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醫(yī)學細胞生物學設計型實驗

細胞核的分離和鑒定組員:實驗原理細胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)的比重和大小等都不相同,在同一離心場內(nèi)其沉降速度也不同,所以利用各細胞器在一定介質(zhì)中的沉降速度的差異,可采取離心的方法,將細胞器分離出來。細胞器沉降先后順序先后是細胞核、線粒體、溶酶體和其他微細胞核糖體和大分子。細胞核的比重和大小與其他組分不同,可將組織制成勻漿,在均勻的懸浮介質(zhì)用特定的離心、分離,然后進一步分析鑒定。勻漿:是指在低溫下,將組織塊放入勻漿器,加入等滲勻漿介質(zhì)進行研磨,破碎細胞,使之成為各種細胞器及其包含物的勻漿液。甲苯胺藍:堿性染料,甲苯胺藍中的陽離子有染色作用,可使細胞核呈藍色。操作流程斷頭處死小白鼠,手提尾部使腹內(nèi)血液盡量流出勻漿、過濾離心;2500r/min離心15min取材迅速開腹取肝,在盛有生理鹽水的小燒杯中洗滌,稱取約1g的肝組織放入燒杯加入8ml預冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化鈣溶液與燒杯中,將剪碎的肝組織倒入玻璃勻漿器,勻漿。用8層紗布過濾勻漿液與離心管中。涂片染色洗滌鏡檢取上清液制一張(標記1)。將原離心管中剩余上清液吹打沉淀成懸液,另制一張涂片(標記2)分別在涂片1、2上滴加甲苯胺

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