第二章 提取分離和鑒定的方法2

第二章提取分離和鑒定方法第二章提取分離和鑒定方法第一節(jié)天然藥物有效成分的提取第二節(jié)天然藥物有效成分的分離與純化第三節(jié)結(jié)構(gòu)研究方法（四大光譜）第一節(jié)天然藥物有效成分的提?。ǔＳ玫娜軇┑男再|(zhì)）環(huán)己烷，石油醚，苯，氯仿，乙醚，乙酸乙酯，正丁醇，丙酮，乙醇，甲醇極性：小大親脂性：大小親水性：小大

1、比水重的有機(jī)溶劑：氯仿2、與水分層的有機(jī)溶劑：環(huán)己烷~正丁醇3、能與水分層的極性最大的有機(jī)溶劑：正丁醇4、與水可以以任意比例混溶的有機(jī)溶劑：丙酮~甲醇5、極性最大的有機(jī)溶劑：甲醇6、極性最小的有機(jī)溶劑：環(huán)己烷7、常用來從水中萃取苷類、水溶性生物堿類成分的有機(jī)溶劑：正丁醇8、溶解范圍最廣的有機(jī)溶劑：乙醇第一節(jié)天然藥物有效成分的提?。ǔＲ姷奶崛》椒ǎ?、溶劑提取法（浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法、連續(xù)回流提取法等）2、水蒸氣蒸餾法3、升華法。1、溶劑提取法（1）溶劑提取法的原理：相似相溶原理（2）各種溶劑提取法溶劑提取法一般包括浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法、連續(xù)回流提取法等，其使用范圍及特點(diǎn)見下表。第一節(jié)天然藥物有效成分的提?。ǔＲ姷奶崛》椒ǎ┨崛》椒ㄈ軇┎僮魈崛⌒适褂梅秶鷤渥⒔n法水或有機(jī)溶劑不加熱效率低各類成分，尤遇熱不穩(wěn)定成分出膏率低，易發(fā)霉，需加防腐劑滲漉法有機(jī)溶劑不加熱—脂溶性成分消耗溶劑量大，費(fèi)時(shí)長(zhǎng)煎煮法水直火加熱—水溶性成分易揮發(fā)、熱不穩(wěn)定不宜用回流提取法有機(jī)溶劑水浴加熱—脂溶性成分熱不穩(wěn)定不宜用，溶劑量大連續(xù)回流提取法有機(jī)溶劑水浴加熱節(jié)省溶劑、效率最高親脂性較強(qiáng)成分用索氏提取器，時(shí)間長(zhǎng)1、溶劑提取法第一節(jié)天然藥物有效成分的提取（常見的提取方法）2、水蒸氣蒸餾法適用于具有揮發(fā)性、能隨水蒸汽蒸餾而不被破壞、難溶或不溶于水的成分的提取，如揮發(fā)油、小分子的香豆素類、小分子的醌類成分。3、升華法：固體物質(zhì)受熱不經(jīng)過熔融，直接變成蒸汽，遇冷后又凝固為固體化合物，稱為升華。中草藥中有一些成分具有升華的性質(zhì)，可以利用升華法直接自中草藥中提取出來。如樟腦、咖啡因。

第一節(jié)天然藥物有效成分的提?。ǔＲ姷奶崛》椒ǎ┑诙?jié)天然藥物有效成分的分離與純化1、根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離；2、根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離；3、根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進(jìn)行分離；4、根據(jù)物質(zhì)分子大小進(jìn)行分離；5、根據(jù)物質(zhì)解離程度不同進(jìn)行分離；6、根據(jù)物質(zhì)的沸點(diǎn)進(jìn)行分離。2.1物質(zhì)溶解度差別1、結(jié)晶及重結(jié)晶法

