臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)：7-不發(fā)酵革蘭陰性桿菌

不發(fā)酵革蘭陰性桿菌

Nonfermenters概念：是一大群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧的無(wú)芽胞革蘭陰性桿菌.一、概述二、銅綠假單胞菌三、嗜麥芽窄食單胞菌、不動(dòng)桿菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬、黃桿菌屬、莫拉菌屬和軍團(tuán)菌屬一、概述科、屬、種繁多。大多是條件致病菌。感染日益增多。一般不發(fā)酵葡萄糖，即使發(fā)酵，僅產(chǎn)生弱酸,或以氧化形式利用葡萄糖。生化特征相似。初步分群試驗(yàn)為：O/F試驗(yàn)、氧化酶和動(dòng)力觀察（在半固體中不顯，多用懸滴法）。在10+個(gè)菌屬中，最常見(jiàn)是假單胞菌屬，在該菌屬中以銅綠假單胞菌多見(jiàn)。常見(jiàn)不發(fā)酵革蘭陰性桿菌的初步分群鑒定二、銅綠假單胞菌

Pseudomonasaeruginosa

（一）生物學(xué)性狀1、形態(tài)與染色：G-b，一端有單鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑。有莢膜、無(wú)芽胞，臨床分離菌株有菌毛。2、培養(yǎng)特性：專(zhuān)性需氧，在普通培養(yǎng)基、血平板、MAC、SS上均可生長(zhǎng)，最適溫度為35℃，可產(chǎn)生銅綠色水溶性色素與帶熒光的水溶性熒光素，β溶血。生姜味。3、是醫(yī)院感染的常見(jiàn)病源，對(duì)多種抗生素耐藥。

4、生化反應(yīng)：分解糖的能力很弱，僅在O/F培養(yǎng)基氧化利用葡萄糖；氧化酶陽(yáng)性，大多分解尿素。5、抗原構(gòu)造與分型：O抗原、H抗原、S抗原(粘液Ag)和菌毛抗原等。

6、抵抗力：對(duì)理化因素的耐受性較強(qiáng)，耐干燥、紫外線，但不耐熱，56℃30min可滅活，1﹪石碳酸，5min即殺滅。O抗原可分為外膜蛋白和脂多糖，前者為保護(hù)型抗原，免疫性強(qiáng)，有屬的特異性；后者有型的特異性，可有用于分型。（二）臨床意義1、分布廣泛：自然界和人體2、致病物質(zhì)：粘附素、多糖莢膜、內(nèi)外毒素和多種侵襲酶。3、臨床感染類(lèi)型：繼發(fā)感染為主，條件致病菌。也是醫(yī)院感染的主要病原菌。人類(lèi)非發(fā)酵菌感染中，假單胞菌占70-80%。（三）微生物檢查1、標(biāo)本采集：常見(jiàn)傷口和燒傷感染的膿液、敗血癥的血液2、檢驗(yàn)程序：膿液，痰液，尿液，血液，糞便血平板，可疑菌落MAC、SS直接涂片G染色涂片G染色生化反應(yīng)（）3、檢查方法：（1）標(biāo)本直接檢查

顯微鏡檢：G-b，綠膿色素鑒別?？乖瓩z測(cè)：血清學(xué)，噬菌體分型。核酸檢測(cè)：指紋圖譜，PFGE，芯片，PCR等（2）分離培養(yǎng)

