生物制品分析概論

基本要求

1．掌握本類(lèi)藥物質(zhì)量檢驗(yàn)的基本程序與方法類(lèi)型。2．掌握HPLC法和酶活力測(cè)定法在本類(lèi)藥物測(cè)定中的應(yīng)用。3．熟悉本類(lèi)藥物的范圍、種類(lèi)、質(zhì)量控制的要點(diǎn)。4．了解本類(lèi)藥物含量測(cè)定的其他方法。返回第一頁(yè)第二頁(yè)，共80頁(yè)。一、防病、治病的三大藥源化學(xué)藥物、生物藥物、中藥

第一節(jié)概述BiopharmaceuticsorBiopharmaceuticals第二頁(yè)第三頁(yè)，共80頁(yè)。二、生物藥物的定義利用生物體、生物組織或組成生物體的各種成分，綜合利用生物學(xué)、微生物學(xué)、免疫學(xué)、物理化學(xué)和藥學(xué)的原理與方法制得的藥物。廣義的生物藥物：天然活性生物物質(zhì)、人工合成或半合成的天然物質(zhì)類(lèi)似物。第三頁(yè)第四頁(yè)，共80頁(yè)。三、生物藥物的發(fā)展第一代：利用生物材料加工制成的含有某些天然活性成分物質(zhì)與混合成分的粗提物制劑；垂體后葉粉及其注射液甲狀腺粉及其片劑胰酶及其腸溶片、腸溶膠囊第四頁(yè)第五頁(yè)，共80頁(yè)。三、生物藥物的發(fā)展第二代：根據(jù)生物化學(xué)和免疫學(xué)原理，應(yīng)用近代生化分離純化技術(shù)從生物體制取的具有針對(duì)性治療作用的特異生化成分；尿激酶、肝素鈉、胰島素人血白蛋白、人免疫球蛋白第五頁(yè)第六頁(yè)，共80頁(yè)。三、生物藥物的發(fā)展第三代：應(yīng)用生物工程技術(shù)生產(chǎn)的天然生理活性物質(zhì)，以及通過(guò)蛋白質(zhì)工程原理設(shè)計(jì)制造的具有比天然物質(zhì)更高活性的類(lèi)似物，或與天然物質(zhì)結(jié)構(gòu)不同的全新的藥理活性成分。重組人生長(zhǎng)激素、重組人IL-2第六頁(yè)第七頁(yè)，共80頁(yè)。四、生物藥物的分類(lèi)生化藥物生物合成藥物生物制品第七頁(yè)第八頁(yè)，共80頁(yè)。