2、溶劑分離法

利用不同溫度可引起物質(zhì)溶解度的改變的性質(zhì)以分離物質(zhì)。結(jié)晶:將不是結(jié)晶狀態(tài)的固體物質(zhì)處理成結(jié)晶狀態(tài)的操作；重結(jié)晶:將不純的結(jié)晶進(jìn)一步精制成較純的結(jié)晶的過程。1、結(jié)晶及重結(jié)晶法

2、溶劑分離法

（1）溶劑選擇的一般原則：不反應(yīng)；冷時(shí)對(duì)所需要的成分溶解度較小，而熱時(shí)溶解度較大；對(duì)雜質(zhì)溶解度很大或很?。环悬c(diǎn)低，易揮發(fā)；無毒或毒性小。若無理想的單一溶劑時(shí)，可以考慮使用混合溶劑。一般常用甲醇、丙酮、氯仿、乙醇、乙酸乙酯等。

2.1物質(zhì)溶解度差別（2）結(jié)晶操作：結(jié)晶操作實(shí)際是進(jìn)一步分離純化過程，一般是應(yīng)用適量的溶劑在加熱至沸點(diǎn)的情況下將化合物溶解，制成過飽和溶液，趁熱過濾去除不溶性雜質(zhì)，放置冷處，以析晶。1、結(jié)晶及重結(jié)晶法

2、溶劑分離法

2.1物質(zhì)溶解度差別（3）結(jié)晶純度的判定：結(jié)晶形態(tài)和色澤：?jiǎn)我换衔锏慕Y(jié)晶具有結(jié)晶形狀均一和均勻的色澤。熔點(diǎn)和熔距：?jiǎn)我换衔锞哂幸欢ǖ娜埸c(diǎn)和較小的熔距，結(jié)晶前后的熔點(diǎn)應(yīng)一致，熔距很窄，在1℃

2℃的范圍內(nèi)。但要注意雙熔點(diǎn)，如漢防己乙素、芫花素及一些與糖結(jié)合的苷類化合物。色譜法：?jiǎn)我换衔镌诒由V或紙色譜層析中經(jīng)三種不同的溶劑系統(tǒng)展開，均為一個(gè)斑點(diǎn)者。1、結(jié)晶及重結(jié)晶法

2、溶劑分離法

2.1物質(zhì)溶解度差別1、結(jié)晶及重結(jié)晶法

2、溶劑分離法

（1）在中草藥提取液中加入另一種溶劑以改變混合物溶劑的極性，使一部分物質(zhì)沉淀析出，從而實(shí)現(xiàn)分離。如：水—醇法除多糖、蛋白質(zhì)等水溶性雜質(zhì)；醇—水法除樹脂、葉綠素等水不溶性雜質(zhì)；醇—醚法或醇—丙酮法使苷類成分，而脂溶性樹脂等雜質(zhì)則存留在母液中。2.1物質(zhì)溶解度差別（2）對(duì)酸性、堿性或兩性有機(jī)化合物來說，通常通過加入酸、堿以調(diào)節(jié)溶液的pH，以改變分子的存在狀態(tài)（游離型或解離型），從而改變?nèi)芙舛榷鴮?shí)現(xiàn)分離。如：酸提堿沉法，堿提酸沉法等。1、結(jié)晶及重結(jié)晶法

2、溶劑分離法

2.1物質(zhì)溶解度差別（3）沉淀法：酸性或堿性化合物還可通過加入某種沉淀試劑使之生成水不溶性的鹽類沉淀等析出。如加入鉛鹽、雷氏銨鹽等。1、結(jié)晶及重結(jié)晶法

