過比較各種條件絕對(duì)回收率的高低,選出最合適的pH值。取1ml空白兔血置于10ml具塞離心試管中,加1ml蒸餾水稀釋,分別添加不同濃度(5μg,10μg,20μg)的甲基苯丙胺、咖啡因和氯胺酮標(biāo)準(zhǔn)溶液,加0.5%NaOH溶液調(diào)至上步選出的pH值。以標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量,每種條件行五樣本分析,取均數(shù)比較。將測(cè)得值與實(shí)際值相比即可得絕對(duì)回收率。1.2.2氣相色譜/質(zhì)譜條件和分析色譜柱:DB-5MS(0.25mm×30m×0.25μm)毛細(xì)管柱;載氣為高純氦氣,流速1.2ml/min;進(jìn)樣口溫度為250℃;柱溫:80℃1min,以20℃/min速度升高到180℃,保持8min,以30℃/min速度升高到280℃,保持2min;傳輸線溫度250℃;分流比為10∶1;電子轟擊電離源(EI),電子能量70eV,離子源溫度250℃。自動(dòng)調(diào)諧方式,發(fā)射電流強(qiáng)度100μA。掃描起始時(shí)間4min,掃描范圍50-650amu。以總離子流圖中各組分保留時(shí)間初步定性,并將質(zhì)譜圖與譜庫比較分析進(jìn)行確證,選擇離子掃描(SIM)和外標(biāo)一點(diǎn)法定量分析。2結(jié)果2.1衍生化前后甲基苯丙胺和氯胺酮的色譜圖和質(zhì)譜圖甲基苯丙胺、咖啡因、氯胺酮在選定的分析條件下分離良好。衍生化前甲基苯丙胺的保留時(shí)間為4.80min,咖啡因?yàn)?3.76min,氯胺酮為14.08min;衍生化后甲基苯丙胺的保留時(shí)間為6.43min,咖啡因和氯胺酮的保留時(shí)間同衍生化前,且分別與各標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的保留時(shí)間相同。甲基苯丙胺、咖啡因和氯胺酮標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜圖分別見圖1-4。定量分析選擇離子掃描時(shí)各組分的選擇離子分別為:甲基苯丙胺(58,91);衍生化后甲基苯丙胺(118,154);咖啡因(109,194);氯胺酮(180,209)。2.2衍生化的峰面積甲基苯丙胺、咖啡因和氯胺酮混合樣品有機(jī)溶劑提取物衍生化前后峰面積值見表1。經(jīng)SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行兩獨(dú)立樣本均數(shù)比較的t檢驗(yàn),可以認(rèn)為甲基苯丙胺衍生化前后峰面積有差別,衍生化后的峰面積遠(yuǎn)大于衍生化前的峰面積,還不能認(rèn)為咖啡因和氯胺酮衍生化前后峰面積有差別(P<0.05)。2.3提取回收率研究血液中各組分的提取回收率見表2和表3。3討論3.1提取回收率測(cè)定甲基苯丙胺屬于弱堿性有機(jī)胺,原體易揮發(fā),故在提取后的有機(jī)相中應(yīng)滴加酸性甲醇使其成鹽,以降低揮發(fā)損失。甲基苯丙胺、氯胺酮均為堿性物質(zhì),在堿性條件下提取回收率高;咖啡因?yàn)橹行晕镔|(zhì),在中性、酸性和堿性條件下均可提取出來。濫用“麻古”藥片者體內(nèi)可能同時(shí)存在甲基苯丙胺、氯胺酮和咖啡因這三種藥物,為了在有限的檢血中同時(shí)快速分析三種藥物,本實(shí)驗(yàn)選擇在堿性條件下進(jìn)行提取,考察三種不同pH值條件下藥物的提取回收率,選擇三種藥物回收率都較高的pH11為提取條件。3.2有機(jī)溶劑衍生化甲基苯丙胺分子中含有氨基,GC法測(cè)定時(shí)色譜行為不好,易脫尾,檢測(cè)時(shí)通常采用衍生化的方法以改善其色譜行為,提高檢測(cè)靈敏度。有機(jī)溶劑提取的混合藥物殘?jiān)?jīng)三氟乙酸酐衍生化后,甲基苯丙胺的峰面積遠(yuǎn)大于衍生化以前的峰面積,而氯胺酮和咖啡因衍生化前后峰面積差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從本實(shí)驗(yàn)可以得出,甲基苯丙胺、咖啡因和氯胺酮混合樣品分析時(shí),甲基苯丙胺的衍生化方法不影響氯胺酮和咖啡因的檢測(cè)。3.3程序升溫條件的確定甲基苯丙胺分子量小,極性較大,在弱極性的DB-5柱上保留時(shí)間短,故起始柱溫不宜過高?？Х纫蚺c氯胺酮保留時(shí)間相近,可能是由于其結(jié)構(gòu)中都含有酮基,而且沸點(diǎn)相近也可能是其影響因素。本實(shí)驗(yàn)對(duì)幾種程序升溫條件進(jìn)行了比較,建立了能達(dá)到最佳分離效果的色譜條件。由于咖啡因的沸點(diǎn)為178℃,在其附近180℃保留8min,直至咖啡因出峰,再快速升高溫