1．生化藥物：

例：氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、酶等。

甘氨酸、丙氨酸五肽胃泌素硫酸魚(yú)精蛋白門(mén)冬酰胺酶、輔酶Q10第八頁(yè)第九頁(yè)，共80頁(yè)。2.生物合成藥物由微生物代謝所生成的藥物利用微生物及其酶轉(zhuǎn)化反應(yīng)共同完成的半合成藥物山梨醇木糖醇甘露醇枸櫞酸抗生素第九頁(yè)第十頁(yè)，共80頁(yè)。3.生物制品以微生物、細(xì)胞、動(dòng)物或人源組織和體液等為原料，應(yīng)用傳統(tǒng)技術(shù)或現(xiàn)代生物技術(shù)制成。疫苗抗病毒及抗血清血液制品重組DNA制品診斷制品等第十頁(yè)第十一頁(yè)，共80頁(yè)。疫苗類(lèi)藥物用病毒或立克次體接種于動(dòng)物、雞胚，或經(jīng)組織培養(yǎng)后加以處理制造而成。細(xì)菌類(lèi)疫苗病毒類(lèi)疫苗聯(lián)合疫苗雙價(jià)疫苗及多價(jià)疫苗第十一頁(yè)第十二頁(yè)，共80頁(yè)?？共《炯翱寡孱?lèi)藥物抗病毒：用細(xì)菌類(lèi)毒素或毒素免疫馬或其他大動(dòng)物所取得的免疫血清抗菌（抗病毒）血清：用細(xì)菌或毒素本身免疫馬或其他大動(dòng)物所取得的免疫血清抗體被動(dòng)免疫制劑第十二頁(yè)第十三頁(yè)，共80頁(yè)。血液制品由健康人的血液或經(jīng)特異免疫的人血漿，經(jīng)分離、提純或由重組DNA技術(shù)制成的血漿蛋白組分，以及血液細(xì)胞有形成分。主要用于臨床治療和被動(dòng)免疫預(yù)防人血白蛋白、人免疫球蛋白等第十三頁(yè)第十四頁(yè)，共80頁(yè)。重組DNA制品天然基因合成的核苷酸序列內(nèi)切酶連接酶載體重組的遺傳物質(zhì)導(dǎo)入到受體細(xì)胞增殖、表達(dá)分離純化目的產(chǎn)物第十四頁(yè)第十五頁(yè)，共80頁(yè)。重組DNA制品細(xì)胞因子類(lèi)生長(zhǎng)因子類(lèi)激素類(lèi)酶類(lèi)疫苗單克隆抗體第十五頁(yè)第十六頁(yè)，共80頁(yè)。診斷制品用于檢測(cè)相應(yīng)的抗原、抗體或機(jī)體免疫狀態(tài)的制品。毒素、診斷血清、分群血清、分型血清、因子血清、診斷菌液、抗原或抗體致敏血球、免疫擴(kuò)散板等體外診斷制品和體內(nèi)診斷制品第十六頁(yè)第十七頁(yè)，共80頁(yè)。五、中國(guó)生物制品的發(fā)展歷史我國(guó)第一所生物制品生產(chǎn)、研究機(jī)構(gòu)：中央防疫所（1919年）（北京生物制品研究所前身）50年代，先后成立了北京、武漢、長(zhǎng)春、成都、蘭州、上海6大衛(wèi)生部直屬的生物制品研究所以及中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院昆明醫(yī)學(xué)生物研究所、成都輸血研究所。一些常用的預(yù)防性制品和血液制品第十七頁(yè)第十八頁(yè)，共80頁(yè)。五、中國(guó)生物制品的發(fā)展歷史60年代初成立中國(guó)藥品生物制品檢定所80年代后，進(jìn)入高速發(fā)展期：出現(xiàn)大量生物制品企業(yè)；種類(lèi)、劑型快速增加；由預(yù)防性制品發(fā)展至診斷性制品，治療、保健性制品第十八頁(yè)第十九頁(yè)，共80頁(yè)。五、中國(guó)生物制品的發(fā)展歷史1956年成立衛(wèi)生部生物制品委員會(huì)1988年成立衛(wèi)生部生物制品標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)。在審批方面，為與化學(xué)藥、中藥區(qū)別，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局專(zhuān)門(mén)制定了《新生物制品審批辦法》第十九頁(yè)第二十頁(yè)，共80頁(yè)。六、生物藥物的特點(diǎn)1、生物體的基本生化成分2、分子量大、不確定：分子量測(cè)定3、結(jié)構(gòu)難確證4、需檢查生物活性5、要求安全性檢查6、需做效價(jià)測(cè)定7、全過(guò)程的質(zhì)量控制第二十頁(yè)第二十一頁(yè)，共80頁(yè)。生物制品的全程控制危險(xiǎn)因素：異源物質(zhì)、不穩(wěn)定、易受微生物污染全程質(zhì)量控制：原材料、生產(chǎn)過(guò)程、最終產(chǎn)品生物制品的生產(chǎn)特點(diǎn)：（1）來(lái)源于生物體（2）制造過(guò)程涉及生物材料和生物學(xué)特征（3）工藝存在易變性和安全性問(wèn)題第二十一頁(yè)第二十二頁(yè)，共80頁(yè)。生物制品的全程控制全程質(zhì)量控制尚無(wú)成熟的經(jīng)驗(yàn)與方法鑒定方法的獨(dú)特性生物制品安全性、有效性的保證：（1）嚴(yán)格遵守GMP標(biāo)準(zhǔn)（2）完善的制造檢定規(guī)程（3）各生產(chǎn)工序相適應(yīng)的檢定方法、標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則（SOP）藥品國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：法定技術(shù)依據(jù)、標(biāo)準(zhǔn)第二十二頁(yè)第二十三頁(yè)，共80頁(yè)。生物制品的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《生物制品及鑒定規(guī)程草案》（1952）《生物制品制造檢定規(guī)程》（1959）《中國(guó)生物制品規(guī)程》（第6版2000）《中華人民共和國(guó)藥典》（三部）（2005），收載101種生物制品第二十三頁(yè)第二十四頁(yè)，共80頁(yè)。各部藥典收載情況一部藥典：藥材及飲片、植物油脂和提取物、成方制劑和單味制劑等；二部藥典：化學(xué)藥品、抗生素、生化藥品、放射性藥品以及藥用輔料等；三部藥典：生物制品，包括疫苗、抗毒素及抗血清、重組DNA制品、體內(nèi)診斷制品等；第二十四頁(yè)第二十五頁(yè)，共80頁(yè)。項(xiàng)目：1.品名（中文通用名稱(chēng)、英文名稱(chēng)、漢語(yǔ)拼音）2.定義、組成及用途3.基本要求4.制造5.檢定（原液、半成品、成品）6.保存運(yùn)輸及有效期7.使用說(shuō)明（僅預(yù)防類(lèi)含此項(xiàng)）第二十五頁(yè)第二十六頁(yè)，共80頁(yè)。生物制品質(zhì)量控制的重點(diǎn)有效成分的統(tǒng)一性、結(jié)構(gòu)確證有效成分的均一性、純度檢驗(yàn)有害物質(zhì)及殘余雜質(zhì)的控制高效、靈敏的生物活性及比活性實(shí)驗(yàn)方法第二十六頁(yè)第二十七頁(yè)，共80頁(yè)。生化藥物和基因工程藥物質(zhì)量檢驗(yàn)的基本程序與方法鑒別試驗(yàn)雜質(zhì)檢查安全性檢查含量、效價(jià)測(cè)定第二十七頁(yè)第二十八頁(yè)，共80頁(yè)。鑒別試驗(yàn)理化鑒別試驗(yàn)