2、溶劑分離法

2.1物質(zhì)溶解度差別第二章提取分離和鑒定方法2.2物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同1．兩相溶劑萃取法2．液—液分配柱色譜3．加壓相色譜法1．兩相溶劑萃取法（1）原理：利用混合物中各成分在兩相互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而實(shí)現(xiàn)分離。萃取時(shí)如果各成分在兩相溶劑中分配系數(shù)相差越大，則分離效率越高。2.2物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同1．兩相溶劑萃取法（2）各種萃取方法：①簡(jiǎn)單萃取：利用分液漏斗進(jìn)行兩相溶劑萃取。②逆流連續(xù)萃取法：是一種連續(xù)的兩相溶劑萃取法。其裝置可具有一根、數(shù)根或更多根的萃取管。2.2物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同1．兩相溶劑萃取法（2）各種萃取方法：③逆流分配法（CCD）：又稱逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法，與兩相溶劑逆流萃取法原理一致，對(duì)于分離具有非常相似性質(zhì)的混合物效果較好。2.2物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同1．兩相溶劑萃取法（2）各種萃取方法：④液滴逆流分配法（DCCC）：本法必須選用能生成液滴的溶劑系統(tǒng)，且對(duì)高分子化合物的分離效果較差，處理樣品量小，并要有一定的設(shè)備，操作較繁瑣。一般

50時(shí)，簡(jiǎn)單萃取即可分離，

50時(shí)，則易采用逆流分溶法。2.2物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同2．液—液分配柱色譜：原理：分配原理支持劑：硅膠、硅藻土、纖維素粉等正相分配色譜：

固定相：水、緩沖溶液流動(dòng)相：固定相飽和的氯仿、乙酸乙酯、丁醇等弱極性有機(jī)溶劑洗脫順序：化合物極性越小，越先出柱；反之，化合物極性越大，越后出柱。應(yīng)用：通常用于分離水溶性或極性較大的成分，如生物堿、苷類、糖類、有機(jī)酸等化合物。2.2物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同2．液—液分配柱色譜：應(yīng)用：通常用于分離水溶性或極性較大的成分，如生物堿、苷類、糖類、有機(jī)酸等化合物。2.2物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同3．液—液分配柱色譜：反相分配色譜：

固定相：石蠟油、化學(xué)鍵合固定相流動(dòng)相：固定相飽和的水或甲醇等強(qiáng)極性有機(jī)溶劑洗脫順序：化合物極性越大，越先出柱；反之，化合物極性越小，越后出柱。應(yīng)用：適合于分離脂溶性化合物，如高級(jí)脂肪酸、油脂、游離甾體等。2.2物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同常用反相硅膠薄層色譜及柱色譜的填料是普通硅膠經(jīng)下列方式進(jìn)行化學(xué)修飾，鍵合上長(zhǎng)度不同的烴基（R）、形成親油表面而成。其中以硅烷化鍵合型最為常用，其根據(jù)烴基（R）長(zhǎng)度（—C2H5、—C8H17、—C18H37、）分別命名為：RP—2、RP—8、RP—18。三者親脂性強(qiáng)弱順序如下：RP—18

RP—8

RP—2。鍵合固定相的作用并非只是分配，也有一定的吸附作用。2.2物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同加壓相色譜法又分為：快速柱色譜（約2.02