血平板：金屬光澤，特殊氣味，藍(lán)綠色素。MAC：微小無(wú)光澤半透明。48h后中心棕綠色。SS:微小無(wú)色半透明。類(lèi)似沙門(mén)菌。O/F實(shí)驗(yàn)，氧化酶，精氨酸水解、酰胺酶、葡萄糖酸氧化、42℃生長(zhǎng)、明膠液化、鞭毛檢測(cè)等（3）生化鑒定：4.結(jié)果分析應(yīng)結(jié)合臨床，標(biāo)本檢出率，耐藥性等進(jìn)行分析。其他假單胞菌也可從患者血，尿，痰液等標(biāo)本及醫(yī)院環(huán)境中分離出來(lái)：熒光假單胞菌，惡臭假單胞菌，斯氏假單胞菌。三、嗜麥芽窄食單胞菌P142Stenotrophmomasmaltophilia（一）分類(lèi)：為窄食單胞菌屬。近期發(fā)現(xiàn)一個(gè)新的菌種。（二）臨床意義：臨床感染率僅次于銅綠假單胞菌和鮑曼不動(dòng)桿菌，近年有上升趨勢(shì)，主要引起呼吸道、尿道和傷口感染。（三）微生物特性：革蘭陰性短桿菌，一端叢鞭毛，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜。普通培養(yǎng)基上菌落中等大小、光滑濕潤(rùn)、呈黃色。生化反應(yīng)較特殊，氧化酶陰性，注意與腸桿菌區(qū)別。（四）微生物鑒定：1、標(biāo)本采集：據(jù)感染部位采取適當(dāng)標(biāo)本，血液標(biāo)本應(yīng)先增菌。2、分離培養(yǎng)與鑒定：G-b

1）分離培養(yǎng)：在血平板與普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，菌落中等大小、圓形、光滑、濕潤(rùn)，產(chǎn)生不溶血的黃色色素；2）生化鑒定：氧化酶陰性，液化明膠，水解七葉苷，賴(lài)氨酸脫羧酶陽(yáng)性，氧化分解麥芽糖；3）藥物敏感試驗(yàn)：含β-內(nèi)酰胺酶，臨床治療首選磺胺類(lèi)（TMP/SMZ）、喹諾酮類(lèi)、環(huán)丙沙星等。對(duì)亞胺培南（β-內(nèi)酰胺酶抑制劑）天然耐藥。四、其他常見(jiàn)非發(fā)酵菌除外假單胞菌屬，臨床常分離到的非發(fā)酵菌還有不動(dòng)桿菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬、黃桿菌屬、莫拉菌屬和軍團(tuán)菌屬等。（一）不動(dòng)桿菌屬Acinetobacter是一群不發(fā)酵糖類(lèi)，氧化酶陰性，無(wú)動(dòng)力的革蘭陰性桿菌，常見(jiàn)菌種有：醋酸鈣不動(dòng)桿菌、鮑曼不動(dòng)桿菌等。1、臨床意義：發(fā)病率僅次于假單胞菌屬，為條件致病菌。2、生物學(xué)特性：G-b（圖9-6），不易脫色。專(zhuān)性需氧菌，常成雙排列也可鏈狀。3、微生物學(xué)鑒定：分離培養(yǎng)（圖9-7）與生化鑒定，注意與腸桿菌科的細(xì)菌鑒別（因?yàn)檠趸戈幮裕?。Iso15189認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)化操作血液，尿液，痰等MAC粉紅色菌落或血瓊脂平板灰白色菌落氧化酶試驗(yàn)陰性儀器鑒定或手工生化鑒定并做藥敏試驗(yàn)不動(dòng)桿菌科（二）產(chǎn)堿桿菌屬

Alcaligemes

醫(yī)院感染的病原菌之一。為革蘭陰性短桿菌，有動(dòng)力，專(zhuān)性需氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基可以培養(yǎng)。氧化酶陽(yáng)性，不分解任何糖類(lèi)，除能利用檸檬酸鹽和部分菌株能還原硝酸鹽外，多數(shù)生化反應(yīng)陰性。正常菌群。臨床分離最常見(jiàn)的是糞產(chǎn)堿桿菌（模式菌）。Iso15189認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)化操作血液，尿液，痰等MAC無(wú)色透明菌落，血瓊脂平板灰白色氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性儀器鑒定或手工生化鑒定并做藥敏試驗(yàn)產(chǎn)堿桿菌科無(wú)動(dòng)力，產(chǎn)生黃色色素的革蘭陰性桿菌。分布廣泛，常從食品中檢出，引起食物中毒、敗血癥等，是一種條件致病菌。引起新生兒化膿性腦膜炎。1、生物學(xué)特性:G-b，無(wú)特殊構(gòu)造，需氧，氧化酶+，觸酶+，磷酸酶+。2、微生物學(xué)鑒定：G-b、分離培養(yǎng)、生化（表9-8）。（三）黃桿菌屬FlavobacteriumIso15189認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)化操作血液，尿液，痰等血瓊脂平板呈黃色菌落氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性儀器鑒定或手工生化鑒定并做藥敏試驗(yàn)金黃桿菌科（四）莫拉菌屬