化學(xué)反應(yīng)法光譜鑒別法－UV色譜鑒別法－HPLC生物化學(xué)鑒別法

酶法電泳法-等電聚焦電泳、PAGE生物鑒別法對(duì)比吸收光譜和特征吸收的一致性對(duì)比色譜保留行為的一致性第二節(jié)鑒別試驗(yàn)第二十八頁(yè)第二十九頁(yè)，共80頁(yè)。（一）理化鑒別法1.化學(xué)鑒別法：

例：胰蛋白酶+對(duì)甲苯基磺酰-L-精氨酸甲酯鹽酸鹽

紫色第二十九頁(yè)第三十頁(yè)，共80頁(yè)。

2.紫外分光光度法蛋白質(zhì)的UV：芳香族氨基酸側(cè)鏈（主要是酪氨酸、色氨酸，其次是苯丙氨酸）重組人干擾素α1b、α2a、α2b最大吸收峰278nm±3nm；重組人促紅素：最大吸收279nm±2nm；最小吸收250nm±2nm；在320nm~360nm處無(wú)吸收峰第三十頁(yè)第三十一頁(yè)，共80頁(yè)。

3.高效液相色譜法主峰保留時(shí)間和肽圖的一致性結(jié)合N-末端氨基酸序列分析，是蛋白質(zhì)類(lèi)生物制品精確的鑒別方法第三十一頁(yè)第三十二頁(yè)，共80頁(yè)。高效液相色譜法：1、反相高效液相色譜法2、分子排阻色譜法毛細(xì)管電泳1、毛細(xì)管區(qū)帶電泳CZE第三十二頁(yè)第三十三頁(yè)，共80頁(yè)。重組人粒細(xì)胞集落刺激因子的肽圖分析1、RP-HPLC條件：VydacC18(150×4.6,5μm)MP:0.1%CF3COOH-CH3CNingradientelutionFR:0.5ml/minDW:214nm第三十三頁(yè)第三十四頁(yè)，共80頁(yè)。2、CZE條件：毛細(xì)管柱37cm×75μm，有效長(zhǎng)度30cmBuffer:0.05mol/L的磷酸鹽水溶液，pH5.8運(yùn)行電壓：12KVDW：214nm第三十四頁(yè)第三十五頁(yè)，共80頁(yè)。第三十五頁(yè)第三十六頁(yè)，共80頁(yè)。二、生化鑒別法1.酶法：例：尿激酶的鑒別氣泡上升法原理：激活第三十六頁(yè)第三十七頁(yè)，共80頁(yè)。

