乳痛寧顆粒劑中揮發(fā)油的提取工藝研究

乳痛寧顆粒劑中揮發(fā)油的提取工藝研究

新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院的純中藥制劑，具有平肝健腎、活血化瘀、消瘀止痛的功效。長期以來，它對乳腺小葉增生也有顯著的治療效果。本實驗將此制劑改劑型為顆粒劑,按國家6-②類中藥新藥的要求研制。處方中當歸、川芎和香附子主要成分為揮發(fā)油,原工藝在煎煮過程中揮發(fā)油大量損失,影響功效,本實驗采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油,單因素考察得到最佳提取工藝;用β-環(huán)糊精(β-CYD)包合揮發(fā)油技術,采用正交試驗得到最佳包合工藝,旨在降低揮發(fā)油的損失?，F(xiàn)將實驗結果報道如下。1年版標準乳痛寧顆粒處方中當歸、川芎和香附子3種揮發(fā)油提取藥材均符合《中華人民共和國藥典》2000年版標準。β-CYD(蘇州味精總廠產(chǎn)品,純度為95%,19990225);無水硫酸鈉、石油醚、無水乙醇均為分析純;ML-902定時恒溫電力磁力攪拌器(上海浦江分析儀器廠);MAX/18KW全自動X射線衍射儀(日本馬克科學公司);揮發(fā)油測定儀(上海玻璃儀器廠)。2方法和結果2.1提取的提取2.1.1相對密度提取方法預試驗證明,當歸、川芎和香附子3種藥材混合揮發(fā)油在冷卻狀態(tài)下相對密度大于1.0g/cm3,在加熱狀態(tài)下相對密度小于1.0g/cm3,故在提取過程中采用藥典中的甲法裝置提取。按處方比例各稱取3種藥材粗粉(10目)適量,混和,浸泡一定時間,加一定量水回流提取至揮發(fā)油體積不再發(fā)生變化時,收集揮發(fā)油,用無水硫酸鈉脫水,得到橙黃色油,讀取揮發(fā)油體積,與所加藥材總量相比,即得收油率。2.1.2吸水率的測定按處方比例稱取3種藥材粗粉(10目)各50g,混合,分別加藥材量的10倍水,浸泡至透心,濾過(不擠壓),測得吸水率為145%(n=3)。2.1.3收油率的測定按處方比例稱取3種藥材粗粉(10目)各52g,混合,分別加藥材量的6、8、10、12、14、16、20、24倍水,提取揮發(fā)油12h,考察收油率。結果表明,加水量12倍時,其收油率占24倍加水量收油率的90%以上,為節(jié)約成本,故選擇加水量為12倍。2.1.4收油率試驗按處方比例稱取3種藥材粗粉(10目)各52g,混合,加12倍水,分別浸泡0、4、8、12、24h,提取揮發(fā)油12h,考察收油率。結果表明,浸泡時間對收油率沒有影響。2.1.5提取工藝的確定按處方比例稱取3種藥材粗粉(10目)各52g,共3份,混合,加12倍水,提取揮發(fā)油,記錄不同時間的收油量及累計收油率,結果見表1。結果表明,加12倍量水,提油8h時,其累計收油率占12h收油率的90%以上,從經(jīng)濟角度出發(fā),選擇提油時間為8h。通過以上單因素考察,確定當歸、川芎、香附子3種藥材揮發(fā)油提取最佳工藝為粉碎成粗粉(10目),加水12倍,提油8h。經(jīng)3批藥材提油驗證,平均收油率為0.81%,RSD為0.83%。2.2包合工藝的研究2.2.1包合物制備方法采用飽和水溶液法包合。精密稱取β-CYD4.00g,置于200ml具塞三角錐形瓶中,加入蒸餾水100ml,加熱使之完全溶解,降至所需溫度,在恒溫下攪拌。揮發(fā)油用無水乙醇(1∶2)稀釋后,用注射器緩慢滴加到環(huán)糊精溶液中,加塞,繼續(xù)攪拌至規(guī)定時間。放置在4℃冰箱中24h,快速抽濾后,用少量水多次沖洗,再用40～50℃的石油醚洗凈殘留的揮發(fā)油,干燥6h(40～50℃),得白色的粉末狀包合物,稱重,即得包合物實際量。2.2.2包合物中實際含油量的測定同藥典中的甲法。2.2.3評價指標試驗采用包合物收得率、揮發(fā)油包合率作為評價指標,設定其權重系數(shù)分別為0.3、0.7。計算公式如下:綜合評分=包合物收得率評分+揮發(fā)油包合率評分2.2.4因素水平的選擇根據(jù)文獻,認為揮發(fā)油和β-CYD的比例、包合溫度、包合時間為主要因素,根據(jù)實際條件分別對每個因素設計出5個水平,進行單因素試驗,以優(yōu)選3個水平。篩選出的試驗因素水平結果見表2。2.2.5正交試驗安排及結果采用正交試驗L9(3)4安排試驗各因素水平,具體試驗安排及結果見表3。由以上極差分析結果表明,各因素對試驗結果影響的程度依次為A>B>C,最佳包合工藝為A1B3C2。對其進一步進行方差分析,其結果見表4。以上方差分析表明,各因素對試驗結果影響的程度依次為A>B>C,A與B和C相比差異有統(tǒng)計學意義,A1優(yōu)于A2和A3,應選擇A1;由于因素C無影響,因此為降低成本,節(jié)省工時,則應選擇C1。綜合極差分析與方差分析,最佳包合工藝為A1B3C1,即β-CYD與揮發(fā)油比例為4g∶0.50ml,包合溫度為60℃,包合時間為1h。2.2.3驗證試驗按正交試驗篩選出的最佳工藝條件A1B3C1進行驗證,3批揮發(fā)油包含驗證結果與正交試驗結果相接近,包合物平均收得率為72.7%,RSD為1.8%;揮發(fā)油平均包合率為84.4%,RSD為1.5%。3c-fs-s-cyd包劑的物理結構驗證3.1衍射角ss試驗條件:銅靶/石墨單色器,掃描速度10.0deg/min,管壓40kV,管流150.0mA,狹縫:DS0.5deg/min,SS0.5deg/min,RS0.15mm,衍射角為0～40°。樣品分別為揮發(fā)油液體、β-CYD粉末、β-CYD揮發(fā)油包合物和β-CYD∶揮發(fā)油(1g∶0.50ml)混合物。3.2揮發(fā)油-cyd包合物的結構圖譜表明β-CYD揮發(fā)油物理混合物的衍射峰是揮發(fā)油和β-CYD2個單組分各峰的疊加,β-CYD揮發(fā)油物理混合物與β-CYD的圖譜基本相似,這可能是由于混合物中揮發(fā)油所占比例較小(12.5%)的緣故,而揮發(fā)油β-CYD包合物的衍射圖譜與前兩者有著明顯的差別,部分衍射峰生成或加強,而部分衍射峰消失或減弱,說明包合物已構成新的物相。4包合工藝的驗證試驗結果4.1本實驗采用飽和水溶液法進行包合,方法科學,工藝簡單,便于工業(yè)生產(chǎn)。此外,將β-CYD包合揮發(fā)油后,經(jīng)加速實驗(60℃恒溫48h),測其經(jīng)加速實驗后揮發(fā)油的剩余百分率,結果為包合的揮發(fā)油保留了60%,可見包合物較穩(wěn)定。4.2通過三因素三水平的正交試驗篩選最佳