Moraxella1.分類(lèi)：

1994年把莫拉菌屬歸于奈瑟菌科，莫拉菌屬又分為莫拉亞屬和布蘭漢亞屬。醫(yī)學(xué)上重要的莫拉菌有9種。今年來(lái)，卡他莫拉菌引起的疾病逐年上升。

2.微生物特征：革蘭陰性球桿菌，大多有莢膜，專(zhuān)性需氧，營(yíng)養(yǎng)要求高，在血平板上生長(zhǎng)良好，無(wú)色，菌落大，不溶血。氧化酶為陽(yáng)性，觸酶陽(yáng)性，不分解糖類(lèi)，吲哚陰性，H2S陰性。3.臨床意義：是粘膜表面的正常菌群，致病性較低，一般位于呼吸道，較少位于生殖道，偶爾可致全身化膿性感染。

4.微生物鑒定：革蘭陰性球桿菌、分離培養(yǎng)與生化試驗(yàn)。Iso15189認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)化操作血液，尿液，痰等血瓊脂平板灰白色菌落，不溶血氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性儀器鑒定或手工生化鑒定并做藥敏試驗(yàn)報(bào)告結(jié)果（五）軍團(tuán)菌屬Legionella1、命名與分類(lèi)：軍團(tuán)菌屬是1976在美國(guó)費(fèi)城舉行退伍軍人集會(huì)期間爆發(fā)的不明原因的流行病，以發(fā)熱、咳嗽為主的呼吸道感染，與會(huì)者149人發(fā)病，其他人員72人發(fā)病，34人死亡。1978年美國(guó)CDC及WHO在亞特蘭大正式命名為軍團(tuán)桿菌。1994年定為軍團(tuán)菌科，軍團(tuán)菌屬。時(shí)有新種發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有45種，60多個(gè)血清型。

2、臨床意義：該菌存在于水和土壤中，常經(jīng)供水系統(tǒng)、溶洞和霧化吸入而引起肺炎型和非肺炎型感染。肺炎型（重癥）主要由嗜肺軍團(tuán)菌引起，潛伏期2~10天，除呼吸道癥狀外還有明顯的多器官損害，頭痛、發(fā)熱、伴消化道及神經(jīng)系統(tǒng)癥狀及體征，致死率高。3、微生物特征：軍團(tuán)菌屬的細(xì)菌為革蘭陰性桿菌，有動(dòng)力，專(zhuān)性需氧，同時(shí)環(huán)境中還需2.5﹪~5.0﹪CO2，最適pH6.4~7.2，最適生長(zhǎng)溫度35℃，營(yíng)養(yǎng)要求苛刻，普通培養(yǎng)基、血平板和巧克力平板均不生長(zhǎng)，最適培養(yǎng)基是BCYEa（活性炭-酵母浸液瓊脂培養(yǎng)基），生長(zhǎng)緩慢。4、微生物檢驗(yàn)：1）標(biāo)本采集：根據(jù)臨床感染部位采取適當(dāng)合格的標(biāo)本，病理組織標(biāo)本和環(huán)境污染標(biāo)本。

2）檢驗(yàn)方法：

直接涂片染色鏡檢：革蘭染色意義不大。

分離培養(yǎng)：營(yíng)養(yǎng)要求苛刻、生長(zhǎng)緩慢。需一定濕度，適溫為35~37℃，在BCYEa（活性碳-酵母浸液瓊脂）上3~5天可形成1~2mm有光澤菌落。污染標(biāo)本可用選擇培養(yǎng)基進(jìn)行分離培養(yǎng)。

3）免疫學(xué)檢