方法：取小試管，加入尿激酶巴比妥溶液、牛纖維蛋白原溶液，再依次加入牛纖維蛋白溶酶原溶液、牛凝血酶溶液，迅速搖勻，立即置37℃±0.5℃恒溫水浴保溫，記時(shí)。反應(yīng)系統(tǒng)在30～40秒內(nèi)凝結(jié)，凝結(jié)塊內(nèi)有氣泡生成，15分鐘內(nèi)凝結(jié)塊溶解，當(dāng)凝結(jié)塊溶解時(shí)，氣泡逐漸上升。以0.9%氯化鈉作空白，同法操作，凝結(jié)塊在2小時(shí)內(nèi)不溶。第三十七頁(yè)第三十八頁(yè)，共80頁(yè)。2.電泳法：以肝素鑒別為例。與國(guó)家肝素標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，其移動(dòng)位置相應(yīng)。第三十八頁(yè)第三十九頁(yè)，共80頁(yè)。三.生物法：利用生物體進(jìn)行試驗(yàn)來(lái)鑒別藥物。例：家兔驚厥試驗(yàn)鑒別胰島素。利用胰島素的降糖作用。給家兔大劑量注射胰島素，家兔驚厥，迅速靜注50%葡萄糖注射液，驚厥停止。第三十九頁(yè)第四十頁(yè)，共80頁(yè)。雜質(zhì)檢查一般雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查安全性檢查第三節(jié)雜質(zhì)檢查第四十頁(yè)第四十一頁(yè)，共80頁(yè)。一、特殊雜質(zhì)檢查

特殊雜質(zhì)生物污染物產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)工藝添加劑第四十一頁(yè)第四十二頁(yè)，共80頁(yè)。生物污染物1、微生物2、細(xì)胞成分3、培養(yǎng)基成分4、有關(guān)大分子物質(zhì)宿主細(xì)胞、外源性DNA牛血清白蛋白重組制品中的鼠IgG第四十二頁(yè)第四十三頁(yè)，共80頁(yè)。產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)1、二聚體和多聚體2、脫氨或氧化產(chǎn)物3、突變物4、錯(cuò)誤裂解產(chǎn)物5、二硫化物異構(gòu)體第四十三頁(yè)第四十四頁(yè)，共80頁(yè)。工藝添加劑1、殘余抗生素2、蛋白分離劑（聚乙二醇、乙醇）3、佐劑氫氧化鋁4、產(chǎn)品穩(wěn)定劑（辛酸鈉、肝素）5、防腐劑（苯酚、間甲酚等）6、細(xì)菌與病毒滅活劑（甲醛等）第四十四頁(yè)第四十五頁(yè)，共80頁(yè)。特殊雜質(zhì)檢查1、宿主細(xì)胞蛋白殘留量的檢查目的：控制異源蛋白的含量以防超量后引起機(jī)體免疫反應(yīng)測(cè)定法：酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法－ELISA2、外源性DNA殘留量的檢查目的：防止外源性DNA對(duì)人類(lèi)的危害測(cè)定法：分子雜交技術(shù)、基于DNA結(jié)合蛋白分析系統(tǒng)、實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)第四十五頁(yè)第四十六頁(yè)，共80頁(yè)。3、產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)的檢查－同系物、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物等測(cè)定法：HPLC和CE4、殘余抗生素的檢查目的：控制生物制品制備時(shí)抗生素的用量測(cè)定法：抑菌試驗(yàn)第四十六頁(yè)第四十七頁(yè)，共80頁(yè)。安全性檢查常規(guī)熱原和細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查異常毒性試驗(yàn)過(guò)敏試驗(yàn)降壓物質(zhì)試驗(yàn)無(wú)菌試驗(yàn)一些特殊污染物的檢查致突變?cè)囼?yàn)生殖毒性試驗(yàn)二、安全性檢查第四十七頁(yè)第四十八頁(yè)，共80頁(yè)。異常毒性試驗(yàn)：是用一定劑量的藥物按照指定的操作方法和途徑給予規(guī)定體重的某試驗(yàn)動(dòng)物，觀察其極性毒性反應(yīng)。小鼠、LD50過(guò)敏試驗(yàn)：是對(duì)生化藥物和基因工程藥物中的異性蛋白進(jìn)行進(jìn)檢查。豚鼠、皮膚過(guò)敏和腹腔注射降壓物質(zhì)檢查：檢查藥物中能夠?qū)е卵獕航档偷奈镔|(zhì)，如組胺類(lèi)。貓或狗第四十八頁(yè)第四十九頁(yè)，共80頁(yè)。無(wú)菌檢查：對(duì)于不能進(jìn)行高溫滅菌的生物藥品，必須進(jìn)行無(wú)菌檢查。一些特殊污染物的檢查：主要考慮外源性DNA、一些雜蛋白等。致突變?cè)囼?yàn)：回復(fù)突變?cè)囼?yàn)、染色體畸變?cè)囼?yàn)等生殖毒性試驗(yàn)第四十九頁(yè)第五十頁(yè)，共80頁(yè)。含量測(cè)定HPLCSDSUVorFluorescence效價(jià)測(cè)定第四節(jié)含量（效價(jià)）測(cè)定第五十頁(yè)第五十一頁(yè)，共80頁(yè)。常用的定量分析方法及應(yīng)用理化分析法生化分析法生物檢定法第五十一頁(yè)第五十二頁(yè)，共80頁(yè)。理化分析法化學(xué)分析方法電化學(xué)分析法光譜分析法色譜分析法重量法容量分析法第五十二頁(yè)第五十三頁(yè)，共80頁(yè)。重量法：根據(jù)樣品中分離出來(lái)的單體或化合物的重量測(cè)定所含成分的含量的方法。提取法：用適宜的溶劑提取樣品中的某成分后揮去溶劑進(jìn)行測(cè)定的方法。揮發(fā)法：利用被測(cè)組分的揮發(fā)性，或經(jīng)過(guò)衍生化后將其轉(zhuǎn)化成揮發(fā)性物質(zhì)來(lái)進(jìn)行測(cè)定的方法。沉淀法：將被測(cè)組分轉(zhuǎn)化成沉淀，稱(chēng)定沉淀的重量來(lái)計(jì)算含量的方法。第五十三頁(yè)第五十四頁(yè)，共80頁(yè)。容量法：胰酶中胰淀粉酶的測(cè)定：氧化還原滴定。淀粉溶液（底物）+胰淀粉酶→還原糖，碘量法測(cè)定還原糖。胰酶中胰脂肪酶的測(cè)定：酸堿滴定法。橄欖油乳液（底物）+胰脂肪酶→脂肪酸，氫氧化鈉滴定。第五十四頁(yè)第五十五頁(yè)，共80頁(yè)。