105Pa），Lobar低壓柱色譜（

5.05

105Pa），中壓柱色譜（5.05

20.2

105Pa），分析用HPLC，制備用HPLC（

20.2

105Pa）。固定相：RP—2、RP—8或RP—18流動(dòng)相：水—甲醇或水—乙腈洗脫順序：化合物極性越大，越先出柱；反之，化合物極性越小，越后出柱。應(yīng)用：通常用于分離水溶性或極性較大的成分，如苷類、酚性化合物等。3．加壓相色譜法2.2物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同2.3物質(zhì)的吸附性差別以固—液吸附用的最多;物理吸附（硅膠、氧化鋁、活性炭為吸附劑進(jìn)行的吸附色譜）;化學(xué)吸附（黃酮等酚酸性物質(zhì)被氧化鋁吸附、生物堿被酸性硅膠吸附等）;半化學(xué)吸附（聚酰胺與黃酮類、醌類等酚性化合物之間的氫鍵吸附，吸附力較弱，介于物理吸附與化學(xué)吸附之間）之分。1．物質(zhì)的吸附規(guī)律2．極性及其強(qiáng)弱判斷3．吸附柱色譜法用于物質(zhì)的分離4．聚酰胺吸附色譜法5．大孔吸附樹脂2.3物質(zhì)的吸附性差別1．物質(zhì)的吸附規(guī)律（1）物理吸附過程一般無選擇性，但吸附強(qiáng)弱大體遵循“相似者易于吸附”的經(jīng)驗(yàn)規(guī)律。（2）被分離的物質(zhì)與吸附劑、洗脫劑共同構(gòu)成吸附層析的三要素，彼此緊密相連。2.3物質(zhì)的吸附性差別1．物質(zhì)的吸附規(guī)律常用的非極性吸附劑：活性炭。對(duì)非極性物質(zhì)具有較強(qiáng)的親和力，在水中對(duì)溶質(zhì)表現(xiàn)出強(qiáng)的吸附能力。從活性炭上洗脫被吸附的物質(zhì)時(shí)，溶劑的極性越小，洗脫能力越強(qiáng)。2.3物質(zhì)的吸附性差別常用的極性吸附劑：硅膠、氧化鋁。硅膠顯微酸性，適于分離酸性和中性化合物，分離生物堿時(shí)需在流動(dòng)相中加入適量的有機(jī)堿；氧化鋁呈堿性，適于分離生物堿等堿性成分，不宜用于分離有機(jī)酸、酚性等酸性成分。1．物質(zhì)的吸附規(guī)律2.3物質(zhì)的吸附性差別硅膠、氧化鋁均為極性吸附劑，故有以下特點(diǎn)：①被分離物質(zhì)極性越強(qiáng)，吸附力越強(qiáng)。強(qiáng)極性溶質(zhì)將優(yōu)先被吸附。②溶劑極性越弱，則吸附劑對(duì)溶質(zhì)的吸附能力越強(qiáng)。隨溶劑極性的增強(qiáng)，則吸附劑對(duì)溶質(zhì)的吸附力將減弱。③當(dāng)加入極性較強(qiáng)的溶劑后，先前被硅膠或氧化鋁所吸附的溶質(zhì)可被置換而洗脫出來。1．物質(zhì)的吸附規(guī)律2.3物質(zhì)的吸附性差別2．極性及其強(qiáng)弱判斷（1）一般化合物的極性按下列官能團(tuán)的順序增強(qiáng)：—CH2—CH2—，—CH2=CH2—，—OCH3，—COOR，>C=O，—CHO，—NH2，—OH，—COOH（2）溶劑的極性可大體根據(jù)介電常數(shù)的大小來判斷。介電常數(shù)越大，則極性越大。一般溶劑的介電常數(shù)按下列順序增大：環(huán)己烷（1.88），苯（2.29），無水乙醚（4.47），氯仿（5.20），乙酸乙酯（6.11），乙醇（26.0），甲醇（31.2），水（81.0）2.3物質(zhì)的吸附性差別3．吸附柱色譜法用于物質(zhì)的分離以硅膠或氧化鋁為吸附劑進(jìn)行柱色譜分離時(shí)：（1）盡可能選用極性小的溶劑裝柱和溶解樣品，或用極性稍大的溶劑溶解樣品后，以少量吸附劑拌勻揮干，上柱。（2）一般以TLC展開時(shí)使組分Rf值達(dá)到0.2~0.3的溶劑系統(tǒng)作為最佳溶劑系統(tǒng)進(jìn)行洗脫。實(shí)踐中多用混合的有機(jī)溶劑系統(tǒng)。2.3物質(zhì)的吸附性差別2.3物質(zhì)的吸附性差別3．吸附柱色譜法用于物質(zhì)的分離（3）為避免化學(xué)吸附，酸性物質(zhì)宜用硅膠、堿性物質(zhì)宜用氧化鋁作為吸附劑進(jìn)行分離。通常在分離酸性（或堿性）物質(zhì)時(shí)，洗脫溶劑中常加入適量的醋酸（或氨、吡啶、二乙胺），以防止拖