藥物膜電極

生物組織膜電極

藥物電極微生物電極

離子選擇性電極法免疫電極

免疫場(chǎng)效應(yīng)管

酶電極

電化學(xué)分析法第五十五頁(yè)第五十六頁(yè)，共80頁(yè)。比色法

利用樣品與顯色劑發(fā)生現(xiàn)色反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)產(chǎn)物的顏色強(qiáng)度來(lái)測(cè)定含量。Elson-Morgan

硫酸軟骨素的比色法測(cè)定：在酸性條件下使樣品水解成氨基己糖，再在堿性條件下與乙酰丙酮和二甲氨基苯甲醛反應(yīng)生成紅色的產(chǎn)物，該產(chǎn)物在525nm處有最大吸收。光譜分析方法第五十六頁(yè)第五十七頁(yè)，共80頁(yè)。具體試驗(yàn)操作：1、制備對(duì)照品溶液－氨基葡萄糖2、制備供試品溶液－硫酸軟骨素3、反應(yīng)和測(cè)定－縮合反應(yīng)和比色測(cè)定A平為供試品溶液的吸收度As平為對(duì)照品溶液的吸收度Ws為對(duì)照品溶液的濃度（mg/ml）W為稱(chēng)樣量（mg）0.8309為校正因子500為稀釋倍數(shù)以氨基葡萄糖計(jì)≥24.0％第五十七頁(yè)第五十八頁(yè)，共80頁(yè)。色譜法

1）RP-HPLC：反相高效液相色譜法

色譜柱柱：C8，18烷基硅烷鍵合相；

流動(dòng)相：甲醇（或乙腈）－水（或緩沖液）

梯度洗脫

檢測(cè)器：紫外、熒光檢測(cè)器；電化學(xué)檢測(cè)器

應(yīng)用：肽類(lèi)、氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖的定量分析第五十八頁(yè)第五十九頁(yè)，共80頁(yè)。2）HPIEC：高效離子交換色譜（highperformance

ionexchangechromatography

）

應(yīng)用：蛋白質(zhì)，多肽的分離測(cè)定

色譜柱：離子交換鍵合相

流動(dòng)相：0.3mol/L～1.0mol/L的鹽的緩沖液。

梯度洗脫：鹽的濃度逐漸增大。盡量避免使用鹵素類(lèi)鹽

特點(diǎn)：可回收活性蛋白。第五十九頁(yè)第六十頁(yè)，共80頁(yè)。

3）HPGFC：高效凝膠過(guò)濾色譜法（highperformance

gelfiltrationchromatography

）

原理：分子篩效應(yīng)（根據(jù)分子大小分離）應(yīng)用：蛋白質(zhì)、多肽的分離及分子量測(cè)定。色譜柱：凝膠色譜柱

流動(dòng)相：水或緩沖液（常加入有機(jī)改性劑）

特點(diǎn)：活性蛋白可回收

第六十頁(yè)第六十一頁(yè)，共80頁(yè)。4）灌注色譜法（perfusionchromatography

）定義：使用具有“貫通孔”的填料使流動(dòng)相快速地貫穿填料顆粒流動(dòng)，從而加快填料內(nèi)傳質(zhì)過(guò)程的液相色譜方法。

固定相：聚苯乙烯二乙烯高度交聯(lián)結(jié)構(gòu)上構(gòu)成的貫穿孔顆粒(POROS)；顆粒分離介質(zhì)POROSR。雙模式孔結(jié)構(gòu)：80～150nm大擴(kuò)散孔600～800nm貫穿孔第六十一頁(yè)第六十二頁(yè)，共80頁(yè)。允許液體傳送流經(jīng)過(guò)分離介質(zhì)內(nèi)表面，使樣品由流動(dòng)相直接灌注入介質(zhì)顆粒中，擴(kuò)散作用不再是主要的。介質(zhì)顆粒內(nèi)部可利用反應(yīng)的表面積增加，容量和分辨率也隨之增加，可使生物活性大分子快速分離純化。應(yīng)用：基因工程藥物和其他大分子藥物的分離純化和分析。第六十二頁(yè)第六十三頁(yè)，共80頁(yè)。酶法1、酶活力法：以酶作為分析對(duì)象；2、酶分析法：以酶為分析工具或分析試劑；第六十三頁(yè)第六十四頁(yè)，共80頁(yè)。酶活力測(cè)定法

1）基本原理：

酶活力是指酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。酶活力測(cè)定實(shí)質(zhì)上是測(cè)定一個(gè)被酶所催化的化學(xué)反應(yīng)速度。酶反應(yīng)速度越快所表示的酶活力越高。

第六十四頁(yè)第六十五頁(yè)，共80頁(yè)?；盍挝唬▏?guó)際單位，IU）

在25℃，以最適當(dāng)?shù)牡孜餄舛?、最適當(dāng)?shù)木彌_液離子強(qiáng)度以及最適當(dāng)?shù)膒H等條件下，每分鐘能轉(zhuǎn)化1μmol底物的酶量。

比活性（IU/mg蛋白質(zhì)）

每1mg蛋白質(zhì)所含的酶單位數(shù)。第六十五頁(yè)第六十六頁(yè)，共80頁(yè)。

酶反應(yīng)速度可以用單位時(shí)間反應(yīng)底物的減少或產(chǎn)物的增加來(lái)表示。

通常酶活力測(cè)定時(shí)，先制備酶反應(yīng)進(jìn)程曲線(xiàn)和酶濃度曲線(xiàn)。通過(guò)酶反應(yīng)速度的測(cè)定，求得酶的濃度或含量。第六十六頁(yè)第六十七頁(yè)，共80頁(yè)。酶反應(yīng)進(jìn)程曲線(xiàn)

縱坐標(biāo)為底物或產(chǎn)物的變化量，橫坐標(biāo)為反應(yīng)時(shí)間，曲線(xiàn)斜率表示反應(yīng)速度。從酶反應(yīng)進(jìn)程曲線(xiàn)求得反應(yīng)的初速度。

酶濃度曲線(xiàn)

縱坐標(biāo)為反應(yīng)速度，橫坐標(biāo)為酶量。通過(guò)酶濃度曲線(xiàn)檢驗(yàn)反應(yīng)測(cè)定系統(tǒng)是否適宜。

第六十七頁(yè)第六十八頁(yè)，共80頁(yè)。

第六十八頁(yè)第六十九頁(yè)，共80頁(yè)。酶活力測(cè)定的要求：測(cè)得的反應(yīng)速度必須和酶濃度有線(xiàn)性的比例關(guān)系，這也是檢驗(yàn)酶反應(yīng)和測(cè)定系統(tǒng)是否適宜、正確的標(biāo)準(zhǔn)。

第六十九頁(yè)第七十頁(yè)，共80頁(yè)。2）酶促反應(yīng)的條件及影響因素

底物的濃度：一般選用底物的濃度[S]=100Km

pH：選用一個(gè)適宜的緩沖離子和離子強(qiáng)度、

適宜的pH值的緩沖系統(tǒng)來(lái)